Профессиональное решение
для инженеров-конструкторов и проектировщиков

     
ГОСТ Р 51258-99
(ДИН 10326-86)

Группа Н19

     

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ

Метод определения сахарозы и глюкозы

Milk and milk products. Method for determination of sucrose and glucose content



ОКС 67.100.10

ОКСТУ 9109

Дата введения 2000-01-01

     

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Московским государственным университетом пищевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 12 апреля 1999 г. N 120

3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст национального стандарта ФРГ ДИН 10326-86* "Ферментативное определение сахарозы и глюкозы в молочных продуктах и мороженом" с дополнительными требованиями, отражающими потребности народного хозяйства (разделы 2, 3, 4, 5, 6 и 7)

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ИЗДАНИЕ (август 2009 г.) с Поправкой (8-2009)

     1 Область применения


Настоящий стандарт распространяется на молоко, молочный напиток, молочные продукты, сладкий плавленый сыр и устанавливает метод определения массовых долей сахарозы и глюкозы в молоке и молочных продуктах.

(Поправка)

     2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 3652-69 Реактивы. Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия

ГОСТ 3769-78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4174-77 Реактивы. Цинк сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 4523-77 Реактивы. Магний сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу

     3 Определения, обозначения и сокращения

3.1 В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:

массовые доли сахарозы и глюкозы: Массовые доли сахарозы и глюкозы в молоке и молочных продуктах, определенные раздельно в соответствии с настоящим стандартом и выраженные в г/100 г.

3.2 В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения:

ФР - -фруктозидаза;

АТФ - аденозин-5'-трифосфат;

АДФ - аденозин-5'-дифосфат;

ГК - гексокиназа;

Г-6-Ф - глюкозо-6-фосфорная кислота;

Г6Ф-ДГ - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа;

НАДФ - -никотинамидадениндинуклеотидфосфат;

НАДФН - -никотинамидадениндинуклеотид (восстановленная форма);

ГЛ-6-Ф - глюконат-6-фосфорная кислота;

Е - международная единица, определяющая количество (активность) фермента, которое служит катализатором для превращения при 25°С 1 мкмоля вещества в минуту.

     4 Сущность метода и реакции

     

    4.1 Сущность метода


Метод определения глюкозы основан на фосфорилировании глюкозы, содержащейся в освобожденном от жира и белка водном экстракте пробы молока или молочных продуктов, под действием АТФ в присутствии фермента ГК, окислении образовавшейся Г-6-Ф под действием НАДФ в присутствии фермента Г6Ф-ДГ и фотометрическом измерении массовой доли образовавшегося НАДФН, эквивалентной массовой доле глюкозы в пробе (свободная глюкоза).

Метод определения сахарозы основан на гидролизе сахарозы, содержащейся в освобожденном от жира и белка водном экстракте пробы молока или молочных продуктов, в присутствии фермента ФР до глюкозы и фруктозы, фосфорилировании и окислении имеющейся в пробе глюкозы (общая глюкоза - свободная глюкоза плюс образовавшаяся при гидролизе сахарозы) под действием АТФ в присутствии фермента ГК, окислении образовавшейся Г-6-Ф под действием НАДФ в присутствии фермента Г6Ф-ДГ, фотометрическом измерении массовой доли образовавшегося НАДФН, эквивалентной массовой доле глюкозы, и расчете содержания сахарозы по разности оптических плотностей данного раствора и раствора, используемого при определении свободной глюкозы.

    4.2 Реакции


В фотометрической кювете протекают следующие ферментативные реакции:

сахароза+НОглюкоза+фруктоза;                                            (1)

     
глюкоза+АТФГ-6-Ф+АДФ;                                                         (2)

     
.                                       (3)

     

     5 Реактивы


При проведении анализа используют химически чистые или чистые для анализа реактивы.

Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть бидистиллированной.

Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб, должна быть дистиллированной по ГОСТ 6709 или деминерализованной.

Допускается использование имеющихся в продаже готовых наборов реактивов для определения сахарозы и глюкозы при условии соответствия их качества требованиям настоящего стандарта.

Препараты динатриевой соли -никотинамидадениндинуклеотидфосфата (-НАДФ-Na) и динатриевой соли аденозин-5'-трифосфата (АТФ-NаНО) должны содержать не менее 90% основного вещества.

    5.1 Раствор сернокислого цинка

30 г сернокислого цинка по ГОСТ 4174 (ZnSO7HO) растворяют в 100 см дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Раствор хранят при комнатной температуре 12 мес.

    5.2 Раствор гексациано-(II)-феррата калия

15 г гексациано-(II)-феррата (K[Fe(CH)3HO) калия растворяют в 100 см дистиллированной воды. Раствор хранят при температуре 4°С 1 мес.

    5.3 Раствор гидроокиси натрия

8 г гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 растворяют в 100 см дистиллированной воды. Раствор хранят при комнатной температуре 12 мес.

    5.4 Цитратный буферный раствор


4,55 г тринатрийцитрата дигидрата (CHONa2HO) и 3,45 г моногидрата лимонной кислоты по ГОСТ 3652 (CHOHO) растворяют в 70 см дистиллированной воды. Активную кислотность раствора устанавливают равной 4,6 рН раствором гидроокиси натрия по 5.3. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 100 см. Буферный раствор устойчив при температуре 4°С 12 мес.

5.5 Раствор ФР

Сухой лиофилизат -фруктозидазы из дрожжей массой 0,005 г и активностью 1500 Е растворяют в 2 см бидистиллированной воды. Конечная удельная активность раствора соответствует 750 Е/см. Раствор устойчив при температуре 4°С одну неделю.

    5.6 Буферный раствор триэтаноламина активной кислотностью 7,6 рН


14,0 г триэтаноламинагидрохлорида и 0,25 г сернокислого магния по ГОСТ 4523 (MgSO7HО) растворяют в 70 см дистиллированной воды. Активную кислотность раствора устанавливают равной 7,6 рН раствором гидроокиси натрия по 5.3. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 100,0 см. Буферный раствор устойчив при температуре 4°С 1 мес.

    5.7 Раствор НАДФ


0,06 г динатриевой соли -никотинамидадениндинуклеотидфосфата (-НАДФ-Na) растворяют в 6 см дистиллированной воды. Раствор устойчив при температуре 4°С 1 мес.

    5.8 Раствор АТФ


0,3 г динатриевой соли аденозин-5'-трифосфата (АТФ-NaНО) и 0,3 г гидрокарбоната натрия (NaHCO) растворяют в 6 см дистиллированной воды. Раствор устойчив при температуре 4°С 1 мес.

    5.9 Суспензия фермента ГК