ГОСТ 13056.5-76 Семена деревьев и кустарников. Методы фитопатологического анализа (с Изменением N 1)

3. МЕТОД ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ

3.1. Метод центрифугирования используют для ускоренного или предварительного фитопатологического анализа семян. Этим методом определяют только наличие спор грибов родов Alternaria, Fusarium, Helminthosporium, Stemphylium, Mycogone, Trichothecum, находящихся на поверхности семян.

3.2. Аппаратура, материалы и реактивы

3.2.1. Для проведения анализа применяют:

центрифугу;

микроскоп;

пипетки;

пробирки по ГОСТ 25336-82;

колбы плоскодонные по ГОСТ 25336-82;

стекла предметные по ГОСТ 9284-75;

стекла покровные по ГОСТ 6672-75;

воду стерилизованную или свежекипяченую.

3.3. Подготовка к анализу

3.3.1. Для анализа из разных мест среднего образца, отобранного по ГОСТ 13056.1-67, берут две пробы по 100 семян.

3.3.2. Колбы и пробирки обеззараживают в автоклаве под давлением 1,0 Па (кг/см) в течение 30 мин или под давлением 1,5 Па (кг/см) в течение 20 мин.

3.4. Проведение анализа

3.4.1. Пробы помещают в стерильные колбы, заливают 10-20 мл воды комнатной температуры и взбалтывают. Семена с гладкой поверхностью взбалтывают в течение 5 мин, с шероховатой - в течение 10 мин.

После взбалтывания суспензию от каждой пробы сливают в стерильные пробирки центрифуги, заполняя каждую пробирку на вместимости и подвергают центрифугированию в течение 3 мин. Частота вращения центрифуги должна быть 50-60 об/мин. Если в центрифуге не все пробирки заняты, то свободные пробирки заполняют для равновесия чистой водой до того же уровня. По окончании центрифугирования воду из каждой пробирки сливают, оставляя слой воды 1,5-2,0 см, осадок взмучивают и из него готовят пять препаратов. Для каждого препарата берут пипеткой одну каплю взвеси, помещают ее на предметное стекло и покрывают покровным стеклом.

3.5. Препараты просматривают под микроскопом по всей площади покровного стекла и устанавливают наличие спор и род грибов.