ГОСТ 25386-91 Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики лептоспироза
2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Серологический метод
Метод основан на обнаружении специфических антител в крови животных реакцией микроагглютинации (РМА) и реакцией иммуноадсорбции (РИА).
2.1.1. Реакция микроагглютинации
2.1.1.1. Аппаратура, материалы, реактивы
Термостат, обеспечивающий регулирование температуры на 28-30 °С.
Центрифуга со скоростью вращения не менее 10000 об/мин.
Микроскоп биологический по ГОСТ 8074.
Конденсор темного поля.
Осветитель с точечной лампой.
Стекла предметные толщиной 0,8-1,1 мм и покровные (стекла, используемые для микроскопии, должны быть бесцветными, прозрачными, чистыми, без царапин и бликов) по ГОСТ 9284.
Пластинки с лунками или пробирки Флоринского.
Штативы.
Пипетки градуированные вместимостью 1, 2, 5 и 10 см по ГОСТ 20292*.
_________________
* На территории Российской Федерации действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91. - Примечание изготовителя базы данных.
Аппарат Флоринского.
Петля бактериологическая.
Натрий хлористый х.ч. по ГОСТ 4233 или ч.д.а. 0,85%-ный раствор в дистиллированной воде. Раствор разливают во флаконы или бактериологические пробирки и стерилизуют в автоклаве при температуре 120 °С в течение 30 мин.
Антигены - живые культуры штаммов лептоспир, указаны в таблице.
Серогруппа | Серовар | Рекомендуемые штаммы* |
Pomons | pomona | Pomona |
Tarassovi | tarassovi | Perepelicin (Mitis Johnson) |
Grippotyphosa | grippotyphosa | Moskva V (Valbuzzi) |
Hebdomadis | kabura (borincana, hebdomadis) | Kabura (HS-22, Hebdomadis) |
Sejroe | polonica (sejroe, wolffi, hardjo) | 493 Poland (M-84, 3705, Hardjoprajitno) |
Mini | szwajizak | Szwajizak |
Icterohaemorrhagiae | copenhageni (icterohaemorrhagiae) | M-20, Waijnberg (RgA) |
Canicola | canicola | Hond Utrecht IV |
Bataviae | djatzi (bativiae) | HS-26 (Van Tienen) |
Javanica | poi (javanica) | Poi (Veldrat Dataviae 46) |
Australis | australis (bratislava) | Ballico (Iez Bratislava) |
Autumnalis | autumnalis (rachmat) | Akijami A (Rachmat) |
Ballum | ballum (castellonis) | Mus 127 (Castellon 3) |
Pyrogenes | pyrogenes | Salinem |
Cynopteri | cynopteri | Vleermuis 3568 (3522C) |
Panama | panama | СZ-214-К |
Celledoni | celledoni | Celledoni |
Shermani | shermani | LT-821 |
Djasiman | djasiman | Djasiman |
Sarmin | sarmin | Sarmin |
Louisiana | louisiana | LSU-1945 |
Ranarum | ranarum | ISF |
Manhao | manhao | L 105 |
________________
* В скобках приведены штаммы-аналоги. Кроме рекомендуемых могут быть использованы и другие штаммы лептоспир.
2.1.1.2. Подготовка к исследованию
Предметные и покровные стекла, не бывшие в употреблении, кипятят в мыльном растворе в течение 30 мин, промывают проточной водой, ополаскивают дистиллированной водой и насухо протирают.
Стекла после употребления опускают в эксикатор с 1%-ным раствором соляной кислоты или другим дезинфицирующим веществом. После накопления достаточного количества использованных стекол кислоту сливают, стекла промывают в проточной водопроводной воде, кипятят в мыльном растворе, промывают водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и протирают.
Пластины с лунками после проведения в них реакции опускают для обеззараживания в 1%-ный раствор соляной кислоты и выдерживают не менее 1 ч. Затем их промывают в теплой мыльной воде, протирают ершиком каждую лунку, тщательно отмывают в проточной водопроводной воде, заливают дистиллированной водой и выдерживают до следующего утра. Утром воду сливают и пластины просушивают.