Статус документа
Статус документа

ГОСТ 10444.11-89 Продукты пищевые. Методы определения молочнокислых микроорганизмов

3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

3.1. Приготовление растворов реактивов и индикаторов для испытания пищевых продуктов (кроме кисломолочных продуктов, заквасок, бактериальных концентратов и бактериальных препаратов молочнокислых бактерий)

3.1.1. Бромкрезоловый пурпурный индикатор, раствор массовой концентрацией 1 г/дм: 0,1 г бромкрезолового пурпурного с соблюдением правил асептики переносят, смывая стерильной дистиллированной водой, в мерную посуду вместимостью 100 см, доводят объем этой же водой до метки. Раствор хранят не более 3 мес при комнатной температуре.

3.1.2. Кальций углекислый, водная суспензия массовой концентрацией 30 г/дм: 3 г углекислого кальция, простерилизованного по ГОСТ 10444.1, переносят, смывая дистиллированной водой, в мерную посуду вместимостью 100 см, доводят объем до метки. Суспензию стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин. Суспензию хранят не более 3 мес при комнатной температуре.

3.1.3. Карболфуксин, концентрированный раствор: 1 г фуксина смешивают с 10 см 96%-ного этилового спирта и 100 см раствора фенола массовой концентрацией 50 г/дм.

Для приготовления рабочего раствора карболфуксина к 10 см концентрированного раствора карболфуксина добавляют 90 см дистиллированной воды.

3.1.4. Кристаллический фиолетовый раствор массовой концентрацией 10 г/дм: 1 г кристаллического фиолетового переносят, смывая дистиллированной водой, в мерную посуду вместимостью 100 см, объем доводят до метки. Раствор хранят не более 3 мес при комнатной температуре.

3.1.5. Нигрозина суспензия массовой концентрации 100 г/дм: 10 г нигрозина переносят, смывая дистиллированной водой, в мерную посуду вместимостью 100 см, объем доводят до метки, нагревают до температуры 45-50 °С на водяной бане, затем фильтруют через ватно-марлевый фильтр.

3.1.6. Пептонно-солевой раствор готовят по ГОСТ 26669.

3.1.7. Пептонную воду готовят по ГОСТ 26669.

3.1.8. Сорбиновая кислота, щелочной раствор: 1 г сорбиновой кислоты переносят, смывая раствором гидроокиси натрия NaOH=1 моль/дм, в мерную посуду вместимостью 100 см, объем доводят до метки тем же раствором. Полученный раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670.

Допускается готовить раствор сорбиновой кислоты без фильтрации с соблюдением правил асептики, при этом раствор гидроокиси натрия готовят на стерильной дистиллированной воде.

3.1.9. Реактив для определения цитохромов: 1 г бензидина основного или солянокислого растворяют в 20 см 99,8%-ной ледяной уксусной кислоты, добавляют 30 см дистиллированной воды и медленно нагревают, после охлаждения в раствор вносят 50 см96%-ного этилового спирта. Раствор хранят в холодильнике в течение 1 мес.

3.1.10. Физиологический раствор готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2. Приготовление питательных сред для испытания пищевых продуктов (кроме кисломолочных продуктов, заквасок, бактериальных концентратов и бактериальных препаратов молочнокислых бактерий)
     


3.2.1. Среду Бликфельдта плотную готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.2. Среда Бликфельдта жидкая: в 950 см дистиллированной воды растворяют 10 г лактозы, 10 г глюкозы, 5 г пептона, кипятят и фильтруют через бумажный фильтр. К фильтрату добавляют 20 см дрожжевого экстракта, 32 см раствора бромкрезолового пурпурного по п.3.1.1, устанавливают рН 7,3±0,1, разливают в стерильные пробирки и стерилизуют при температуре (117±1) °С в течение 20 мин.

3.2.3. Среда Бригс, в модификации Шарп:

в 875 см дистиллированной воды вносят 15 г пептона, 20 г глюкозы, 25 см дрожжевого экстракта, 5 г уксуснокислого натрия, 5 г калия фосфорнокислого однозамещенного, 2 г аммония лимоннокислого, 100 см томатного сока (в расчете на то, что в соке содержится не менее 4,5% растворимых сухих веществ, если в томатном соке содержится другое количество сухих веществ, то делают пересчет на содержание сухих веществ 4,5%), 1 см твина-80, 5 см раствора солей (MgSO·7НО - 11,5 г, MnSO·4НО - 2,86 г, FeSO·7НО - 0,68 г, дистиллированная вода до 100 см), 15 г агара.

Смесь кипятят на слабом огне до полного растворения агара. Устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С (6,5±0,1). Среду стерилизуют при температуре (115±1) °С в течение 15 мин.

3.2.4. Среда дрожжевая: в 100 см дрожжевого экстракта, приготовленного по ГОСТ 10444.1, добавляют 900 см дистиллированной воды, 10 г простерилизованного по ГОСТ 10444.1 углекислого кальция и 100 г сахарозы. Смесь нагревают до растворения сахарозы, устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С (7,1±0,1), разливают в пробирки по 10 см и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 15 мин.

3.2.5. Среду капустный агар готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.6. Среда МРС жидкая: в мерную колбу вместимостью 1,0 дм помещают 10 г пептона, 20 см дрожжевого экстракта, 20,0 г глюкозы, 1,0 см твин-80, 2,0 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 5,0 г натрия ацетата, 2,0 г триаммония цитрата, 0,2 г сульфата магния, 0,05 г сульфата марганца (MnSO·4НО), доливают до метки мясную воду; растворяют компоненты нагреванием на водяной бане и устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С (6,2±0,1). Среду разливают по 10 см в стерильные пробирки и стерилизуют в автоклаве при температуре (121±1) °С в течение 15 мин. Пробирки с питательной средой хранят при температуре (4±1) °С не более 30 сут.

3.2.7. Среду МРС агаризованную готовят по рецептуре, указанной в п.3.2.6, с добавлением 15-18 г агара. После растворения компонентов среду разливают в стерильные колбы и стерилизуют в автоклаве при температуре (121±1) °С в течение 15 мин. Готовую среду хранят при температуре (4±1) °С не более 30 сут.

При необходимости, для повышения селективности, после стерилизации к 1 дм агаризованной или жидкой среды добавляют 1 см щелочного раствора сорбиновой кислоты по п.3.1.8.

3.2.8. Среда мясо-пептонный бульон с рН 9,6:

в мясо-пептонном бульоне, приготовленном по ГОСТ 10444.1, устанавливают рН с помощью растворов щелочи и кислоты по ГОСТ 10444.1 таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 9,6. Среду стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.

3.2.9. Среду мясо-пептонный бульон с содержанием хлористого натрия 6,5% готовят по ГОСТ 10444.1, но при приготовлении увеличивают количество добавляемого хлористого натрия до 65 г на 1 дм среды.