ГОСТ Р 54949-2012
(ИСО 6867:2000)

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КОРМА ДЛЯ ЖИВОТНЫХ

Определение содержания витамина Е методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Animal feeding stuffs. Determination of vitamin E content by high-performance liquid chromatography method

ОКС 65.120

Дата введения 2013-07-01

Предисловие

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности" (ОАО "ВНИИКП") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 004 "Комбикорма, белково-витаминно-минеральные концентраты, премиксы"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 31 июля 2012 г. N 211-ст

4 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 6867:2000* "Корма для животных. Определение содержания витамина Е. Метод с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии" (ISO 6867:2000 "Animal feeding stuffs - Determination of vitamin E content - Method using high-performance liquid chromatography", MOD) путем изменения отдельных фраз, слов, наименований единиц измерения, ссылок, которые в тексте стандарта выделены курсивом**. При этом потребности национальной экономики Российской Федерации и особенности Российской национальной стандартизации учтены в дополнительных подразделах 5.8-5.19, которые выделены путем заключения их в рамки из тонких линий, а информация с объяснением включения этих положений приведена в виде примечания.

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей;     

** В оригинале обозначения и номера стандартов и нормативных документов в приложении ДА и отмеченные в разделе "Предисловие" знаком "**" приводятся обычным шрифтом, остальные по тексту документа выделены курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

Структура национального стандарта соответствует структуре международного стандарта, за исключением подразделов 5.4 и 8.3, которые разбиты на пункты для использования ссылок на описание прибора и повторяющиеся этапы испытаний соответственно, раздел 2 дополнен ссылками на национальные и межгосударственные стандарты для приведения в соответствие с правилами, установленными в ГОСТ Р 1.5 (подразделы 4.2 и 4.3), и сведениями о соответствии ссылочных национальных и межгосударственных стандартов международным стандартам, использованным в качестве ссылочных в примененном международном стандарте.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5-2012 (пункт 3.5).

Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой примененного в нем международного стандарта приведено в дополнительном приложении ДА

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

6 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июнь 2020 г.

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ "О стандартизации в Российской Федерации"**. Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на корма для животных и устанавливает метод определения содержания витамина Е (DL--токоферола) с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 51419 (ИСО 6498-98) Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Подготовка испытуемых проб (ИСО 6498:1998, MOD)

ГОСТ Р 51568 (ИСО 3310-1-90) Сита лабораторные из металлической проволочной сетки. Технические условия

ГОСТ Р 51652 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

________________

Действует ГОСТ 5962-2013.

ГОСТ Р 53228 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 4166 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия.

ГОСТ 6709 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9293 (ИСО 2435-73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 12026 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13496.0 Комбикорма, комбикормовое сырье. Методы отбора проб

ГОСТ 24363 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29227 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

     3 Сущность метода

Сущность метода заключается в омылении анализируемой пробы водно-спиртовым раствором гидроокиси калия, экстракции витамина Е петролейным эфиром, выпаривании петролейного эфира и растворении полученного остатка в гексане. Содержание витамина Е в гексановом экстракте определяют с помощью ВЭЖХ нормальными фазами, используя условия разделения DL--токоферола и других токоферолов, выраженное в международных единицах на килограмм (МЕ/кг).

     4 Реактивы

4.1 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

4.2 Калия гидроокись (КОН) по ГОСТ 24363, раствор с массовой долей 50%

500 г гидроокиси калия помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см (см. 5.17), растворяют в дистиллированной воде (см. 4.1) и доводят объем раствора дистиллированной водой до метки.

4.3 Спирт этиловый ректификованный () по ГОСТ Р 51652 объемной долей 95% или эквивалентный технический метилированный спирт.

4.4 Гексан специальной марки для ВЭЖХ.

4.5 Эфир петролейный, интервал температур кипения от 40°C до 60°C, остаток после выпаривания должен быть не более 20 мг/дм.

4.6 Стандартный образец витамина Е: DL--токоферол, чистотой не менее 96,0%. Чистота стандартного образца должна проверяться с помощью спектрофотометрического метода (см. 8.5.2).

4.7 1,4-диоксан специальной марки для ВЭЖХ.

4.8 Натрий сернокислый () по ГОСТ 4166, безводный.

4.9 Натрия аскорбат, раствор с массовой концентрацией c=100 г/дм.

4.10 Инертный газ, например, азот по ГОСТ 9293.

4.11 Подвижная фаза для жидкостной хроматографии

Смешивают 1,4-диоксан (см. 4.7) и гексан (см. 4.4) в соотношении 30:970 по объему. Смешанный раствор перед применением фильтруют через мембранный фильтр (см. 5.5).

4.12 Спирт этиловый ректификованный () по ГОСТ Р 51652 с объемной долей 96%.

4.13 Спирт метиловый () специальной марки для ВЭЖХ.

Примечание - Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.

     5 Средства измерений, оборудование и материалы

Используют обычное лабораторное оборудование и, в частности, следующее:

5.1 Хроматограф высокоэффективный жидкостный, состоящий из следующего оборудования:

5.1.1 Насос, установленный для подачи элюента с постоянной объемной скоростью 1,5 см/мин.

5.1.2 Устройство для ввода ВЭЖХ.

5.1.3 Колонка длиной 250 мм с внутренним диаметром 4,6 мм, набивная, неподвижная фаза состоит из кремнезема.

Колонка считается удовлетворительной, если число теоретических тарелок не менее 5000, значение коэффициента емкости равно 0,8 в отношении DL--токоферола. Рекомендуемый размер частиц от 5 до 10 мкм.

Допускается использовать другие системы при условии, что достигается удовлетворительное отделение витамина Е от других экстрагируемых с ним веществ.

5.1.4 Детектор, позволяющий производить измерение флуоресценции, испускаемой при длине волны 326 нм, если элюент колонки облучают ультрафиолетовым (УФ) светом при длине волны 293 нм, с интегратором (записывающим устройством).

5.2 Баня с кипящей водой.

5.3 Испаритель роторный вакуумный с водяной баней при температуре 40°C.

5.4 Аппарат для экстракции (см. рисунок 1), состоящий из следующего оборудования:

5.4.1 Цилиндр для экстракции вместимостью 1000 см со шлифом по ГОСТ 1770 и притертой пробкой.

5.4.2 Насадка, имеющая отводную трубку, обеспечивающая притертое соединение с цилиндром, оснащенная регулируемой сифонной трубкой (см. 5.4.3), проходящей по центру.

5.4.3 Трубка сифонная регулируемая с нижним концом U-образной формы для переноса верхнего слоя жидкости из цилиндра в делительную воронку вместимостью 1000 см.

1 - цилиндр со шлифом вместимостью 1000 см; 2 - слой петролейного эфира; 3 - водный слой с омыленной пробой корма; 4 - насадка, обеспечивающая притертое соединение с цилиндром; 5 - отводная трубка; 6 - регулируемая сифонная трубка

Рисунок 1 - Пример аппарата для экстракции