Статус документа
Статус документа

О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО

V. ПЦР с электрофоретической детекцией

5.1. Идентификация видоспецифичной растительной ДНК.

5.1.1. Идентификация ДНК сои, ген лектина:

- праймеры:

1) 5' GCC CTC TAC TCC ACC CCC ATC C 3',

2) 5' GCC CAT CTG CAA GCC TTT TTG TG 3';

- реакционная смесь для проведения ПЦР, рассчитанная на 10 проб:

Реактивы

Объем, мкл

Деионизированная вода

193,70

Буфер для ПЦР с MgCl (10х)

25,00

Смесь нуклеотидов (4 млM)

12,50

Праймер 1 (20 мкМ)

6,25

Праймер 2 (20 мкМ)

6,25

Taq-полимераза (5 единиц/мкл)

1,30

          

- реакционную смесь перемешать на вортекс, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, разлить в пробирки для проведения ПЦР по 24,0 мкл в каждую, добавить 1,0 мкл раствора ДНК в каждую пробирку, перемешать, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, при использовании амплификатора с крышкой без подогрева в каждую пробирку добавить каплю минерального масла;

- условия амплификации:

Стадия

Программа амплификации

Денатурация

3 мин/95°C,

Амплификация

30 сек/95°C, 30 сек/60°C, 40 сек/72°C,

Количество циклов амплификации

40

Конечное удлинение

3 мин/72°C

Фаза остывания

4°C


- после проведения амплификации пробы готовы для проведения электрофореза в агарозном геле, продукт амплификации - 118 пар нуклеотидов, приложение 2.1.

5.1.2. Идентификация ДНК кукурузы, ген зеина:

- праймеры:

1) 5' TGC TTG CAT TGT TCG CTC TCC TAG 3',

2) 5' GTC GCA GTG ACA TTG TGG CAT 3';

- реакционная смесь для проведения ПЦР, рассчитанная на 10 проб:

Реактивы

Объем, мкл

Деионизированная вода

193,70

Буфер для ПЦР с MgCl (10х)

25,00

Смесь нуклеотидов (4 мM)

12,50

Праймер 1 (20 мкМ)

6,25

Праймер 2 (20 мкМ)

6,25

Taq-полимераза (5 единиц/мкл)

1,30


- реакционную смесь перемешать на вортекс, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, разлить в пробирки для проведения ПЦР по 24,0 мкл в каждую, добавить 1,0 мкл раствора ДНК в каждую пробирку, перемешать, центрифугировать 30 секунд при 3000 об/мин, при использовании амплификатора с крышкой без подогрева в каждую пробирку добавить каплю минерального масла;

- условия амплификации:

Стадия

Программа амплификации

Денатурация

3 мин/95°C

Амплификация

1 мин/94°C, 1 мин/60°C, 1 мин/72°C

Количество циклов амплификации

40

Конечное удлинение

7 мин/72°C

Фаза остывания

4°C