ГОСТ 32636-2020

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА

Субхроническая ингаляционная токсичность: 90-дневное исследование

Methods of testing the impact of chemical products on the human body. Subchronic inhalation toxicity: 90-day study

МКС 75.080
         11.020

         11.120.01

Дата введения 2021-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием "Российский научно-технический центр информации по стандартизации, метрологии и оценке соответствия" (ФГУП "СТАНДАРТИНФОРМ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 июня 2020 г. N 131-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 21 октября 2020 г. N 889-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32636-2020 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2021 г.

5 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному документу OECD Test N 413:2018* "Руководство по испытанию химических веществ. Субхроническая ингаляционная токсичность: 90-дневное исследование" ("Guideline for testing of chemicals - Subchronic inhalation toxicity: 90-day study", MOD) путем:

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

- включения дополнительного раздела 1, дополнительных фраз, слов, выделенных в тексте курсивом*;

________________

* В оригинале обозначения и номера стандартов и нормативных документов приводятся обычным шрифтом. - Примечание изготовителя базы данных.

- изменения его структуры для приведения в соответствие с правилами, установленными в ГОСТ 1.5 (подразделы 4.2 и 4.3).

Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой указанного международного документа приведено в дополнительном приложении ДА.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6)

6 ВЗАМЕН ГОСТ 32636-2014

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Краткое описание

Настоящее пересмотренное руководство OECD Test N 413:2018 разработано для полной характеристики токсичности исследуемого химического вещества при ингаляционном поступлении в субхроническом исследовании продолжительностью 90 дней, а также для обеспечения надежными данными для количественных оценок риска вдыхания. Основной причиной для пересмотра указанного руководства было включение в испытания наноматериалов, а также отражение новейших достижений в области испытаний вдыхаемых газов, паров и аэрозолей. В измененной редакции прежде всего рассматриваются фактический план основного исследования, его зависимость от агрегатного состояния исследуемого химического вещества (газ, пар, жидкий аэрозоль или твердый аэрозоль) и от данных по определению диапазона доз или другой информации, указывающей на то, что исследуемое химическое вещество оседает и удерживается в легких, вызывая неблагоприятные локальные или системные эффекты. Основное исследование включает группы грызунов, состоящие не менее чем из 10 самцов и 10 самок, подвергающихся воздействию исследуемого химического вещества в течение 6 ч в день на протяжении 90-дневного (13-недельного) периода для трех или более уровней концентрации, а также отфильтрованного воздуха (отрицательный контроль) и среды (носителя) [контроль среды (носителя)]. Затем животных умерщвляют в течение 24 ч после окончания периода воздействия. Как правило, животных подвергают воздействию пять дней в неделю, но также допустимо воздействие в течение семи дней в неделю. Для всех исследуемых химических веществ проводят анализ жидкости бронхоальвеолярного лаважа (BALF). Для этого легкие разделяют: левое легкое используется для гистопатологии, правое - для анализа жидкости бронхоальвеолярного лаважа (BALF). Если планируются группы восстановления, их также подвергают бронхоальвеолярному лаважу (BAL) при разделении легких. Если исследуемое химическое вещество остается в легких, руководитель исследования может рассмотреть дополнительные периоды наблюдения после воздействия (РЕО), включающие измерения нагрузки на легкие, для получения информации о динамике очищения легких и перемещении веществ, причем последнее особенно актуально, если исследуемое химическое вещество представляет собой твердый наноматериал.

Для более полной характеристики токсичности исследуемого вещества настоящее руководство предлагает включать дополнительные необязательные исследования, такие как токсикокинетика и/или оценка системной токсичности (например, оценка иммунных, печеночных, неврологических и/или сердечно-сосудистых эффектов). Более подробные указания по проведению дополнительных наблюдений и их анализу приведены в [1].

Введение

Руководства Организации экономического сотрудничества и развития (OECD) периодически пересматривают с учетом научного прогресса или изменения норм оценки токсикологических реакций, необходимости гуманного отношения к животным и изменяющихся нормативных требований. Исходное руководство по исследованию субхронической ингаляционной токсичности OECD Test N 413 было принято в 1981 г. [2]. В 2009 г. оно было пересмотрено с учетом полученных научных данных для удовлетворения текущих и будущих потребностей нормативного регулирования. Основной причиной последнего пересмотра является обеспечение возможности испытания аэрозольных частиц, включая наноматериалы. Отмечено, что наночастицы и тонкодисперсные частицы существуют одновременно в виде непрерывной совокупности, и поэтому образцы искусственных наночастиц имеют тенденцию к агломерации в исследуемой атмосфере в зависимости от способа их получения, физических свойств и химического состава. Наиболее значимые особенности последней версии:

- пересмотренная редакция предусматривает выполнение соответствующих измерений жидкости бронхоальвеолярного лаважа (BALF) для всех исследуемых химических веществ путем разделения легких для гистопатологии и бронхоальвеолярного лаважа (BAL). Запланированная группа восстановления также должна включать анализ BALF;

- если исследование по подбору диапазона доз или другая соответствующая информация свидетельствуют, что частицы вдыхаемого исследуемого вещества плохо растворимы и будут удерживаться в легких, следует проводить измерение нагрузки на легкие, которые подтверждают осаждение и задержку частиц в легких. Анализ BALF и измерение нагрузки на легкие выполняют для всех исследуемых химических веществ в течение 24 ч после прекращения воздействия, а также могут быть проведены через один или два дополнительных интервала времени после воздействия (РЕО). Руководитель исследования определяет необходимость проведения дополнительных исследований после воздействия химических веществ и время проведения в соответствии с целями исследования и результатами определения диапазона доз и/или другой соответствующей информации (например, РЕО-1 - для определения удерживания в легких и РЕО-1, РЕО-2 и РЕО-3, если для оценки кинетики очищения необходимы результаты трех измерений нагрузки на легкие (см. приложение А и [1]);

- исследование (или исследования) по определению диапазона доз, которое проводят в основном исследовании для определения уровней концентрации, должно включать анализ BALF и дополнительно может включать измерения нагрузки на легкие. Оно может быть предназначено для получения информации о чувствительности функции легких в зависимости от пола животных, температуры тела и т.д., но должно быть тщательно спланировано и сбалансировано для предотвращения ошибок;

- по версии руководства OECD, Test N 413:2009 было необходимо, чтобы масс-медианный аэродинамический диаметр (MMAD) частиц аэрозоля был от 1 до 3 мкм с геометрическим стандартным отклонением ( или GSD) от 1,5 до 3,0. Для обеспечения исследования аэрозолей нанодиапазона и повышения способности к осаждению в легких следует по возможности соблюдать новый норматив: MMAD должен быть не более 2 мкм, а - от 1 до 3. Если этот норматив не может быть обеспечен, в отчете об исследовании должно быть представлено обоснование, включая описание мер, принятых для его достижения, таких как размол [1].

Результаты исследований субхронической ингаляционной токсичности используют в основном для установления нормативных требований к концентрации веществ при оценке профессиональных рисков для здоровья работников. Их также используют для определения и оценки рисков для человека при использовании в жилых помещениях, при транспортировании и для окружающей среды. Это руководство позволяет характеризовать побочные эффекты после многократного ежедневного вдыхания испытуемого химического вещества в течение 90 дней. Данные, полученные в исследовании субхронической ингаляционной токсичности, могут быть использованы для количественной оценки риска и выбора концентраций в хронических исследованиях. Определения специальных терминов, используемых в данном руководстве, приведены в [1].

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод 90-дневного исследования субхронической ингаляционной токсичности для получения полной характеристики токсичности исследуемого химического вещества при ингаляционном поступлении и представления надежных данных для количественной оценки риска при вдыхании газов, паров и аэрозолей.

Настоящий стандарт может быть также применен для исследования наноматериалов.

     2 Основные положения

2.1 Для повышения качества исследования и минимизации числа подопытных животных в испытательной лаборатории до начала исследования должна быть проанализирована вся имеющаяся информация об исследуемом химическом веществе. При выборе концентраций вещества для исследования следует использовать информацию, включающую идентификацию, химическую структуру и физико-химические свойства исследуемого химического вещества, результаты любых исследований токсичности in vitro или in vivo, предполагаемое(ые) использование(я) и вероятность воздействия на человека, имеющиеся данные количественной зависимости структура - активность [(Q)SAR] и данные о токсичности структурно родственных химических веществ, а также результаты других исследований повторного воздействия. При исследовании твердого аэрозоля необходимо иметь информацию о его задержке и кинетике в легких. Если в ходе исследования предполагают или наблюдают проявление системной токсичности (например, иммунотоксичность, нейротоксичность, гепатотоксичность, воздействие на сердечно-сосудистую систему), руководитель исследования может принять решение о необходимости включения оценки соответствующих токсикологических конечных точек. Несмотря на то, что для проведения дополнительных исследований может понадобиться значительное время, это не должно быть помехой для плана основного исследования.

2.2 Если исследуемое химическое вещество представляет собой аэрозоль из плохо растворимого(ых) материала(ов), следует по возможности определить размер частиц, морфологические и физико-химические характеристики, включая определение растворимости. Определение характеристик наноматериалов приведено в [3] и [4].

2.3 Вдыхаемая (или альвеолярная) фракция плохо растворимых частиц, которые медленно выводятся, может накапливаться с каждым последующим периодом воздействия. Степень задержки в легких можно оценить путем измерения нагрузки на легкие. Часть этих частиц может перемещаться и широко распространяться в организме. Измерения нагрузки на лимфатические узлы, связанные с легкими (LALN), могут указывать на транслокацию, что может быть дополнительно подтверждено измерениями нагрузки на орган-мишень. Эффекты любой транслокации могут быть оценены с учетом системной токсичности. Данные по нагрузке на легкие не исключают значимости результатов токсикологических исследований на подопытном животном для оценки риска для человека. Подробные указания приведены в [1].

2.4 Агрессивные или раздражающие химические вещества могут быть исследованы при разбавлении в концентрациях, обеспечивающих заданную степень токсичности. При воздействии исследуемых химических веществ на животных целевые концентрации должны быть достаточно низкими, чтобы не вызывать явной боли и дистресса, но достаточными для распространения кривой зависимости концентрация - ответ до уровней, которые достигают регуляторной и научной цели испытания. Концентрации следует выбирать в каждом конкретном случае, предпочтительно на основе надлежащим образом запланированного исследования по определению диапазона, которое позволит получить информацию о критической конечной точке, любом пороге раздражения и времени проявления (4.2.1, 4.2.2 и 4.3). Необходимо привести обоснование выбора концентрации.

2.5 Животные в состоянии агонии или животные, очевидно испытывающие боль или демонстрирующие признаки серьезного и стойкого дистресса, должны быть гуманно умерщвлены. Животных в состоянии агонии учитывают как животных, погибших во время испытания. Критерии для принятия решения об умерщвлении агонизирующих или тяжело страдающих животных, а также руководство по определению признаков предсказуемой или неминуемой смерти приведены в [5].

     3 Описание метода

3.1 Выбор видов животных

В качестве подопытных следует использовать молодых здоровых половозрелых грызунов обычно применяемых лабораторных линий. Предпочтительно использовать крыс. Использование животных других видов необходимо обосновать.

3.2 Подготовка животных

Самки должны быть нерожавшими и небеременными. На день отбора для проведения исследований возраст животных должен быть от семи до девяти недель. Масса тела должна быть в пределах ±20% средней массы тела животных каждого пола. Животных отбирают случайным образом, маркируют для индивидуальной идентификации и содержат в клетках не менее 5 дней до начала испытания для акклиматизации к лабораторным условиям.

3.3 Условия содержания животных

Животных следует идентифицировать индивидуально (предпочтительно с использованием подкожных микрочипов) для облегчения наблюдения и предотвращения путаницы. Температура в помещении с подопытными животными должна быть (22±3)°С. Относительная влажность должна поддерживаться в диапазоне от 30% до 70%. До и после воздействия животных, как правило, содержат в клетках группами одного пола и одной концентрации, но число животных в клетке не должно затруднять наблюдение за каждым животным и сводить к минимуму потери от каннибализма и грызни. Если животных подвергают воздействию только через нос, им может потребоваться привыкание к дыхательной трубке. Дыхательные трубки не должны вызывать у животных физический стресс или повышение температуры или приводить к потере подвижности. Если данные показывают, что подобные изменения не вызывают затруднений, то адаптация к дыхательным трубкам не является необходимой. Животных, все тело которых подвергают воздействию аэрозоля в камере, на время экспозиции следует размещать индивидуально для предотвращения фильтрования исследуемого аэрозоля через наружные покровы тела партнеров по клетке. Можно использовать обычные и проверенные лабораторные диеты, за исключением периода экспозиции исследуемого вещества, когда животное необходимо обеспечить неограниченным количеством питьевой воды. Освещение должно быть искусственным с чередованием периодов света (12 ч) и темноты (12 ч).

3.4 Ингаляционные камеры

Исследования субхронической ингаляционной токсичности обычно проводят в динамических ингаляционных камерах. Не допускается использовать статические ингаляционные камеры, в которых отсутствует воздушный поток. При выборе ингаляционной камеры следует учитывать свойства исследуемого химического вещества и цель испытания. Для исследования жидких или твердых аэрозолей и паров, которые могут конденсироваться с образованием аэрозолей, предпочтительный способ воздействия - только через нос (этот термин означает также: только через голову, только через нос или только через мордочку). Специальные цели исследования могут быть лучше достигнуты при использовании динамического режима воздействия на все тело, но такой способ воздействия должен быть обоснован в отчете об исследовании. Для обеспечения стабильности атмосферы при использовании камеры для всего тела общий объем подопытных животных не должен превышать 5% объема камеры. Способ воздействия только через нос и через все тело, а также их конкретные преимущества и недостатки приведены в [1].

     4 Исследование токсичности

4.1 Предельные концентрации

В отличие от исследований острой токсичности в исследованиях субхронической ингаляционной токсичности уровень предельных концентраций не установлен. При выборе максимальной концентрации исследуемого вещества следует учитывать: