ГОСТ 32636-2014     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА

Субхроническая ингаляционная токсичность: 90-дневное исследование

Methods of testing the chemicals of human hazard. Subchronic inhalation toxicity: 90-Day study

МКС 13.020.01

Дата введения 2015-06-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ" (ФГУП "ВНИЦСМВ"), Техническим комитетом по стандартизации ТК 339 "Безопасность сырья, материалов и веществ" на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 мая 2014 г. N 67-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 3 октября 2014 г. N 1269-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32636-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июня 2015 г.

5 5 Настоящий стандарт идентичен международному документу OECD, Test No. 413:2009* "Субхроническая ингаляционная токсичность: 90-дневное исследование" ("Subchronic Inhalation Toxicity: 90-Day Study", IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

     Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6)

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Май 2019 г.

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Введение

Данное пересмотренное Руководство по испытанию 413 (ТГ 413) было разработано для того, чтобы полностью охарактеризовать токсичность исследуемого препарата при ингаляционном поступлении в течение субхронического воздействия продолжительностью 90 дней, а также обеспечить надежными данными для количественных оценок риска вдыхания.

До проведения исследования в целях повышения качества исследования и минимизации используемых животных испытательной лаборатории должна быть рассмотрена вся доступная информация об исследуемом препарате. Информация, которая поможет в выборе подходящих концентраций испытания, может включать идентичность, химическую структуру и физико-химические свойства исследуемого препарата; результаты любых in vitro или in vivo испытаний токсичности; предполагаемое(-ые) использование(-я) и вероятное воздействие на человека; доступные данные (Q)SAR и токсикологические данные структурно родственных веществ; а также данные, полученные из других исследований повторного воздействия. Если в ходе исследования ожидается или наблюдается нейротоксичность, руководитель исследования может выбрать включение подходящих оценок, таких как функциональная наблюдательная батарея (ФНБ) и измерение двигательной активности. Хотя определение времени воздействия по отношению к конкретным исследованиям может быть критическим, выполнение этих дополнительных мероприятий не должно нарушать основной план исследования.

Растворы агрессивных или раздражающих исследуемых препаратов могут быть испытаны при концентрациях, которые дадут желаемую степень токсичности (см. GD 39 [3]). При воздействии этих препаратов на животных целевые концентрации должны быть достаточно низкими, чтобы не вызвать заметной боли и дистресса, но достаточными, чтобы продлить кривую "концентрация - ответ" до уровней, которые достигают регуляторной и научной цели испытания. Эти концентрации должны быть выбраны в индивидуальном порядке, предпочтительно на основе адекватно разработанного исследования по определению диапазона доз, которое дает информацию относительно критической конечной точки, любого порога раздражения и времени наступления. Основание для выбора концентрации должно быть предоставлено.

Умирающие животные или животные, явно испытывающие боль или показывающие признаки тяжелого и продолжительного дистресса, должны быть гуманно умерщвлены. Умирающих животных учитывают таким же образом, что и животных, которые умирают во время испытания. Критерии для принятия решения об умерщвлении умирающих или тяжело страдающих животных и рекомендации по распознаванию прогнозируемой или приближающейся смерти рассматриваются в руководящем документе ОЭСР о гуманных конечных точках [4].

     1 Область применения

Данное пересмотренное Руководство по испытанию 413 (ТГ 413) было разработано для того, чтобы полностью охарактеризовать токсичность исследуемого препарата при ингаляционном поступлении в течение субхронического воздействия продолжительностью 90 дней, а также обеспечить надежными данными для количественных оценок риска вдыхания. Группы из 10 самцов и 10 самок грызунов подвергаются 6 часов в день в течение 90 дней (13 недель) воздействию: а) исследуемого препарата при трех или более уровнях концентрации, б) отфильтрованного воздуха (негативный контроль) и/или с) растворителя (контроль растворителя). Животные, как правило, подвергаются воздействию 5 дней в неделю, но также допустимо воздействие в течение 7 дней в неделю. Самцов и самок испытывают постоянно; если известно, что один пол более подвержен воздействию данного исследуемого препарата, то особи могут подвергаться воздействию при различных уровнях концентрации. Это руководство позволяет руководителю исследования включать вспомогательные (реверсивные) группы промежуточных умерщвлений, бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ), неврологических испытаний, а также дополнительных оценок клинической патологии и гистопатологических оценок для того, чтобы лучше охарактеризовать токсичность исследуемого препарата.

Руководство ОЭСР периодически пересматривают с учетом достижений научно-технического прогресса, соображений защиты животных и изменения нормативных требований. Исходное Руководство 413 (TG 413) по испытанию субхронического вдыхания было принято в 1981 году [2]. TG 413 было пересмотрено с учетом состояния науки и для соблюдения действующих и ожидаемых нормативных требований.

Исследования субхронической ингаляционной токсичности в основном используют для получения регуляторных концентраций для оценки риска работника в условиях специальности. Также они используются для оценки жилья человека, транспортного и экологического рисков. Это руководство дает характеристику вредным эффектам, которые проявляются после повторного ежедневного ингаляционного воздействия исследуемого препарата в течение 90 дней (приблизительно 10% продолжительности жизни крыс). Данные, полученные из исследований субхронической ингаляционной токсичности, могут быть использованы для количественных оценок риска и для выбора концентраций для хронических исследований. Данное Руководство по испытанию специальным образом не предназначено для тестирования наноматериалов. Определения, используемые в рамках данного Руководства по испытанию, можно найти в Руководстве 39 [3].

     2 Описание метода

     2.1 Животные

     2.1.1 Выбор видов

Следует использовать здоровых молодых половозрелых грызунов наиболее часто используемых лабораторных линий. Предпочтительно использовать крыс. Могут быть использованы другие виды, но их применение требует обоснования.

     2.1.2 Подготовка

Самки должны быть нерожавшими и небеременными. На день отбора для эксперимента животные должны быть в возрасте от 7 до 9 недель. Диапазон колебания массы тела животных для каждого пола не должен превышать ±20% от средней массы тела всех животных, задействованных в исследовании, отдельно каждого пола. Животные отбираются в случайном порядке и маркируются, что позволит идентифицировать каждое из них, и содержатся в клетках в течение 5 дней до начала испытания для адаптации к лабораторным условиям.

     2.1.3 Условия содержания и кормления

Животных следует помечать индивидуальными идентификаторами, если возможно, подкожными маяками-ответчиками, чтобы облегчить процесс наблюдения и избежать путаницы. Температура в помещении с экспериментальными животными должна составлять (22±3)°С. Относительная влажность должна варьироваться между 30% и 70%, но это может быть недостижимо, если вода используется в качестве растворителя. Перед и после воздействия животных, как правило, следует содержать в клетках группами одного пола и одной концентрации, но количество животных на клетку не должно затруднять наблюдения за каждым животным в клетке и должно минимизировать вероятность потерь от каннибализма и борьбы. Если животные подвергаются воздействию только через нос, им может потребоваться привыкнуть к ограничивающей трубке. Ограничивающие трубки не должны вызывать у животных физический или температурный стресс или приводить к потере подвижности. Средства механического удерживания могут повлиять на физиологические объекты исследования, как, например, температура тела (гипертермия) и/или минутный объем легочной вентиляции. Если данные показывают, что подобные изменения не являются значимыми, то адаптация к ограничивающим трубкам не является необходимой. Животных, подвергающихся воздействию аэрозолем через все тело, следует содержать индивидуально на протяжении периода экспозиции, чтобы уберечь их от проникновения тестируемого аэрозоля через шерстку партнеров по клетке. Могут использоваться традиционные и проверенные лабораторные диеты, за исключением периода экспозиции испытываемого препарата, во время которого для животного необходимо обеспечить неограниченное количество питьевой воды. Освещение должно быть искусственным в режиме 12 ч при свете/12 ч в темноте.

     2.2 Ингаляционные камеры

Природа исследуемого препарата и предмет исследования должны быть учтены при выборе ингаляционной камеры. Предпочтительной моделью воздействия является воздействие через нос (данный термин включает воздействие "только через голову", "только через нос", "только через мордочку"). Экспозиция "только через нос", как правило, предпочтительна при исследованиях жидких или твердых аэрозолей, а также для паров, которые могут конденсироваться и образовывать аэрозоль. Специальные цели исследования могут быть достовернее достигнуты при модели воздействия "через все тело", но применение такой модели должно быть обосновано в отчете об исследовании. Чтобы обеспечить атмосферную стабильность при использовании камеры для воздействия "через все тело", общий "объем" испытуемых животных не должен превышать 5% от объема камеры. Методика воздействий "только через нос" и "через все тело", а также их положительные и отрицательные особенности отражены в GD 39 [3].

     2.3 Исследование токсичности

     2.3.1 Предельные концентрации

В отличие от исследований острой токсичности, в исследованиях субхронической ингаляционной токсичности определенного предела концентраций не существует. Максимально тестируемая концентрация должна учитывать: 1) максимально достижимую концентрацию, 2) при воздействии на человека уровень, при котором разворачивается наиболее неблагоприятный сценарий, 3) необходимость поддерживать соответствующий объем кислорода и/или 4) соображения о защите животных. В отсутствие данных о предельных концентрациях можно использовать предельные концентрации для острой токсичности согласованной на глобальном уровне системы классификации и маркировки химических веществ ООН (т.е. вплоть до максимальной концентрации 5 мг/л для аэрозолей, 20 мг/л для паров и 20,000 ppm для газов); см. GD 39 [3]. Если при тестировании газов или высоколетучих исследуемых препаратов (например, жаропонижающие средства) возникла необходимость превысить эти предельные концентрации, следует привести обоснование. Предельная концентрация должна вызывать явную интоксикацию, не приводя к чрезмерному стрессу у животных и не влияя на продолжительность их жизни [4].

     2.3.2 Исследование по определению диапазона доз

Прежде чем приступить к основному исследованию, может возникнуть необходимость в определении диапазона концентраций для исследования. Определение диапазона концентраций для исследования является более полным, нежели визуальное изучение, потому что оно не ограничено отбором концентраций. Информация, полученная в результате определения диапазона концентраций для исследования, может помочь провести основное исследование более успешно. Определение диапазона концентраций для исследования может, например, дать информацию об аналитических методах, об измерении частиц, об обнаружении механизмов интоксикации, данные клинической патологии и гистопатологии, расчеты, какими могут быть концентрации NOAEL (уровень отсутствия наблюдаемого вредного воздействия после введения вещества, является максимальной дозой, не вызывающей обнаруживаемого вредного воздействия на здоровье) и МТС (минимальная токсическая концентрация) в основном исследовании. Руководитель исследования по определению диапазона концентраций может использовать для установления порога раздражения дыхательных путей (например, с помощью гистопатологии дыхательных путей, тестирование легочной функциональной пробы, или бронхоальвеолярный лаваж) наивысшую концентрацию, которая не вызывает стресса у животных и изменения параметров, которые наиболее полно характеризуют токсичность исследуемого вещества.

Определение диапазона концентраций может состоять из одного или более уровней концентрации. Не более трех самцов и трех самок следует подвергать воздействию каждого уровня концентрации. Определение диапазона концентраций должно длиться не менее 5 дней, но, как правило, не более 14 дней. Обоснование выбора концентрации для основного исследования необходимо отразить в отчете по основному исследованию. Цель основного исследования - установление зависимости "концентрация - ответ", базирующееся на основе наиболее чувствительных показателей. Низкий уровень концентрации в идеале не должен вызывать наблюдаемого токсического эффекта, тогда как высокий уровень концентрации должен вызывать явную токсичность, не приводя к чрезмерному стрессу у животных и не влияя на продолжительность их жизни [4].

При выборе уровня концентрации для определения диапазона концентраций вся имеющаяся информация, включая данные о зависимости активности препарата от структуры вещества и данные по сходным химикатам, должна быть учтена (см. Область применения). Определение диапазона концентраций может подтверждать/опровергать то, какие показатели являются наиболее чувствительными, например, ингибирование холинэстеразы для органофосфатов, образование метагемоглобина путем эритроцитотоксических агентов, тиреоидные гормоны (ТЗ, Т4) для тиреотоксинов, белок, LDH или нейтрофилы в бронхоальвеолярном лаваже для безвредных плохо растворимых частиц или аэрозолей с легочно-раздражающим действием.

     2.3.3 Основное исследование

Основное исследование субхронической токсичности, как правило, включает три уровня концентрации, а также одновременно негативный контроль (воздух) и/или контроль растворителя при необходимости. Следует использовать все имеющиеся данные, чтобы способствовать выбору соответствующих уровней воздействия, включая результаты системных исследований токсичности, метаболизм и кинетику (особое внимание следует уделить тому, чтобы избежать высоких уровней концентрации, которые насыщают кинетические процессы). Каждая экспериментальная группа включает грызунов из 10 самцов и 10 самок, которые подвергаются воздействию исследуемого препарата в течение 6 часов в день 5 дней в неделю на основе периода в 13 нед (общая продолжительность исследования не меньше 90 дней). Животные могут подвергаться воздействию также 7 дней в неделю (например, при тестировании вдыхаемых фармацевтических продуктов). Если известно, что один пол более чувствителен к воздействию тестируемого вещества, животные разных полов могут подвергаться воздействию различных уровней концентраций с целью оптимизировать зависимость "концентрация - ответ". Если воздействию "только через нос" подвергаются другие виды грызунов, помимо крыс, то можно отрегулировать максимальную продолжительность воздействия с целью минимизировать дистресс, характерный для данного вида. В случае, если продолжительность экспозиции составляет менее 6 ч/день, или при необходимости используется долгосрочное (например, 22 ч/день) исследование с воздействием "через все тело", следует привести обоснование (см. GD 39 [3]). Во время экспозиции рекомендуется голодание животных, если только экспозиция не превышает 6 часов. Во время воздействия "через все тело" животным можно давать воду.

Выбранные целевые концентрации должны идентифицировать органы-мишени и показывать четкую зависимость "концентрация - ответ":

- Высокий уровень концентрации должен вызывать токсический эффект, но не приводить к затяжным признакам интоксикации или летальности, что может препятствовать правильной оценке.

- Средний(е) уровень (уровни) концентрации должен быть между низким и высоким уровнями концентрации для градации токсических эффектов.

- Низкий уровень концентрации должен вызывать слабые эффекты или вообще не вызывать признаков интоксикации.

     2.3.4 Промежуточные умерщвления