ГОСТ 32643-2020

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА

Токсичность подострая ингаляционная: 28-дневное исследование

Methods of testing the impact of chemical products on the human body. Subacute inhalation toxicity: 28-day study

МКС 75.080

        11.020

        11.120.01

Дата введения 2021-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН "Российским научно-техническим центром информации по стандартизации, метрологии и оценке соответствия" (ФГУП "СТАНДАРТИНФОРМ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Евразийским советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 июня 2020 г. N 131-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 21 октября 2020 г. N 891-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32643-2020 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2021 г.

5 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному документу OECD Test N 412:2018* "Руководство по испытанию химических веществ. 28-дневное исследование (подострой) ингаляционной токсичности" ("Guidelines on the Testing of Chemicals. 28-day (subacute) inhalation toxicity study", MOD) путем:

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

- включения дополнительного раздела 1, дополнительных фраз, выделенных в тексте курсивом;

- изменения его структуры для приведения в соответствие с правилами, установленными в ГОСТ 1.5 (подразделы 4.2 и 4.3).

Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой указанного международного документа приведено в дополнительном приложении ДА.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6)

6 ВЗАМЕН ГОСТ 32643-2014

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Краткое описание

Настоящее пересмотренное руководство OECD Test N 412: 2018 предназначено для полной характеристики токсичности исследуемого химического вещества при вдыхании в результате повторного воздействия в течение ограниченного периода времени (28 дней) и предоставления надежных данных для количественной оценки риска вдыхания. Основной причиной пересмотра руководства было включение в испытания наноматериалов, а также отражение новейших достижений в области испытаний вдыхаемых газов, паров и аэрозолей. Новая версия руководства прежде всего предусматривает фактическую схему основного исследования в зависимости от агрегатного состояния исследуемого химического вещества (газ, пар, жидкий или твердый аэрозоль), независимо от результатов исследований по определению диапазона доз или другой информации, указывающей на то, что исследуемое химическое вещество накапливается и удерживается в легких, вызывая неблагоприятные местные или системные эффекты. Основное исследование предусматривает исследование воздействия трех или более уровней концентрации исследуемого химического вещества в течение 28 дней (четырехнедельный период) по шесть часов в день на группах грызунов, состоящих не менее чем из пяти самцов и пяти самок, а также отфильтрованного воздуха (группа отрицательного контроля) или растворителя (носителя) (группа контроля носителя). Затем животных умерщвляют в течение 24 ч после окончания воздействия. Как правило, животных подвергают воздействию пять дней в неделю, но также допустимо воздействие в течение семи дней в неделю. Для всех животных после воздействия исследуемых химических веществ проводят исследование жидкости бронхоальвеолярного лаважа (BALF). Для этого легкие разделяют: левое легкое используют для гистопатологии, правое - для проведения BALF. Если предусмотрены группы восстановления, их также подвергают анализу бронхоальвеолярного лаважа (BAL) путем разделения легких. Если исследуемое химическое вещество остается в легких, руководитель исследования может рассмотреть дополнительные периоды наблюдения после воздействия (PEO), которые включают измерение его содержания в легких для получения информации о динамике очищения легких и перемещении вещества, причем последнее особенно актуально в случае, если исследуемое химическое вещество является твердым наноматериалом. Для более полной характеристики токсичности исследуемого вещества рекомендуется включать дополнительные факультативные исследования, такие как токсикокинетика и/или оценка системной токсичности (например, оценка иммунных, печеночных, неврологических и/или сердечно-сосудистых эффектов). Более подробные указания по дополнительным наблюдениям и их анализу приведены в [1].

Введение

Руководства Организации экономического сотрудничества и развития (OECD) периодически пересматривают с учетом научного прогресса или изменения норм оценки токсикологических реакций, соображений защиты животных и изменяющихся нормативных требований. Исходное руководство по исследованию подострой ингаляционной токсичности OECD Test N 412 было принято в 1981 г. (см. [2]). В 2009 г. оно было пересмотрено с учетом новых научных данных для удовлетворения текущих и будущих потребностей нормативного регулирования. Основной причиной последнего пересмотра является обеспечение проведения испытаний аэрозольных частиц, включая наноматериалы. Отмечено, что наночастицы и тонкодисперсные частицы существуют одновременно в виде непрерывной совокупности и поэтому образцы искусственных наночастиц имеют тенденцию к агломерации в исследуемой атмосфере в зависимости от способа их получения, физических свойств и химического состава. Наиболее значимые особенности последней версии:

- пересмотренная редакция предусматривает выполнение соответствующих измерений жидкости бронхоальвеолярного лаважа (BALF) для всех исследуемых химических веществ, путем разделения легких для гистопатологии и анализа бронхоальвеолярного лаважа (BAL). Запланированная группа восстановления также должна включать анализ BALF;

- если исследование по подбору диапазона доз или другая соответствующая информация свидетельствуют, что частицы вдыхаемого исследуемого вещества плохо растворимы и будут удерживаться в легких, следует проводить измерения нагрузки на легкие, которые подтверждают осаждение и задержку частиц в легких. Анализ BALF и измерение нагрузки на легкие выполняют для всех исследуемых химических веществ в течение 24 ч после прекращения воздействия, а также могут быть проведены через один или два дополнительных интервала времени после воздействия (PEO). Руководитель исследования определяет необходимость проведения дополнительных исследований после воздействия химических веществ и время проведения в соответствии с целями исследования и результатами определения диапазона доз и/или другой соответствующей информации (например, PEO-1 - для определения удерживания в легких и PEO-1, PEO-2 и PEO-3, если для оценки кинетики очищения необходимы результаты трех измерений нагрузки на легкие (см. приложение А и [1]);

- исследование (или исследования) по определению диапазона доз, которое проводят в основном исследовании для определения уровней концентрации, должно включать анализ BALF и дополнительно может включать измерения нагрузки на легкие. Оно может быть предназначено для получения информации о чувствительности функции легких в зависимости от пола животных, температуры тела и т.д., но должно быть тщательно спланировано и сбалансировано для предотвращения ошибок;

- по версии руководства 2009 г. было необходимо, чтобы масс-медианный аэродинамический диаметр (MMAD) частиц аэрозоля был от 1 до 3 мкм с геометрическим стандартным отклонением ( или GSD) от 1,5 до 3,0. Для обеспечения исследования аэрозолей нанодиапазона и повышения способности к осаждению в легких следует по возможности соблюдать новый норматив: MMAD должен быть менее или равен 2 мкм, а - от 1 до 3. Если этот норматив не может быть обеспечен, в отчете об исследовании должно быть представлено обоснование, включая описание мер, предпринятых для его достижения, таких как размол (см. [1]).

Исследование подострой ингаляционной токсичности используют в основном для установления нормативных требований к концентрации веществ при оценке профессиональных рисков для здоровья работников. Их также используют для определения и оценки рисков для человека при использовании в жилых помещениях, при транспортировании и для окружающей среды. Это руководство позволяет характеризовать побочные эффекты после многократного ежедневного вдыхания исследуемого химического вещества в течение 28 дней. Данные, полученные в исследовании подострой ингаляционной токсичности, могут быть использованы для количественной оценки риска и выбора концентраций при долгосрочных исследованиях. Определения специальных терминов, используемых в данном руководстве, приведены в [1].

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод исследования подострой ингаляционной токсичности для определения и характеристики токсичности исследуемого химического вещества при вдыхании в результате повторного воздействия в течение ограниченного периода времени (28 дней) и представления надежных данных для количественной оценки риска при вдыхании газов, паров и аэрозолей.

Настоящий стандарт может быть также применен для испытаний наноматериалов.

     2 Основные положения

2.1 Для повышения качества исследования и минимизации числа используемых животных в испытательной лаборатории до начала исследования должна быть проанализирована вся имеющаяся информация об исследуемом веществе. При выборе концентраций вещества для исследования следует использовать информацию, включающую идентификацию, химическую структуру и физико-химические свойства исследуемого химического вещества, результаты любых исследований токсичности in vitro или in vivo, предполагаемое(ые) использование(я) и вероятность воздействия на человека, имеющиеся данные количественной зависимости структура - активность [(Q)SAR] и данные о токсичности структурно родственных химических веществ; а также данные других исследований повторного воздействия. При исследовании твердого аэрозоля необходимо иметь информацию о его задержке и кинетике в легких. Если в ходе исследования предполагают или наблюдают проявление системной токсичности (например, иммунотоксичность, нейротоксичность, гепатотоксичность, воздействие на сердечно-сосудистую систему), руководитель исследования может принять решение о необходимости включения оценки соответствующих токсикологических конечных точек. Несмотря на то, что для проведения дополнительных исследований может понадобиться значительное время, это не должно быть помехой для плана основного исследования.

2.2 Если исследуемое химическое вещество представляет собой аэрозоль из плохо растворимого(ых) материала(ов), следует по возможности определить размер частиц, морфологические и физико-химических* характеристики, включая определение растворимости. Определение характеристик наноматериалов приведено в [3], [4].

___________________

* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.

2.3 Вдыхаемая (или альвеолярная) фракция плохо растворимых частиц, которые медленно выводятся, может накапливаться с каждым последующим периодом воздействия. Степень задержки в легких можно оценить путем измерения нагрузки на легкие. Часть этих частиц может перемещаться и широко распространяться в организме. Измерения нагрузки на лимфатические узлы, связанные с легкими (LALN), могут указывать на транслокацию, что может быть дополнительно подтверждено измерениями нагрузки на орган-мишень. Эффекты любой транслокации могут быть оценены с учетом системной токсичности. Данные по нагрузке на легкие не исключают значимости результатов токсикологических исследований на подопытном животном для оценки риска для человека. Подробные указания приведены в [1].

2.4 Агрессивные или раздражающие химические вещества могут быть исследованы при разбавлении в концентрациях, обеспечивающих заданную степень токсичности. При воздействии этих исследуемых химических веществ на животных целевые концентрации должны быть достаточно низкими, чтобы не вызывать явной боли и дистресса, но достаточными для распространения кривой зависимости концентрация - ответ до уровней, которые достигают регуляторной и научной цели испытания. Концентрации следует выбирать в каждом конкретном случае, предпочтительно на основе запланированного надлежащим образом исследования по определению диапазона, которое позволит получить информацию о критической конечной точке, любом пороге раздражения и времени проявления (см. 4.2.1-4.3.1).

Необходимо привести обоснование выбора концентрации.

2.5 Животные в состоянии агонии или животные, очевидно испытывающие боль или демонстрирующие признаки серьезного и стойкого дистресса, должны быть гуманно умерщвлены. Животных в состоянии агонии учитывают как животных, погибших во время испытания. Критерии для принятия решения об умерщвлении животных в состоянии агонии или тяжело страдающих животных, а также руководство по определению признаков предсказуемой или неминуемой смерти приведены в [5].

     3 Описание метода

3.1 Выбор видов животных

В качестве подопытных следует использовать молодых, здоровых, половозрелых грызунов обычно применяемых лабораторных линий. Предпочтительно использовать крыс. Использование других видов животных необходимо обосновать.

3.2 Подготовка животных

Самки должны быть нерожавшими и небеременными. На день отбора для проведения исследований возраст животных должен быть от семи до девяти недель. Масса тела должна быть в пределах ±20% средней массы тела животных каждого пола. Животных отбирают случайным образом, маркируют для индивидуальной идентификации и содержат в клетках не менее 5 дней до начала испытания для акклиматизации к лабораторным условиям.

3.3 Условия содержания животных

Животных следует идентифицировать индивидуально (предпочтительно с использованием подкожных микрочипов) для облегчения наблюдения и предотвращения путаницы. Температура в помещении с подопытными животными должна быть (22±3)°С. Относительная влажность воздуха должна поддерживаться в диапазоне от 30% до 70%. До и после воздействия животных, как правило, содержат в клетках группами одного пола и одной концентрации, но число животных в клетке не должно затруднять наблюдение за каждым животным и должно сводить к минимуму потери от каннибализма и грызни. Если животных подвергают воздействию только через нос, им может потребоваться привыкание к дыхательной трубке. Дыхательные трубки не должны вызывать у животных физический стресс, или повышение температуры, или приводить к потере подвижности. Если данные показывают, что подобные изменения не вызывают затруднений, то адаптация к дыхательным трубкам не является необходимой. Животных, все тело которых подвергают воздействию аэрозоля в камере, на время экспозиции следует размещать индивидуально для предотвращения фильтрования исследуемого аэрозоля через наружные покровы тела партнеров по клетке. Можно использовать обычные и проверенные лабораторные диеты, за исключением периода экспозиции исследуемого вещества, когда животное необходимо обеспечить неограниченным количеством питьевой воды. Освещение должно быть искусственным с чередованием периодов света (12 ч) и темноты (12 ч).

3.4 Ингаляционные камеры

Исследования подострой ингаляционной токсичности обычно проводят в динамических ингаляционных камерах. Не допускается использовать статические ингаляционные камеры, в которых отсутствует воздушный поток. При выборе ингаляционной камеры следует учитывать свойства исследуемого химического вещества и цель испытания. Для исследования жидких или твердых аэрозолей и паров, которые могут конденсироваться с образованием аэрозолей, предпочтительный способ воздействия - только через нос (этот термин означает также: только через голову, только через нос или только через мордочку). Специальные цели исследования могут быть лучше достигнуты при использовании динамического режима воздействия на все тело, но такой способ воздействия должен быть обоснован в отчете об исследовании. Для обеспечения стабильности атмосферы при использовании камеры для всего тела общий объем подопытных животных не должен превышать 5% объема камеры. Способы воздействия только через нос и через все тело, а также их конкретные преимущества и недостатки приведены в [1].

     4 Исследование токсичности

4.1 Предельные концентрации

В отличие от исследований острой токсичности, в 28-дневных исследованиях подострой ингаляционной токсичности уровень предельных концентраций не задан. При выборе максимальной концентрации исследуемого вещества следует учитывать:

1) максимально достижимую концентрацию,

2) необходимость поддержания достаточного количества кислорода и/или

3) рекомендации о гуманном обращении с животными.