МУК 4.1.3379-16 Определение остаточных количеств бацитрацина в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа

2. Метод измерений

Количественное определение бацитрацина в пищевых продуктах основано на технологии твердофазного конкурентного иммуноферментного анализа, в основе которого лежит взаимодействие "антиген-антитело": лунки микротитровального планшета покрыты антителами к бацитрацину, и после внесения в лунки смеси, содержащей антиген (стандартные растворы бацитрацина + конъюгат бацитрацина с ферментом или подготовленная проба продукта + конъюгат бацитрацина с ферментом), свободный бацитрацин и конъюгат бацитрацина конкурируют за центры связывания антител к бацитрацину. Несвязавшийся конъюгат удаляется в процессе промывки. После добавления в лунки раствора субстрата/хромогена фермент в составе связавшегося с антителами к бацитрацину конъюгата взаимодействует с субстратом, превращая хромоген в вещество голубого цвета. Добавление стоп-реагента приводит к изменению цвета с голубого на желтый. Оптическую плотность прореагировавшей смеси измеряют фотометрически при 450 нм, по результатам измерения судят о количестве бацитрацина в исследуемой пробе (величина оптической плотности раствора обратно пропорциональна концентрации бацитрацина в исследуемой пробе продукта). Расчет содержания бацитрацина проводят по стандартной кривой или с помощью специального программного обеспечения.