МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР

ПРИКАЗ

от 12 июля 1985 года N 936

Об унификации лабораторных методов исследования в диагностике гонореи и трихомониаза

____________________________________________________________________
Не действует на территории Российской Федерации с 1 января 2021 года на основании
постановления Правительства Российской Федерации от 13 июня 2020 года N 857
____________________________________________________________________

В советской лабораторной службе последовательно проводится унификация методов, наиболее часто применяемых в диагностической практике лабораторных исследований. Внедрение в практику унифицированных методов, утвержденных приказами Министерства здравоохранения СССР в 1972-1981 годах, упорядочило работу клинико-диагностических лабораторий, способствовало совершенствованию лабораторного обеспечения клинической диагностики.

В целях дальнейшей унификации лабораторных методов исследования в клинико-диагностических и бактериологических лабораториях лечебно-профилактических учреждений страны

1. Утверждаю:

1.1. Перечень унифицированных методов клинико-диагностических и бактериологических исследований в диагностике гонореи и трихомониаза (приложение 1).

1.2. Методические указания по применению унифицированных клинико-диагностических и бактериологических исследований в диагностике гонореи и трихомониаза (приложение 2).

2. Приказываю:

2.1. Министрам здравоохранения союзных и автономных республик, начальникам Главных управлений здравоохранения Мосгорисполкома, Ленгорисполкома, Ташгорисполкома, Киевского горисполкома и Мособлисполкома, заведующим краевыми, областными, городскими и районными отделами здравоохранения:

2.1.1. Организовать, начиная с 1986 года, проведение лабораторных исследований в диагностике гонореи и трихомониаза во всех клинико-диагностических и бактериологических лабораториях, занимающихся диагностикой гонореи и трихомониаза, по унифицированным методам, утвержденным настоящим приказом;

2.1.2. Обеспечить освоение сотрудниками клинико-диагностических и бактериологических лабораторий унифицированных методов лабораторной диагностики гонореи и трихомониаза согласно приложению 2.

3. Контроль за выполнением настоящего приказа возложить на заместителя Министра здравоохранения СССР тов.Сафонова А.Г.

4. Разрешается размножение данного приказа в необходимом количестве.

Министр
С.П.Буренков

Приложение 1
к Приказу Министерства
здравоохранения СССР
от 12 июля 1985 года N 936

     

Перечень унифицированных методов клинико-диагностических и бактериологических исследований в диагностике гонореи и трихомониаза

1. Клинико-диагностические исследования

1.1. Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном метиленовым синим.

1.2. Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном эозином и метиленовым синим.

1.3. Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном бриллиантовым зеленым.

1.4. Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном по модифицированному способу Грама.

1.5. Обнаружение влагалищных трихомонад в исследуемом материале при изучении нативного препарата.

2. Культуральные исследования

2.1. Выделение и идентификация гонококков в культурах.

2.2. Выявление в культурах колоний гонококков, продуцирующих цитохромную оксидазу.

2.3. Идентификация гонококков в чистых культурах методом ферментации сахаров.

2.4. Определение чувствительности чистой культуры гонококка к антибиотикам.

2.5. Определение бета-лактамазной активности гонококков.

2.6. Выделение и идентификация влагалищных трихомонад в культурах.

Начальник Главного управления
лечебно-профилактической помощи
А.М.Москвичев

Приложение 2
к Приказу Министерства
здравоохранения СССР
от 12 июля 1985 года N 936

     

Методические указания по применению унифицированных клинико-диагностических и бактериологических исследований в диагностике гонореи и трихомониаза

Введение

Общие указания к унифицированным методам

В методических указаниях величины выражены в единицах Международной системы единиц (1, 2, 3).

При проведении исследований по унифицированным методам рекомендуется руководствоваться следующими указаниями:

- взвешивание на аналитических весах производят с точностью до 0,0002 г, на технических весах - с точностью до 0,01 г;

- для измерения объемов жидкости и приготовления растворов используют мерную посуду, соответствующую ГОСТам: ГОСТ 1770-74 - "Цилиндры, мензурки, колбы мерные" и ГОСТ 20292-74 - "Бюретки, пипетки";

- под "холодной", "прохладной" температурой подразумевают температуру 12° - 15°C; под "теплой" - 40° - 50°C; под "горячей" - 80° - 90°C; под "комнатной" - 18° - 20°C; под температурой "кипящей водяной бани" подразумевают температуру 98° - 100°C (4);

- если для растворов не указан растворитель, то подразумевают водные растворы;

- под названием "вода", если нет особых указаний, следует понимать дистиллированную воду (4);

- для приготовления раствора реактивов используют дистиллированную воду, соответствующую ГОСТ 6709-72;

- используют химические реактивы, срок хранения которых не истек, а условия хранения и упаковка соответствуют ГОСТ на данный реактив или указаны на этикетке.

Растворы реактивов для унифицированных методов готовятся в объеме, приемлемом для данной лаборатории, в зависимости от стабильности растворов реактивов и числа проводимых исследований; для большинства реактивов указаны допустимые квалификации. В тех случаях, когда квалификация реактивов не указана, можно пользоваться реактивами квалификации ч, чда, или хч.

Для реактивов, которые не производятся отечественной промышленностью, квалификация не указана.

Правила приготовления растворов кислот и щелочей приведены в руководствах по технике лабораторных работ (5, 6).

Описание предварительных операций - очистка, мытье и сушка лабораторной посуды - приведено в соответствующих руководствах (5, 7).

В связи с переходом на Международную систему единиц концентрация растворов реактивов в унифицированных методах выражена в молярной (моль/л) или в массовой (г/л раствора) концентрации.

Литература

1. "Методические указания. Внедрение и применение" СТ СЭВ 1052-78 "Метрология. Единицы физических величин". РД 50-160-79. М., Изд-во Стандартов, 1979.

2. Методические рекомендации по применению в клинической лабораторной диагностике наименований и обозначений единиц физических величин. М., 1977.

3. Единицы СИ в медицине. Подготовлено по предложению Тридцатой Всемирной ассамблеи здравоохранения. Женева, ВОЗ, 1979.

4. Государственная Фармакопея Союза Советских Социалистических Республик. Десятое издание. М., "Медицина", 1968.

5. Воскресенский П.И. Техника лабораторных работ. М., "Химия", 1966.

6. Карякин Ю.В., Ангелов И.И. Чистые химические реактивы. М., Госхимиздат, 1955.

7. Кац А.М., Канторович А.С. Мерные и дозирующие устройства для клинико-диагностических лабораторий. Л., "Медицина", 1970.

1. Клинико-диагностические исследования

1.1. Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном метиленовым синим

Принцип метода основан на обнаружении возбудителей в препаратах, окрашенных метиленовым синим.

Реактивы: 1) 1% водный раствор метиленового синего: 1 г метиленового синего растворяют в 100 мл дистиллированной воды, фильтруют через бумажный фильтр. 2) 96° этиловый спирт.

Специальное оборудование: микроскоп с осветителем, песочные часы, штативы.

Приготовление препаратов. Материал наносят на чистые обезжиренные предметные стекла тонким равномерным слоем, высушивают на воздухе.

Ход окраски. Препарат фиксируют 3 минуты в 96° этиловом спирте, высушивают, затем наносят на него 1% раствор метиленового синего на 1 минуту, тщательно смывают оставшийся краситель под струей холодной воды, высушивают в штативе.

Микроскопия. Исследование проводят под микроскопом с естественным или искусственным освещением: объектив 90 иммерсионный, окуляр 7 или 10. Иммерсионное масло: кедровое. Препарат синего цвета. Ядра клеток окрашены в синий цвет, протоплазма - в голубой цвет разной интенсивности (до бесцветной). Слизь голубого цвета. Бактериальная флора прокрашивается в синий цвет разной интенсивности. Гонококки темно-синего цвета, резко очерчены, бобовидной формы, парные; располагаются внутриклеточно, в слизи и на эпителиальных клетках. Влагалищные трихомонады различной формы (округлой, овальной, полигональной) расположены в слизи, между клеточными элементами: четко просматривается оболочка; ядро расположено эксцентрично, интенсивно окрашено в синий цвет; протоплазма нежная, сетчатая светло-синяя; вакуоли бесцветны.

Литература

1. Н.М.Овчинников. Гонококк и лабораторная диагностика гонореи. М., Медгиз, 1952.

2. Методическое письмо по бактериоскопической диагностике гонореи, утверждено Министерством здравоохранения СССР 24 декабря 1970 года N 10-83/14-83.

3. Яцуха М.В., Шрайберг В.Г. Значение бактериоскопического метода исследования при современном течении гонорейной инфекции. Лабораторное дело, 1974, N 5, с.286-288.

1.2. Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном эозином и метиленовым синим*

________________

* Рекомендуется использовать при исследовании материала, взятого у детей.

Принцип метода основан на обнаружении возбудителя в препаратах, окрашенных эозином и метиленовым синим.

Реактивы: 1) 1% раствор эозина в этиловом спирте: 1 г водорастворимого эозина растворяют в 37 мл дистиллированной воды и доливают в раствор 63 мл 96° этилового спирта или 1 г спирторастворимого эозина растворяют в 63 мл 96° этилового спирта и добавляют в раствор 37 мл дистиллированной воды. Растворы фильтруют через бумажный фильтр. 2) 1% водный раствор метиленового синего. Готовят как ранее описано (см.1.1).

Специальное оборудование, приготовление препаратов (см.1.1).

Ход окраски. Без предварительной фиксации препараты погружают в 1% раствор эозина на 15-20 секунд, смывают текущей водопроводной водой и заливают 1% раствором метиленового синего на 1-2 минуты, затем тщательно смывают оставшийся краситель под струей холодной водопроводной воды и высушивают в штативе.

Микроскопия: окраска производится для выявления, наряду с гонококками и трихомонадами, эозинофилов. Препарат синего цвета. Ядра клеток окрашены в синий, протоплазма в голубой цвет разной интенсивности. В протоплазме при наличии эозинофилов имеется зернистость красного или ярко-розового цвета. Слизь голубого цвета. Бактериальная флора окрашена в синий цвет разной интенсивности. Гонококки темно-синего цвета, резко очерчены, бобовидной формы, парные; располагаются внутриклеточно, в слизи и на эпителиальных клетках. Влагалищные трихомонады: ядро синего цвета, расположено эксцентрично, овальное; протоплазма сетчатая светло-синяя; вакуоли бесцветны; четко просматривается оболочка.

Литература (см.1.1)

1.3. Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном бриллиантовым зеленым*

________________

* Рекомендуется использовать при отсутствии метиленового синего.

Принцип метода основан на обнаружении возбудителей в препаратах, окрашенных бриллиантовым зеленым.

Реактивы: 1) 0,5% водный раствор бриллиантового зеленого: 0,5 г бриллиантового зеленого растворяют в 100 мл кипящей дистиллированной воды, фильтруют в горячем виде через бумажный фильтр.

2) 96° этиловый спирт.

Специальное оборудование, приготовление препаратов (см.1.1).