ГОСТ ISO 10993-10-2023 Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 10. Исследования сенсибилизирующего действия (с Поправкой)
6 Методы исследования кожной сенсибилизации
6.1 Выбор методов исследований
Разработаны альтернативные подходы к методам in vitro и химическим методам для чистых химических веществ с использованием комбинации различных проб для идентификации кожных аллергенов. Некоторые из этих методов включены в руководства по исследованиям ОЭСР (TG 442С [75], TG 442D [79] и TG 442Е [104]) или в программу руководства по исследованиям ОЭСР [121] (см. приложение С).
Пробы, описанные в данных руководствах к исследованиям, охватывают три ключевых момента недавно определенного процесса с неблагоприятным исходом (АОР) для сенсибилизации кожи, включая момент молекулярной инициации (связывание белков), индукцию воспаления и активацию дендритных клеток. Эти методы исследования, разработанные для конкретного ключевого момента, по отдельности могут не являться достаточными для выводов о наличии или отсутствии потенциала химических веществ к сенсибилизации кожи и должны быть рассмотрены в контексте интегрированных подходов, таких как IATA, сочетая их с другой дополнительной информацией.
В соответствии с ISO 10993-2 такие интегрированные подходы следует учитывать при оценке способности к кожной сенсибилизации неразбавленных химических веществ. Являются ли такие подходы также применимыми к МИ или к экстрактам из МИ, пока неизвестно. Обзор существующих альтернативных исследований сенсибилизации кожи для неразбавленных химических веществ, представлен в приложении С.
На данный момент доступны три метода для определения сенсибилизирующего действия химических веществ на кожу животных. Они включают два метода на морских свинках и один метод на мышах. Проводят исследования методом максимизации на морских свинках (GPMT) и методом закрытых накожных аппликаций [проба Бюлера (Buehler)], из которых наиболее чувствителен метод максимизации [9]. Метод закрытых накожных аппликаций подходит для продуктов местного применения.
Местная проба на лимфатическом узле мыши (LLNA) является принятым на международном уровне методом, включенным в руководства к исследованию ОЭСР в 2010 г. [33] для испытаний отдельных химических веществ. LLNA является единственным альтернативным методом испытаний на морских свинках и стал предпочтительным методом для исследований химических веществ in vivo (см. [19] и [32]). В некоторых случаях может быть необходимо проведение исследований на морских свинках для оценки сенсибилизирующего действия отдельных исследуемых образцов.
Это относится к тем металлам (см. [44]), которые могут показать ложноположительные результаты, а также к тем веществам с высокой молекулярной массой, которые не проникают через кожу, или к веществам, не растворимым в рекомендуемых экстрагентах.
Примечание - Все три метода на животных разработаны для определения сенсибилизирующего действия химических веществ на кожу, таких как контактный дерматит, гиперчувствительность замедленного (IV) типа.
С учетом требований ISO 10993-2 относительно бережного отношения к животным предпочтительно использовать метод LLNA при проведении пробы in vivo. Кроме того, LLNA по сравнению с другими пробами дает объективные количественные данные.
6.2 Анализ локальных лимфатических узлов на мышах
6.2.1 Принцип
После местной обработки исследуемой пробой тыльной поверхности ушей измеряют степень пролиферации лимфоцитов в лимфатических узлах, дренирующих места нанесения (уши). Увеличение клеточной пролиферации в три раза или более по сравнению с контролем является пороговым критерием для определения исследуемого образца как аллергена.
При исследовании химических веществ необходимо выполнять пробы LLNA с использованием метода "доза-ответ". Для готовых продуктов/МИ может быть достаточным испытать только неразведенный экстракт.
Примечание - Ссылки с [15]-[44] содержат репрезентативные публикации по тесту LLNA. Лабораториям, проводящим пробу, рекомендуется ознакомиться с соответствующими доступными статьями.