ГОСТ 34853-2022

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА

Метод определения проницаемости флуоресцеина для идентификации веществ, вызывающих разъедание и серьезное раздражение глаз

Methods for studying the effects of chemicals on the human body Fluorescein Leakage Test Method for Identifying Ocular Corrosives and Severe Irritants

МКС 71.040.10;

           13.020.01

Дата введения 2024-05-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены".

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт метрологии" (БелГИМ) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Евразийским советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протоколом от 16 мая 2022 г. N 151-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 16 ноября 2023 г. N 1409-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34853-2022 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 мая 2024 г.

5 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному документу OECD 460:2017* "Руководство по тестированию химической продукции. Метод определения проницаемости флуоресцеина для идентификации веществ, вызывающих разъедание и серьезное раздражение глаз" ("Guidelines for the testing of chemicals - Fluorescein Leakage Test Method for Identifying Ocular Corrosives and Severe Irritants", MOD) путем изменения его структуры для приведения в соответствие с правилами, установленными в ГОСТ 1.5-2001 (подразделы 4.2 и 4.3).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для увязки с наименованиями, принятыми в существующем комплексе межгосударственных стандартов.

В тексте стандарта библиографические ссылки приведены не в порядке возрастания из-за особенностей построения примененного международного документа.

Приложения в настоящем стандарте обозначены согласно требованиям ГОСТ 1.5, так как их обозначение в примененном международном документе противоречит практике межгосударственной стандартизации.

Международный документ разработан Международной организацией экономического сотрудничества и развития (OECD).

Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой указанного международного документа приведено в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Введение

1. Метод определения проницаемости флуоресцеина (Fluorescein Leakage - FL) - это метод исследования in vitro, который в определенных условиях и с соблюдением некоторых ограничений может применяться для проведения классификации химической продукции (веществ и смесей) по ее способности вызывать разъедание или серьезное раздражение глаз в соответствии с требованиями Согласованной на глобальном уровне системы классификации и маркировки химической продукции (СГС) Организации Объединенных Наций (ООН) (класс опасности 1), Регламента Европейского союза (ЕС) по классификации, маркировке и упаковке химических веществ и смесей (European Union Regulation on Classification, Labelling and Packaging of Substances and Mixtures - EU CLP) (класс опасности 1) и Управления по охране окружающей среды США (U.S. Environmental Protection Agency - U.S. EPA) (класс опасности I) [1], [2], [3]. Для целей настоящего стандарта химической продукцией, вызывающей серьезное раздражение, является продукция, которая способна при воздействии на образец глаза в процессе исследования вызывать повреждения глазных тканей, которые не могут быть полностью обратимы по истечении 21 дня с момента такого воздействия, либо провоцировать обусловленное физическими причинами существенное ухудшение зрения в отличие от химической продукции с разъедающим действием, под которой понимают продукцию, способную вызывать полностью необратимые повреждения тканей глаз. Подобной химической продукции должен присваиваться класс опасности 1 согласно СГС ООН, класс опасности 1 согласно EU CLP либо класс опасности I согласно U.S. ЕРА.

2. Метод FL не может рассматриваться в качестве полноценной замены тестам in vivo на глазу кролика, но он может быть рекомендован к применению в рамках многоуровневой стратегии исследования для целей законодательно регулируемой классификации и маркировки химической продукции. Таким образом, его целесообразно применять на ранних этапах реализации стратегии исследования с применением нисходящего подхода для определения химической продукции, вызывающей разъедание/серьезное раздражение глаз, а именно для некоторой химической продукции (например, для водорастворимых веществ и смесей) [4], [5]. Выбор наиболее подходящего метода исследований, а также применение положений настоящего стандарта должны осуществляться с учетом требований [10].

3. Согласно общепринятому мнению в обозримом будущем появления одного метода in vitro для исследования раздражения глаз, позволяющего спрогнозировать весь спектр реакций, вызываемых химической продукцией различных классов, который мог бы заменить применяемый в настоящее время тест in vivo [6], ожидать не приходится. Тем не менее выверенное сочетание нескольких альтернативных методов исследований, реализуемых в рамках многоуровневой стратегии исследования, вполне может заменить собой вышеупомянутый тест, проводимый in vivo [5]. Применение нисходящего подхода [5] уместно для случаев, когда, исходя из уже имеющейся информации, исследуемая химическая продукция, предположительно, должна обладать высокой раздражающей способностью.

4. Исходя из модели построения прогнозов согласно 5.4.4, метод FL может применяться для определения веществ, способных вызывать разъедание/серьезное раздражение глаз в ограниченной области (класс опасности 1 согласно СГС ООН, класс опасности 1 согласно EU CLP, класс опасности I согласно U.S. EPA), без необходимости проведения дальнейших исследований. Такой подход допускается для смесей веществ, хотя смеси не использовались в процессе валидации метода. Отсюда следует, что метод FL может применяться для определения химической продукции, обладающей раздражающей/разъедающей способностью при соблюдении последовательной стратегии исследований, описанной в [6]. Если в то же время при применении метода FL не удается достоверно определить способность химической продукции вызывать разъедание или серьезное раздражение глаз, должны быть применены один или несколько дополнительных методов исследований (in vitro и/или in vivo), позволяющих достоверно определять: i) химическую продукцию, которая вызывает разъедание/серьезное раздражение глаз и для которой получены ложноотрицательные заключения при проведении исследований по методу FL (класс опасности 1 согласно СГС ООН, класс опасности 1 согласно EU CLP, класс опасности I согласно U.S. EPA); ii) химическую продукцию, которая не подлежит классификации как вызывающая разъедание/раздражение глаз (класс опасности отсутствует согласно СГС ООН и EU CLP, класс опасности IV согласно U.S. EPA); и/или iii) химическую продукцию, которая вызывает умеренное/слабое раздражение глаз (подклассы опасности 2A и 2B согласно СГС ООН, класс опасности 2 согласно EU CLP, классы опасности II и III согласно U.S. EPA).

     1 Область применения

1.1 Настоящий стандарт устанавливает метод оценки потенциальной опасности исследуемых химических веществ оказывать разъедающее или сильно раздражающее действие на глаза, которая определяется по их способности вызывать повреждения изолирующего конфлюэнтного (слитного) монослоя эпителиальных клеток. Поддержание приемлемого уровня трансэпителиальной проницаемости представляет собой одну из главных функций эпителия в организме, что в полной мере применимо к эпителию конъюнктивы и роговицы глаз. Этот уровень обеспечивается плотным межклеточным соединением. Увеличение проницаемости эпителия роговицы при наблюдениях in vivo, как было доказано, коррелирует со степенью воспалительного процесса и повреждения поверхности, которые проявляются по мере развития раздражения глаза.

1.2 В соответствии с методом настоящего стандарта токсическое воздействие после кратковременной экспозиции исследуемого вещества определяют по увеличению проницаемости флуоресцеина натрия через эпителиальный монослой культуры клеток Мадин-Дарби из почек собак (Madin-Darby Canine Kidney - MDCK), выращенных на пористых вставках. Величина наблюдаемой проницаемости флуоресцеина является прямо пропорциональной химическому поражению плотных межклеточных контактов, десмосом и клеточных мембран и может использоваться для оценки способности исследуемого вещества оказывать токсическое воздействие на глаза. В приложении А приведено графическое изображение выращивания клеток MDCK на пористой мембранной вставке.

     2 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1 альтернативные испытания (replacement test): Испытания, проводимые в соответствии с методами, которые были разработаны, чтобы служить заменой регулярно применяемым методам испытаний, допущены к применению для целей выявления опасностей и/или оценки рисков и в случае такого применения обеспечивают доказанный аналогичный или более высокий уровень защиты здоровья человека, животных или охраны окружающей среды по сравнению с утвержденными методами независимо от условий проведения испытаний и выбора исследуемых химических веществ.

2.2 валидированный метод испытаний (validated test method): Метод испытаний, для которого завершены валидационные исследования с целью определения его релевантности (включая точность) и надежности для конкретной цели. Важно отметить, что валидированный метод не обязательно обеспечивает достаточную результативность с точки зрения его точности и надежности для признания его пригодным для конкретной цели [9].

2.3 вещество (substance): Химические элементы и их соединения, представленные в естественном состоянии или полученные при выполнении производственного процесса, включая любые добавки, необходимые для сохранения стабильности продукта, а также любые примеси, наличие которых обусловлено применяемым процессом, но исключая любые растворители, удаление которых не сказывается на стабильности вещества или его составе.

2.4 вещество, вызывающее раздражение глаз (ocular irritant): (a) химическое вещество, воздействие которого на поверхность глаза приводит к обратимым изменениям в глазных тканях; (b) любое вещество, которому был присвоен подкласс опасности 2A или 2B согласно СГС ООН, класс опасности 2 согласно EU CLP либо класс опасности II или III согласно U.S. EPA [2], [3], [4].

2.5 вещество, вызывающее разъедание глаз (ocular corrosive): (a) химическое вещество, воздействие которого приводит к необратимым повреждениям глазных тканей; (b) любое вещество, которому был присвоен класс опасности 1 согласно СГС ООН, класс опасности 1 согласно EU CLP либо класс опасности I согласно U.S. EPA [2], [3], [4].

2.6 вещество, вызывающее серьезное раздражение глаз (ocular severe irritant): (a) химическое вещество, воздействие которого на поверхность глаза приводит к повреждениям глазных тканей, которые не являются полностью обратимыми по истечении 21 дн с момента такого воздействия, либо к обусловленному физическими причинами существенному ухудшению зрения; (b) любое вещество, которому был присвоен класс опасности 1 согласно СГС ООН, класс опасности 1 согласно EU CLP либо класс опасности I согласно U.S. EPA [2], [3], [4].

2.7 доля ложно положительных заключений (false positive rate): Доля всей химической продукции, дающей отрицательный результат, которая ошибочно идентифицирована как дающая положительный результат. Это один из показателей результативности метода.

2.8 доля ложноотрицательных заключений (false negative rate): Доля всей химической продукции, дающей положительный результат, которая ошибочно была идентифицирована как дающая отрицательный результат. Это один из показателей результативности метода.

2.9 класс опасности 1 согласно СГС ООН (GHS Category 1): Химическая продукция, вызывающая развитие повреждений глазных тканей либо обусловленное физическими причинами существенное ухудшение зрения после воздействия на поверхность глаза, которые не являются полностью обратимыми по истечении 21 дн с момента такого воздействия.

2.10 класс опасности I согласно U.S. EPA (U.S. EPA Category I): Химическая продукция, оказывающая разъедающее воздействие (необратимое разрушение глазных тканей), приводящая к поражению роговицы либо вызывающая сохраняющуюся болезненную чувствительность глаз в течение 21 дн и более [4].

2.11 класс опасности отсутствует (Not-classified): Химическая продукция, не удовлетворяющая критериям классификации для химической продукции, относящейся к классу опасности 1, подклассу опасности 2A или 2B согласно СГС ООН, классу опасности 1 или 2 согласно EU CLP либо классам безопасности I, II или III согласно U.S. EPA [2], [3], [4].

2.12 контрольная проба растворителя/вещества-носителя (solvent/vehicle control): Ничем не обработанная проба, включающая в себя все составляющие испытательной системы, содержащая растворитель или вещество-носитель и используемая наряду с пробами, содержащими исследуемое вещество, и другими контрольными пробами для определения базовой реакции для образцов, обработанных исследуемым веществом, разведенным в том же растворителе или веществе-носителе. При параллельном использовании с отрицательной контрольной пробой также позволяет выяснить, взаимодействует ли растворитель или вещество-носитель с испытательной системой.

2.13 многоуровневая стратегия исследования (tiered testing strategy): Стратегия, предусматривающая поэтапное проведение исследования, при котором вся существующая информация об исследуемой химической продукции анализируется в определенном порядке, с рассмотрением на каждом уровне совокупности имеющихся свидетельств с целью определения достаточности доступной информации для принятия решения о классификации по степени опасности перед переходом на следующий уровень. Если способность исследуемой химической продукции вызывать раздражение может быть подтверждена на основе существующей информации, дальнейшее исследование не требуется. Если способность химической продукции вызывать раздражение не может быть подтверждена на основе существующей информации, исследование продолжается в виде поэтапно выполняемой серии испытаний на животных до тех пор, пока исследуемая химическая продукция не будет однозначно классифицирована.

2.14 надежность (reliability): Показатель того, что метод испытаний может быть реализован с получением воспроизводимых результатов в рамках одной или различных лабораторий в течение продолжительного времени при применении одного и того же протокола. Он оценивается путем вычисления внутри- и межлабораторной воспроизводимости и внутрилабораторной повторяемости.

2.15 опасность (hazard): Изначально присутствующее свойство химической продукции или ситуации, заключающееся в их потенциальной способности вызывать деструктивные последствия в случаях, когда организм, система или субпопуляция подвергаются их воздействию.

2.16 отрицательная контрольная проба (negative control): Ничем не обработанная, используемая параллельно проба, включающая в себя все составляющие испытательной системы. Используется наряду с пробами, обработанными исследуемой химической продукцией и другими контрольными пробами для выяснения, взаимодействует ли используемый растворитель с испытательной системой.

2.17 оценка по совокупности имеющихся свидетельств (weight-of-evidence): Процесс рассмотрения преимуществ и недостатков различной имеющейся информации при подготовке и обосновании заключения о потенциальной опасности исследуемой химической продукции.

2.18 положительная контрольная проба (positive control): Используемая параллельно проба, содержащая все компоненты испытательной системы и обрабатываемая с использованием вещества, заведомо дающего положительный результат. Чтобы обеспечить возможность учитывать изменчивость во времени результата, получаемого для данной пробы, этот положительный результат не должен быть слишком завышенным.

2.19 проницаемость флуоресцеина (fluorescein leakage): Количество проходящего через слой клеток флуоресцеина, измеряемое посредством флуоресцентной спектроскопии.

2.20 Регламент Европейского союза по классификации, маркировке и упаковке химических веществ и смесей; EU CLP (European Commission Regulation on the Classification, Labelling and Packaging of Substances and Mixtures - EU CLP): Документ, имплементирующий в Европейском союзе (ЕС) систему классификации химической продукции (веществ и их смесей) СГС ООН [3].

2.21 релевантность (relevance): Показатель соответствия метода испытаний результату, полученному при испытаниях, а также его обоснованности и пригодности для определенных целей применения. Он указывает пределы, в которых метод позволяет правильно измерить или спрогнозировать исследуемый биологический эффект. Оценка релевантности включает в себя оценку точности (согласованности) метода исследования [9].

2.22 Согласованная на глобальном уровне система классификации и маркировки химической продукции (ООН); СГС (Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals by Nation (UN); GHS): Система, предусматривающая классификацию химической продукции (веществ и смесей) в зависимости от характерных видов и уровней физической опасности, опасности для здоровья человека или опасности для окружающей среды, с применением соответствующих средств информирования, таких как пиктограммы, сигнальные слова, краткая характеристика опасности, меры по предупреждению опасности и паспорта безопасности, чтобы обеспечить информацией о ее негативном воздействии с целью защиты людей (в том числе предпринимателей, работников, перевозчиков, потребителей и представителей аварийных служб) и окружающей среды [2].

2.23 серьезные повреждения глаз (serious eye damage): Развитие повреждений глазных тканей либо обусловленное физическими причинами существенное ухудшение зрения после воздействия на поверхность глаза испытуемой химической продукцией, которые не являются полностью обратимыми по истечении 21 дня с момента такого воздействия.