ГОСТ 34735-2021

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА

Методы испытаний с применением реконструированного рогового эпителия человека (RhCE) для определения химической продукции, не требующей классификации опасности как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз

Methods for studying the effects of chemicals on the human body. Reconstructed human corneal epithelium (RhCE) test methods to determine chemicals not requiring hazard classification as irritating or serious eye damage

МКС 71.040.10
         13.020.01

Дата введения 2024-05-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены".

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт метрологии" (БелГИМ) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протоколом от 30 июня 2021 г. N 141-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 16 ноября 2023 г. N 1408-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34735-2021 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 мая 2024 г.

5 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному документу OECD 492:2019* "Руководство по тестированию химической продукции. Метод испытания с применением реконструированного рогового эпителия человека (RhCE) для определения химической продукции, не требующей классификации и маркировки как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз" ("Guidelines for the testing of chemicals. Reconstructed human Cornea-like Epithelium (RhCE) test method for identifying chemicals not requiring classification and labelling for eye irritation or serious eye damage", MOD) путем изменения его структуры для приведения в соответствие с правилами, установленными в ГОСТ 1.5 (подразделы 4.2 и 4.3).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для увязки с наименованиями, принятыми в существующем комплексе межгосударственных стандартов.

Международный документ разработан Международной организацией экономического сотрудничества и развития (OECD).

Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой указанного международного документа приведено в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Введение

Под серьезным повреждением глаз, в соответствии с Согласованной на глобальном уровне системой классификации и маркировки химической продукции Организации Объединенных Наций (СГС ООН) [1] понимают такие повреждения глазных тканей либо такое обусловленное физическими причинами существенное ухудшение зрения после воздействия на глаза исследуемой химической продукции, которые не могут быть полностью обратимы. Напротив, раздражение глаз, также описанное в рамках СГС ООН, обозначает изменения, происходящие в глазах после воздействия на них исследуемой химической продукции, которые являются полностью обратимыми. Исследуемую химическую продукцию, вызывающую серьезные повреждения глаз, необходимо относить к классу опасности 1, а вызывающую раздражение глаз - к классу опасности 2 в соответствии с классификацией СГС ООН. Исследуемая химическая продукция, которая не была классифицирована как способная вызывать раздражение или серьезное повреждение глаз, рассматривается как не отвечающая условиям для отнесения ее к классу опасности 1 или 2 (подклассы опасности 2A или 2B) согласно СГС ООН, т.е. как продукция, для которой класс опасности согласно СГС ООН отсутствует.

Оценивание проявлений серьезного повреждения/раздражения глаз обычно предполагает использование для этой цели лабораторных животных (Руководство OECD по проведению испытаний (OECD 405); впервые принято в 1981 г., пересмотрено в 1987, 2002 и 2017 гг.) [2]. Выбор наиболее подходящего метода исследований, а также реализация положений настоящего стандарта должны осуществляться с учетом требований Руководящего документа по интегрированным подходам к исследованиям и оценке (Integrated Approaches on Testing and Assessment - IATA) серьезного повреждения и раздражения глаз [3].

Общепризнанно, что в обозримом будущем не следует ожидать появления одного единственного метода in vitro, который мог бы полностью заменить метод in vivo Дрейза [2], [18], позволяющий спрогнозировать весь диапазон серьезного повреждения/раздражения глаз, вызываемого химической продукцией различных классов. Тем не менее выверенное сочетание нескольких альтернативных методов испытаний, реализуемое в рамках единых (многоуровневых) стратегий исследования, основанных на "восходящем"/"нисходящем" подходе, вполне может оказаться способным заменить собой вышеупомянутый метод Дрейза [19]. Предполагается, что применение "восходящего" подхода уместно для случаев, когда, исходя из уже имеющейся информации, способность исследуемой химической продукции вызывать раздражение глаз, предположительно, в недостаточной степени выражена для присвоения ей конкретного класса опасности, в то время как к "нисходящему" подходу следует прибегать в ситуациях, когда ее воздействие, по всей вероятности, должно приводить к серьезному повреждению глаз.

Применение методов EpiOcular EIT, SkinEthic HCE EIT, LabCyte CORNEA-MODEL24 EIT и MCTT HCETM EIT рекомендовано для определения химической продукции, не требующей классификации как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз в рамках СГС ООН (класс опасности отсутствует согласно СГС ООН) [1] без необходимости проведения дальнейших исследований в рамках соответствующей стратегии испытаний на основе "восходящего"/"нисходящего" подхода, предложенного Scott et al., например, на ранних этапах реализации "восходящего" подхода либо на заключительных этапах реализации "нисходящего" подхода. В то же время методы EpiOcular EIT, SkinEthic HCE EIT, LabCyte CORNEA-MODEL24 EIT и MCTT HCETM EIT не предназначены для присвоения химической продукции класса опасности 1 согласно СГС ООН (серьезное повреждение глаз) или класса опасности 2 согласно СГС ООН (раздражение глаз). Разделение химической продукции на эти два класса опасности должно обеспечиваться на другом уровне выбранной стратегии исследования [3]. Исследуемая химическая продукция, которая идентифицируется как вызывающая раздражающее действие/серьезные повреждения глаз при применении методов EpiOcular EIT, SkinEthic HCE EIT, LabCyte CORNEA-MODEL24 EIT или MCTT HCE EIT, в дальнейшем подлежит обязательным исследованиям (in vitro и/или in vivo) для подготовки окончательного заключения о ее классификации (класс опасности отсутствует, класс опасности 2 или класс опасности 1 согласно СГС ООН), например, с использованием методов, установленных в [4], [5], [6], [7] либо в [2].

Настоящий стандарт распространяется на методы испытаний для оценки потенциальной опасности для глаз исследуемой химической продукции, исходя из ее способности вызывать цитотоксичность при контакте с тканью RhCE, которая определяется посредством использования тетразолиевого красителя (ТК) (например, MTT [3-(4,5-диметилтиазола-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромида; тиазолила синего тетразолия бромида; CAS N 298-93-1] для методов VRM1 и VRM2, WST-8 [2-(2-метокси-4-нитрофенил)-3-(4-нитрофенил)-5-(2,4-дисульфофенил)-2H-тетразолия, мононатриевой соли; CAS N 193149-74-5] для метода LabCyte CORNEA-MODEL24 EIT или WST-1 [4-[3-(4-йодофенил)-2-(4-нитрофенил)-2Н-5-тетразолио]-1,3-бензол дисульфоната; CAS N 150849-52-8] для метода MCTT HCE EIT) [20]-[22] (см. 4.3). Жизнеспособность тканей RhCE после воздействия испытуемой химической продукции определяют относительно тканей, обработанных отрицательной контрольной пробой (% жизнеспособности), и затем прогнозируют потенциальную опасность испытуемой химической продукции для глаз.

Стандарты результативности [23] являются пригодными для обеспечения проведения валидации новых или модифицированных методов испытаний in vitro, подобных методам, например, EpiOcular EIT, SkinEthic HCE EIT, LabCyte CORNEA-MODEL24 EIT и MCTT HCE EIT в соответствии с принципами [24], и обеспечивают возможность своевременного внесения соответствующих изменений в OECD 492 с целью включения в него этих новых методов. Присоединение к системе взаимного признания данных (Mutual Acceptance of Data - MAD) для методов испытаний, успешно прошедших валидацию в соответствии со стандартами результативности, гарантируется только при условии, что эти методы были одобрены и включены в OECD 492.

     1 Область применения

1.1 Настоящий стандарт устанавливает методы испытаний in vitro для определения химической продукции (веществ и смесей), не требующей классификации и маркировки как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз в соответствии с требованиями СГС ООН [1]. Данные методы предусматривают использование так называемого реконструированного эпителия роговицы человеческого глаза (reconstructed human cornea-like epithelium - RhCE), достоверно имитирующего гистологические, морфологические, биохимические и физиологические характеристики эпителия роговицы глаза человека. Для определения химической продукции, способной вызывать серьезные повреждения глаз, существенные для конечных показателей здоровья человека, или не требующей такой классификации, могут применяться также четыре альтернативных валидированных метода испытаний in vitro, признанные научно обоснованными и изложенные в [4], [5], [6] и [7].

1.2 Все четыре метода испытаний - EpiOcular, Eye Irritation Test (EIT), SkinEthic Human Corneal Epithelium (HCE) EIT, LabCyte CORNEA-MODEL24 EIT и MCTT HCETM EIT, на которые распространяется настоящий стандарт, основаны на использовании в качестве испытательной системы поставляемых на рынок моделей тканей RhCE. Для оценки способности химической продукции вызывать раздражение/серьезное повреждение глаз [8]-[15] были проведены валидационные исследования указанных методов испытаний, два из которых (EpiOcular EIT и SkinEthic HCE EIT) далее по тексту упоминаются как валидированные референтные методы испытания (VRM1 и VRM2 соответственно). По результатам валидационных исследований и внешней независимой экспертизы [10], [13], [16], [17] сделано заключение о том, что методы EpiOcular EIT, SkinEthic HCE EIT, LabCyte CORNEA-MODEL24 EIT и MCTT HCETM EIT позволяют достоверно определять химическую продукцию (как вещества, так и смеси), не требующую классификации и маркировки как вызывающую раздражение и серьезное повреждение глаз в соответствии с требованиями СГС ООН [1], и данные методы были рекомендованы как научно обоснованные для данной цели. В приложениях A-E обобщены важнейшие положения предлагаемых методов испытаний, а также представлены блок-схемы, иллюстрирующие последовательность действий, которую следует выбирать при проведении испытаний в зависимости от конкретной ситуации.

     2 Термины, определения и сокращения

В настоящем стандарте применены следующие термины и сокращения с соответствующими определениями:

2.1 валидированный метод испытаний (validated test method): Метод испытаний, для которого завершены валидационные исследования с целью определения его релевантности (включая точность) и надежности для конкретной цели. Важно отметить, что валидированный метод не обязательно обеспечивает достаточную результативность с точки зрения его точности и надежности для признания его пригодным для конкретной цели [24].

2.2 вещество (substance): Химические элементы и их соединения, представленные в естественном состоянии или полученные при выполнении производственного процесса, включая любые добавки, необходимые для сохранения стабильности продукта, а также любые примеси, наличие которых обусловлено применяемым процессом, но исключая любые растворители, удаление которых не сказывается на стабильности вещества или на его составе [1].

2.3 ВЭЖХ (HPLC - High Performance Liquid Chromatography): Высокоэффективная жидкостная хроматография.

2.4 воспроизводимость (reproducibility): Согласованность результатов, получаемых при неоднократных испытаниях одной и той же химической продукции при применении одного и того же протокола (см. термин "надежность") [24].

2.5 восходящий подход (Bottom-Up Approach): Поэтапный подход, применяемый при исследовании химической продукции, предположительно не требующей классификации и маркировки как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз, при котором в первую очередь определяется химическая продукция, не требующая классификации (отрицательный отклик), для выделения ее из числа прочей химической продукции (положительный отклик) [3].

2.6 доля ложноположительных заключений (false positive rate): Доля всей химической продукции, дающей отрицательный отклик, которая ошибочно идентифицирована как дающая положительный отклик. Это один из показателей результативности метода.

2.7 доля ложноотрицательных заключений (false negative rate): Доля всей химической продукции, дающей положительный отклик, которая ошибочно была идентифицирована как дающая отрицательный отклик. Это один из показателей результативности метода.

2.8 жизнеспособность тканей (tissue viability): Показатель, определяющий суммарную активность клеточной популяции в реконструированной ткани как ее способность восстанавливать краситель МТТ, который в зависимости от измеряемого конечного показателя и применяемого протокола испытаний коррелирует с общим числом и/или выживаемостью клеток.

2.9 замещающие испытания (replacement test): Испытания, которые предназначены для замены регулярно проводимых испытаний и одобрены для целей выявления опасностей и/или оценки рисков, обеспечивают доказанный аналогичный или более высокий уровень защиты здоровья человека, животных или охраны окружающей среды по сравнению с принятыми методами испытаний независимо от условий проведения испытаний и выбора исследуемой химической продукции [24].

2.10 избыточная доза (infinite dose): Количество исследуемой химической продукции, наносимой на модель ткани RhCE, превышающее количество, требуемое для полного и равномерного покрытия поверхности эпителия.

2.11 испытание (test): Отдельное испытание исследуемой химической продукции, проводимое по меньшей мере на двух параллельно обрабатываемых образцах ткани, как установлено соответствующими СОП.

2.12 исследуемая химическая продукция (test chemical): Химическая продукция (вещества или смеси), которая подвергается испытаниям.

2.13 класс опасности 1 согласно Согласованной на глобальном уровне системе классификации и маркировки химической продукции Организации Объединенных Наций; класс опасности 1 согласно СГС ООН (UN GHS Category 1): См. термины "серьезные повреждения глаз" и/или "необратимые последствия для глаз".

2.14 класс опасности 2 согласно Согласованной на глобальном уровне системе классификации и маркировки химической продукции Организации Объединенных Наций; класс опасности 2 согласно СГС ООН (UN GHS Category 2): См. термины "раздражение глаз" и/или "обратимые последствия для глаз".

2.15 класс опасности согласно Согласованной на глобальном уровне системе классификации и маркировки химической продукции Организации Объединенных Наций отсутствует; класс опасности согласно СГС ООН отсутствует (UN GHS No Category): Химическая продукция, не удовлетворяющая критериям классификации для химической продукции класса опасности 1 или 2 (подклассы опасности 2A или 2B) согласно СГС ООН. Синоним термина "не требует классификации".

2.16 многокомпонентное вещество (мulti-constituent substance): Вещество, характеризуемое количественным составом, в котором две или более основные структурные составляющие содержатся в количестве 10% (по массе), но <80% (по массе). Образование многокомпонентного вещества происходит в процессе производства. Различие между смесью и многокомпонентным веществом состоит в том, что смесь образуется путем соединения двух или более веществ при отсутствии химической реакции. Многокомпонентное вещество, напротив, образуется в результате химической реакции.

2.17 многоуровневая стратегия исследования (tiered testing strategy): Стратегия, предусматривающая поэтапное проведение исследования, при котором вся существующая информация об исследуемой химической продукции анализируется в определенном порядке, с рассмотрением на каждом уровне совокупности имеющихся свидетельств с целью определения достаточности доступной информации для принятия решения о классификации по степени опасности, перед переходом на следующий уровень. Если способность исследуемой химической продукции вызывать раздражение может быть подтверждена на основе существующей информации, дальнейшее исследование не требуется [24].

2.18 МТТ (МТТ): 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромид; тиазолил синий тетразолия бромид (CAS N 298-93-1).