ГОСТ Р 59786-2021/ISO/TS 16782:2016

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КЛИНИЧЕСКИЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Критерии приемлемости партий дегидратированных агара и бульона Мюллера-Хинтон, применяемых для оценки чувствительности к антибиотикам

Clinical laboratory testing. Criteria for acceptable lots of dehydrated Mueller-Hinton agar and broth for antimicrobial susceptibility testing

ОКС 11.100.20

Дата введения 2022-04-01

Предисловие

1 ПОДГОТОВЛЕН Ассоциацией специалистов и организаций лабораторной службы "Федерация лабораторной медицины" (Ассоциация "ФЛМ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 380 "Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы ин витро"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 октября 2021 г. N 1262-ст

4 Настоящий стандарт идентичен международному документу ISO/TS 16782:2016* "Клинические лабораторные исследования. Критерии приемлемости партий дегидратированных агара и бульона Мюллера-Хинтон, применяемых для оценки чувствительности к антибиотикам" (ISO/TS 16782:2016 "Clinical laboratory testing - Criteria for acceptable lots of dehydrated Mueller-Hinton agar and broth for antimicrobial susceptibility testing", IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Международный документ разработан Техническим комитетом ТК 212 "Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы in vitro" Международной организации по стандартизации (ИСО).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ "О стандартизации в Российской Федерации". Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.rst.gov.ru)

Введение

Для оценки чувствительности микроорганизмов были рекомендованы различные среды, но исторически сложилось, что бульон Мюллера-Хинтон был выбран в качестве эталонной среды для определения минимальных подавляющих концентраций (МПК) методом последовательных микроразведений (см. ИСО 20776-1), а агар Мюллера-Хинтон наиболее широко используется для определения чувствительности быстрорастущих бактерий к антибиотикам диско-диффузионным методом.

Среда Мюллера-Хинтон обеспечивает удовлетворительный рост большинства неприхотливых патогенов (с обычными питательными потребностями), приемлемую воспроизводимость от партии к партии, низкий уровень ингибиторов сульфаниламидов, триметоприма и тетрациклина, а также при использовании этой среды в ходе исследований чувствительности к антимикробным препаратам в течение нескольких десятилетий было собрано большое количество данных.

Настоящий стандарт разработан с целью описания питательных сред и протокола, при помощи которых производители дегидратированных агара и бульона Мюллера-Хинтон могут определить приемлемые рабочие характеристики сред.

Результаты исследований должны соответствовать установленным предельным диапазонам контроля качества для каждой комбинации антимикробного препарата и контрольных штаммов. Каждая производственная партия проходит проверку, по крайней мере, при помощи данных комбинаций антимикробных препаратов и контрольных штаммов.

ISO/TS 16782 был разработан, в частности, на основе двух документов Института клинических и лабораторных стандартов (Clinical and Laboratory Standards Institute - CLSI): CLSI M6-A2 [1] (протоколы оценки дегидратированного агара Мюллера-Хинтон) и CLSI М32-Р [2] (оценка партий дегидратированного бульона Мюллера-Хинтон для определения чувствительности к антимикробным препаратам) с разрешения CLSI. После опубликования ИСО 16782 документы CLSI М6-А2 [1] и М32-Р [2] больше не будут доступны. Производители могут руководствоваться ИСО 16782 при оценке рабочих характеристик производственных партий агара и бульона Мюллера-Хинтон.

     1 Область применения

Настоящий стандарт описывает физические свойства дегидратированного агара Мюллера-Хинтон и дегидратированного бульона Мюллера-Хинтон и критерии, по которым производители могут оценить качество производственных партий агара Мюллера-Хинтон и бульона Мюллера-Хинтон. Производственные партии бульона Мюллера-Хинтон или агара Мюллера-Хинтон после оценки могут быть использованы всеми потребителями, включая производителей питательных сред для оценки чувствительности к антимикробным препаратам in vitro, в качестве среды для проведения исследований чувствительности к антимикробным препаратам.

Настоящий стандарт не распространяется на добавки (например, кровь или препараты крови), которые добавляют в питательную среду для поддержания роста прихотливых бактерий (со сложными питательными потребностями) [3]-[6]. Внесение добавок осуществляют после того, как из дегидратированной среды приготавливают конечный продукт в жидком виде, который настоящим стандартом не рассматривается. Агар Мюллера-Хинтон можно использовать для определения минимальных подавляющих концентраций (МПК) методом последовательных разведений в агаре [4], [6] или методом градиентной диффузии, настоящий стандарт включает только оценку рабочих характеристик агара Мюллера-Хинтон с использованием диско-диффузионного метода, как описано в нормативных документах Института клинических и лабораторных стандартов (CLSI) [5] и Европейского комитета по определению чувствительности к антимикробным препаратам (EUCAST) [3].

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты [для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения)]:

ISO 20776-1:2006*, Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems - Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of performance of antimicrobial susceptibility test devices - Part 1: Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against rapidly growing aerobic bacteria involved in infectious diseases (Клинические лабораторные исследования и тест-системы для диагностики in vitro. Исследование чувствительности инфекционных агентов и оценка функциональных характеристик изделий для исследования чувствительности к антимикробным средствам. Часть 1. Референтный метод лабораторного исследования активности антимикробных агентов против быстрорастущих аэробных бактерий, вызывающих инфекционные болезни)

________________

* Действует ISO 20776-1:2019 "Исследование чувствительности инфекционных агентов и оценка функциональных характеристик изделий для исследования чувствительности к антимикробным средствам. Часть 1. Референтный метод микроразведений в бульоне для лабораторного исследования активности антимикробных агентов против быстрорастущих аэробных бактерий, вызывающих инфекционные болезни". Однако для однозначного соблюдения требования настоящего стандарта, выраженного в датированной ссылке, рекомендуется использовать только указанное в этой ссылке издание.

CLSI М100, Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Informational Supplement (Стандарты определения чувствительности к антимикробным препаратам; Информационное приложение)

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 антимикробный препарат (antimicrobial agent): Вещество биологического, полусинтетического или синтетического происхождения, которое ингибирует рост бактерий или убивает их и, таким образом, может быть использовано для лечения инфекций.

Примечание 1 - Дезинфицирующие средства, антисептики и консерванты не включены в данное определение.

[ИСО 20776-1:2006, 2.1]

3.2 диск с антимикробным препаратом (antimicrobial disc): Небольшой бумажный диск, содержащий известные количества антимикробных препаратов, используемый для определения чувствительности in vitro.

3.3 концентрация (concentration): Количество антимикробного препарата в определенном объеме жидкости.

Примечание 1 - Концентрацию выражают в мг/дм (мг/л).

Примечание 2 - мг/дм (мг/л) = мкг/см (мкг/мл), но единицу измерения мкг/см (мкг/мл) использовать не рекомендуется.

[ИСО 20776-1:2006, 2.2.2]

3.4 исходный раствор (stock solution): Раствор, используемый для дальнейших разведений.

[ИСО 20776-1:2006, 2.3]

3.5 минимальная подавляющая концентрация; МПК (minimum inhibitory concentration MIC): Самая низкая концентрация антимикробного препарата, которая в определенных условиях предотвращает видимый рост бактерий in vitro в течение определенного периода времени.

Примечание 1 - МПК выражается в мг/дм (мг/л).

[ИСО 20776-1:2006, 2.4, модифицирован - слова "самая низкая концентрация, которая" были изменены на "самая низкая концентрация антимикробного препарата, которая"]

3.6 референтный [контрольный] штамм (reference strain): Каталогизируемые, охарактеризованные микроорганизмы с устойчивыми, определенными антибактериальными фенотипами и/или генотипами чувствительности.

Примечание - Референтные штаммы сохраняют как базовые культуры, из которых получают рабочие культуры. Они могут быть получены из признанных национальных коллекций культур и использованы для контроля качества.

[ИСО 20776-1:2006, 2.7, модифицирован - слова "охарактеризованные бактерии" были изменены на "охарактеризованные микроорганизмы", а "коллекции культур" в примечании 1 были изменены на "признанные национальные коллекции культур"]

3.7 Метод определения чувствительности (Susceptibility testing method)

3.7.1 метод разведений в бульоне (broth dilution): Процедура, при которой емкости заполняют соответствующими объемами среды, содержащей антимикробный препарат в постепенно возрастающих концентрациях (как правило, в два раза), и известным инокулюмом.

Примечание 1 - Целью данного метода является определение МПК.

[ИСО 20776-1:2006, 2.8.1, модифицирован - формулировка "раствор антимикробного препарата, используемого в постепенно возрастающих концентрациях (как правило, в два раза) и соответствующие объемы среды, содержащие" была изменена на "среды, содержащей антимикробный препарат в постепенно возрастающих концентрациях (как правило, в два раза), и"]

3.7.2 микроразведение (microdilution): Выполнение разведения среды в планшетах для микроразведения вместимостью 200 мм (мкл) на лунку.

[ИСО 20776-1:2006, 2.8.2, модифицирован - слова "емкость 200 мм (мкл) на лунку" изменены на "вместимость 200 мм (мкл) на лунку"]

3.7.3 диско-диффузионный метод (disc diffusion): Процедура, при которой диски с антимикробным препаратом наносят на поверхность агаризованной среды, предварительно равномерно засеянную известным инокулюмом, с последующей инкубацией в определенных условиях, в результате чего формируется зона подавления роста микроорганизма, размер которой соответствует чувствительности/устойчивости микроорганизма к антимикробному препарату.

3.7.4 диаметр зоны (zone diameter): Диаметр (в мм) зоны подавления роста вокруг бумажного диска, содержащего антимикробный препарат в определенном количестве, используемого для диско-диффузионного метода.

3.8 бульон (broth): Жидкая питательная среда, используемая для выращивания бактерий.

3.9 инокулюм (inoculum): Количество жизнеспособных бактерий в суспензии в расчете на конечный объем.

Примечание 1 - Инокулюм выражается в колониеобразующих единицах на кубический сантиметр (миллилитр) [КОЕ/см (КОЕ/мл)].

[ИСО 20776-1:2006, 2.10, модифицирован - слова "количество бактерий" была заменена на "количество жизнеспособных бактерий"]

3.10 дегидратированный бульон Мюллера-Хинтон; МХБ (dehydrated Mueller-Hinton broth dMHB): Высушенная бактериологическая среда, используемая для приготовления жидкой среды для определения чувствительности к антимикробным препаратам методом разведений в жидкой питательной среде.

3.11 дегидратированный агар Мюллера-Хинтон; МХА (dehydrated Mueller-Hinton agar dMHA): Высушенная бактериологическая среда, используемая для приготовления чашек с агаром для определения чувствительности к антимикробным препаратам диско-диффузионным методом, методом градиентной диффузии и определения МПК методом разведений в агаре.

     4 Требования к бульону Мюллера-Хинтон

4.1 Компоненты бульона Мюллера-Хинтон

Среда бульона Мюллера-Хинтон для оценки чувствительности к антибиотикам традиционно содержит следующие примерные количества компонентов на дм (литр) очищенной воды (для соответствия критериям эффективности могут потребоваться корректировки) [7]:

- дегидратированный настой из 300 г говядины (то есть 2 г порошка экстракта говядины);