ГОСТ 34554-2019

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА

Испытания по оценке репродуктивной токсичности двух поколений

Methods of testing the chemicals of human hazard. Tests for the estimation of reproductive toxicity of two generations

МКС 75.080
          11.020

          11.120.01

Дата введения 2020-06-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием "Российский научно-технический центр информации по стандартизации, метрологии и оценке соответствия" (ФГУП "СТАНДАРТИНФОРМ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 июля 2019 г. N 120-П)

За принятие проголосовали:

(Поправка. ИУС N 8-2020).

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 8 августа 2019 г. N 472-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34554-2019 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июня 2020 г.

5 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному документу OECD Test N 416:2001* "Руководство по испытанию химических веществ. Исследование репродуктивной токсичности на двух поколениях" ("Guideline for testing of chemicals. Two-generation reproduction toxicity study", MOD), путем:

________________
     * Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

- включения в текст стандарта дополнительных фраз, выделенных курсивом;

- изменения структуры документа для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.1).

Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой примененного в нем международного документа приведено в дополнительном приложении ДА.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6)

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 8, 2020 год      

Поправка внесена изготовителем базы данных

Введение

В Копенгагене в июне 1995 г. Рабочая группа OECD по репродуктивной и эмбриональной токсичности обсуждала необходимость актуализации существующих руководств OECD по репродуктивной и эмбриональной токсичности и разработке новых руководств по конечным точкам исследования. Рабочая группа рекомендовала пересмотр руководства по исследованию репродуктивной токсичности на двух поколениях, с учетом предложений, полученных из США и Германии. Рабочая группа достигла соглашения по всем основным элементам пересмотренного варианта настоящего руководства [1].

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает порядок проведения исследований репродуктивной токсичности на двух поколениях лабораторных животных с целью представления общей информации по воздействию исследуемого вещества на состояние и функционирование мужской и женской репродуктивных систем, включая функцию гонад, овариальный цикл, сексуальное поведение, зачатие, беременность, роды, лактацию и вскармливание, рост и развитие потомства.

Настоящий стандарт предназначен для получения информации о влиянии исследуемого вещества на неонатальную заболеваемость, смертность и предварительных данных о токсичности при пренатальном и постнатальном развитии. Настоящий стандарт предназначен для изучения роста и развития животных поколения F1, а также для оценки сохранности и работоспособности мужской и женской репродуктивных систем, роста и развития поколения F2. Дополнительная информация по эмбриональной токсичности и функциональным нарушениям может быть получена с помощью дополнительных исследований, которые могут быть включены в рассматриваемый план исследования с учетом руководств по эмбриональной токсичности и/или эмбриональной нейротоксичности, или при отдельном изучении данных параметров с учетом соответствующих руководств.

     2 Правила исследования

2.1 Исследуемое вещество вводят в ступенчато увеличиваемых дозах нескольким группам животных мужского и женского полов. Самцы поколения Р (родительское) для обнаружения какого-либо нежелательного эффекта на сперматогенез должны получать вещество в процессе роста и в течение одного полного цикла сперматогенеза (приблизительно 56 дней для мышей и 70 дней для крыс). Влияние на сперму определяется по ряду параметров спермы (например, морфология спермы и подвижность сперматозоидов) и с помощью тщательной гистопатологии препаратов ткани. Если данные по сперматогенезу получены в ранее проведенном исследовании с многократным введением вещества в течение достаточного периода времени, например при 90-дневном исследовании, то самцов поколения Р можно не включать в план данного исследования. Однако рекомендуется организовать хранение образцов или цифровых изображений спермы поколения Р для возможности последующего изучения. Самки поколения Р должны получать исследуемое вещество в процессе роста и на протяжении нескольких полных овариальных циклов, чтобы обнаружить какой-либо нежелательный эффект исследуемого вещества на нормальное течение овариального цикла. Исследуемое вещество вводится первому (родительскому Р) поколению животных во время периода спаривания, в течение последующей беременности и на протяжении вскармливания их потомства, поколения F1. После вскармливания введение исследуемого вещества продолжается у животных поколения F1 в течение их роста до взросления, спаривания, получения поколения F2 и в период вскармливания поколения F2.

2.2 Клинические наблюдения и патологические исследования проводят на всех животных с признаками токсических эффектов, уделяя особое внимание обнаружению влияния на состояние и функционирование мужской и женской репродуктивных систем, росту и развитию их потомства.

     3 Описание метода/подготовка к исследованию

3.1 Выбор вида животных

Наиболее подходящим видом животных для данного исследования являются крысы. При использовании других видов животных необходимо обосновать сделанный выбор и внести соответствующие изменения в план исследования. Не следует использовать в исследовании виды животных с низкой плодовитостью или хорошо известной высокой вероятностью врожденных пороков развития. На начало исследования вариабельность массы тела лабораторных животных должна быть минимальной и не превышать 20% от средней массы тела животных обоих полов.

3.2 Условия содержания и кормления

3.2.1 Температура в помещении для содержания лабораторных животных должна составлять (22±3)°С. Несмотря на то, что относительная влажность должна быть не менее 30% и желательно не превышать 70%, за исключением периодов уборки помещения, оптимальной является влажность от 50% до 60%. Освещение должно быть искусственным, с чередованием периодов - 12 ч света и 12 ч темноты. Для кормления может быть использован стандартный лабораторный корм с неограниченной подачей питьевой воды. Выбор корма зависит от возможности его приемлемого смешивания с исследуемым веществом, если введение вещества осуществляют вместе с кормом.

3.2.2 Животные могут содержаться в отдельных клетках или небольшими группами одного пола. Процедуры спаривания следует проводить в клетках, соответствующих этой процедуре. После получения доказательства копуляции осемененные самки должны содержаться в индивидуальных клетках или клетках для беременных животных. Также животные могут содержаться небольшими группами и разделяться за один или два дня до родов. Лабораторные животные перед родами должны быть обеспечены достаточным количеством соответствующего подстилочного материала для построения гнезда.

3.3 Подготовка животных

3.3.1 В исследовании следует использовать здоровых молодых животных, которые прошли период адаптации к лабораторным условиям не менее пяти дней и ранее не подвергались другим экспериментальным процедурам. Должны быть описаны характерные признаки и особенности лабораторных животных с указанием биологического вида, породы, источника происхождения, пола, массы тела и/или возраста. Должны быть известны родственные отношения между включенными в исследование животными, чтобы исключить спаривание животных одного помета. Животных в произвольном порядке распределяют в контрольную и подопытные группы (рекомендуется метод стратификации по массе тела). Клетки должны быть размещены таким образом, чтобы свести к минимуму возможные эффекты, связанные с их расположением. Каждому животному должен быть присвоен индивидуальный идентификационный номер. Животным поколения Р номер должен быть присвоен до начала введения исследуемого вещества. Идентификацию животных поколения F1, предназначенных для последующего спаривания, проводят при отъеме особей от материнского питания. Записи о происхождении потомков должны быть сохранены для всех выбранных животных поколения F1. Дополнительно рекомендуется идентификация всех животных помета сразу после рождения, если план исследования предусматривает индивидуальное взвешивание или проведение функциональных исследований.

3.3.2 На начало исследования возраст животных поколения Р должен составлять от пяти до девяти недель. По возможности животные во всех подопытных группах должны быть одного возраста и одинаковой массы тела.

     4 Процедура исследования

4.1 Число и пол животных

Каждая подопытная и контрольная группы должны содержать число животных, достаточное для получения не менее 20 беременных самок, достигших родов. При испытании веществ, вызывающих нежелательные эффекты (например, стерилизация, повышенная токсичность при высокой дозе) это может быть недостижимо. Основная задача - получить достаточное количество беременных животных для обеспечения объективной оценки возможного влияния вещества на репродуктивную функцию, беременность, материнское поведение и вскармливание, рост и развитие поколения F1 от зачатия до полового созревания и развитие их потомства (поколения F2) до окончания грудного вскармливания. В случае невозможности получения желаемого числа беременных самок (т.е. не менее 20) не обязательно прекращать исследование, и каждый конкретный случай должен оцениваться отдельно.

4.2 Подготовка вещества для введения

4.2.1 Исследуемое вещество вводится перорально (с пищей, питьевой водой или через желудочный зонд). При необходимости допустимы другие пути введения вещества (например, через кожу или ингаляционно). Пероральный путь введения вещества является предпочтительным.

4.2.2 При необходимости исследуемое вещество растворяют или суспендируют в подходящем растворителе (носителе). Рекомендуется по возможности сначала использовать водные растворы/суспензии, далее рассматривают возможность использования масляных растворов/эмульсий (например, с кукурузным маслом), а затем возможность приготовления раствора с использованием других растворителей. Для растворителей, отличных от воды, должны быть известны токсичные характеристики носителя. Должна быть подтверждена стабильность исследуемого вещества в растворителе.

4.3 Выбор дозы

4.3.1 В план исследования должны быть включены не менее трех уровней доз с параллельным контролем. При отсутствии ограничения по физико-химическому или биологическому воздействию исследуемого вещества следует выбирать максимальный уровень дозы для достижения токсического воздействия, который не должен быть летальным и не вызывать тяжелых страданий. При неожиданной гибели животных допустимыми считают исследования с уровнем смертности первого поколения Р не более 10%. Следует выбрать нисходящую последовательность уровней дозы с целью обнаружения любого эффекта, связанного с дозировкой, и уровня без наблюдаемых токсических эффектов (NOAEL) или дозы, близкие к пределу обнаружения, которые позволяют определить ориентировочную дозу. Обычно оптимальным считается 2-4-кратный интервал для установки уровней нисходящей дозы, и дополнительно для 4-й подопытной группы рекомендуется использовать больший интервал (например, более чем десятикратное уменьшение) между дозами. Для исследований, в которых вещество смешивают с кормом, интервал между дозами не должен превышать трехкратную дозу. Уровень доз следует выбирать с учетом имеющихся токсикологических данных, в частности, результатов исследований с многократным введением вещества. Должна быть учтена любая имеющаяся информация о метаболизме и кинетике исследуемого вещества или родственных веществ. Кроме того, такая информация также будет полезна для демонстрации адекватности выбранного режима введения доз.

4.3.2 Контрольная группа должна состоять из животных, не получающих исследуемое вещество или получающих только растворитель, если растворитель используют для введения исследуемого вещества. За исключением введения исследуемого вещества, животные контрольной группы должны подвергаться всем тем же процедурам, что и животные подопытных групп. При использовании растворителя контрольная группа должна получать растворитель в максимально используемом объеме. Если исследуемое вещество вводится вместе с кормом и вызывает снижение потребления или использования корма, то может потребоваться использование спаренной контрольной группы. Могут быть использованы альтернативные данные из контролируемых исследований, проведенных для оценки влияния снижения потребления пищи на параметры репродуктивности, вместо соответствующей спаренной контрольной группы, получающей одинаковое питание.

4.3.3 Должны быть учтены следующие свойства растворителя и других добавок: влияние на абсорбцию, распределение, метаболизм или сохранение исследуемого вещества; влияние на химические свойства исследуемого вещества, приводящее к изменению его токсикологических характеристик; влияние на потребление пищи или воды или состояние упитанности животных.

4.4 Испытание на предельную дозу

Если введение в желудок одной суточной дозы, эквивалентной не менее 1000 мг/кг массы тела, с кормом или питьевой водой, с использованием процедур настоящего исследования, не вызывает наблюдаемых токсических эффектов и на основании данных о структурно и/или метаболически родственных соединениях токсичность не предполагается, то полное исследование с использованием нескольких уровней дозы может не считаться необходимым. Испытание на предельную дозу применяют, кроме случаев, когда воздействие на человека показывает необходимость использования более высокой дозы при внутрижелудочном введении. При использовании других способов введения, таких как ингаляция или нанесение на кожу, предельная доза часто зависит от физико-химических свойств исследуемого вещества, например растворимости.

4.5 Введение доз

4.5.1 Животные должны получать исследуемое вещество в течение семи дней в неделю. Предпочтительным является введение в желудок (с кормом, питьевой водой или желудочным зондом). Использование другого способа введения должно быть обосновано, и могут потребоваться соответствующие изменения.

Все животные должны получать вещество одинаковым способом в течение соответствующего периода проведения эксперимента. При введении исследуемого вещества через желудочный зонд следует использовать соответствующий желудочный катетер. Объем жидкости, вводимой за один раз, не должен превышать 1 мл/100 г массы тела животного (для кукурузного масла максимальный объем - 0,4 мл/100 г массы тела), за исключением водных растворов, которые могут вводиться в объеме 2 мл/100 г массы тела. Для обеспечения постоянного объема для всех уровней доз вариабельность вводимого объема должна быть сведена к минимуму путем корректировки концентраций, за исключением раздражающих или разъедающих веществ, у которых, как правило, наблюдаются выраженные токсические эффекты при повышенных концентрациях. При использовании желудочного зонда потомство обычно получает исследуемое вещество опосредованно через молоко до момента прямого введения после прекращения грудного вскармливания. При введении вещества с кормом или водой потомство, как правило, будет дополнительно получать исследуемое вещество, когда они начнут кормиться самостоятельно в последнюю неделю периода лактации.