ГОСТ ISO 13366-2-2014

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

     

МОЛОКО

     
Подсчет соматических клеток

Часть 2

Руководство по работе флуорооптоэлектронных счетчиков

     
Milk. Enumeration of somatic cells. Part 2. Guidance on the operation of fluro-opto-electronic counters

МКС 67.100

Дата введения 2017-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Научно-производственным республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации" (БелГИСС) на основе собственного перевода англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 июня 2014 г. N 45)

За принятие стандарта проголосовали:

(Поправка).

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 сентября 2016 г. N 1196-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 13366-2-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 13366-2:2006/IDF 148-2:2006* "Молоко. Подсчет соматических клеток. Часть 2. Руководство по работе флуорооптоэлектронных счетчиков" ("Milk - Enumeration of somatic cells - Part 2: Guidance of the operation of fuoro-opto-electronic counters", IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Международный стандарт разработан подкомитетом SC 5 "Молоко и молочные продукты" Технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO) и Международной молочной федерацией (IDF).

Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ИЗДАНИЕ (ноябрь 2019 г.) с поправкой (ИУС 7-2019)

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает руководство по эксплуатации флуороопто-электронных счетчиков соматических клеток с использованием в секции подсчета метода вращающегося диска или проточной цитометрии, используемых при подсчете соматических клеток как в сыром, так и в химически консервированном молоке.

Настоящий стандарт применяют для подсчета соматических клеток как в сыром коровьем молоке, так и в сыром козьем, овечьем и буйволином молоке при соблюдении необходимых условий.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения).

ISO 8196-1, Milk - Definition and evaluation of the overall accuracy of alternative methods of milk analysis - Part 1: Analytical attributes of alternative methods (Молоко. Определение и оценка общей точности альтернативных методов анализа молока. Часть 1. Аналитические признаки альтернативных методов)

ISO 8196-2, Milk - Definition and evaluation of the overall accuracy of alternative methods of milk analysis - Part 2: Calibration and quality control in the dairy laboratory (Молоко. Определение и оценка общей точности альтернативных методов анализа молока. Часть 2. Калибровка и контроль качества в лаборатории по анализу молочной продукции)

ISO 13366-1, Milk - Enumeration of somatic cells - Part 1: Microscopic method (Reference method) (Молоко. Подсчет соматических клеток. Часть 1. Метод с применением микроскопа)

ISO Guide 34, General requirements for the competence of reference material producers (Общие требования к компетентности производителей стандартных образцов)

________________

Заменен на ISO 17034:2016.

ISO Guide 43-1, Proficiency testing by interlaboratory comparisons - Part 1: Development and operation of proficiency testing schemes (Проверка компетентности путем межлабораторных сравнений. Часть 1. Разработка и применение программ проверок компетентности лабораторий)

________________

Заменен на ISO/IEC 17043:2010.

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применяют термины и определения, установленные в ISO 8196-1 и ISO 8196-2, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 контрольный метод (reference method): Метод подсчета соматических клеток, установленный в настоящем стандарте.

3.2 соматические клетки (somatic cells): Клетки, интенсивность флуоресценции которых при окрашивании ДНК в ядрах превышает пороговую.

Примечание - Выражается количеством соматических клеток в см.

     4 Сущность метода

Флуорооптоэлектронные счетчики имеют системы ввода реагентов и пробы для анализа, секцию смешивания и секцию подсчета. В секции смешивания анализируемую пробу смешивают с буферной смесью и окрашивающим раствором. Часть полученной смеси перемещают в секцию подсчета и наносят на предметную плоскость. Каждая окрашенная частица, обнаруживаемая в флуоресцентном микроскопе, испускает электрический импульс, который фильтруется, усиливается и регистрируется. Распределение по высоте результирующего импульса обрабатывается электронным способом, посредством чего происходит разграничение между шумовыми сигналами и импульсами, которые испускаются окрашенными соматическими клетками. Уровень амплитудного селектора импульсов может быть фиксированным или динамичным.

В секции смешивания дозируют и смешивают строго контролируемые объемы пробы для анализа и буферного/окрашивающих растворов. Смешивание можно осуществлять в чашке, в смесительной камере, в центрифуге, в петле для образцов или в трубке, ведущей к проточной кювете.

В секции подсчета можно использовать дисковую или проточную цитометрию. В случае применения дисковой цитометрии тонкую пленку смеси наносят через насадку на верхнюю часть вертикально вращающегося диска. Эта вращающаяся поверхность служит подвижной предметной плоскостью флуоресцентного микроскопа. При использовании проточной цитометрии часть смеси помещают в высокоскоростной поток окружающей корпус жидкости в капиллярной проточной кювете. В результате ускорения смесь образует тонкую струю, в которой динамически фокусируются и выравниваются в линию соматические клетки. Эта струя проходит перед объективом флуоресцентного микроскопа.

В некоторых приборах в секции подсчета содержится два канала. Исходя из обеспечения аналитического качества, такая ситуация считается эквивалентной работе с двумя отдельными модулями, таким образом, что рабочие характеристики оцениваются отдельно для каждого канала.

     5 Факторы, влияющие на результаты измерений

5.1 Сосуды для отбора проб

Сосуды для отбора проб должны быть пригодны для переноса проб с места отбора проб в лабораторию без загрязнения или изменения состава.

Сосуды для отбора проб должны быть герметичными и после заполнения иметь достаточно свободного объема. Слишком большой свободный объем может стать причиной вспенивания, слишком малый свободный объем затруднит смешивание.

5.2 Отбор проб
     

    5.2.1 Общие положения

Оборудование для отбора проб (т.е. колбы для проб, лабораторные стаканы и пробоотборники) должно быть чистым и сухим. Автоматические пробоотборники при использовании должны соответствовать установленным требованиям.

Рекомендуется немедленно охладить образцы для анализа после отбора до температуры 0°C-6°C и хранить при этой температуре до подсчета (см. 5.4) во избежание необходимости консервирования. Следует избегать замораживания. При необходимости консервирования соответствующие способы химического консервирования образцов для анализа установлены в 5.3.

5.2.2 Пробы сборного молока

Перед отбором проб необходимо тщательно перемешать сырое сборное молоко. При недостаточном перемешивании соматические клетки будут концентрироваться в верхних и нижних слоях.

5.2.3 Пробы молока от конкретных животных

Выделение соматических клеток в молоко во время доения происходит неравномерно. Для получения репрезентативного результата подсчета для всего процесса доения необходимо получить репрезентативные пробы для всего процесса доения. Для диагностических целей достаточна выборка части надоенного молока.

5.3 Консервация

При необходимости химической консервации проба для анализа (см. 5.2.1) должна быть законсервирована как можно быстрее, но не более чем через 24 ч после отбора. Проба для анализа должна храниться охлажденной (при температуре 0°C-6°C) до внесения консерванта.

Для консервации используют следующие консерванты:

a) Борная кислота: концентрация в пробе для анализа не должна превышать 0,6 г/100 см. Законсервированные таким образом пробы хранят при температуре 6°C-12°C не более 24 ч.

b) Азид натрия: концентрация в пробе для анализа не должна превышать 0,024 г/100 см. Законсервированные таким образом пробы хранят при температуре 2°C-10°C не более 72 ч.

c) Бронопол (2-бромо-2-нитро-1,3-пропандиол): концентрация в пробе для анализа не должна превышать 0,05 г/100 см. Законсервированные таким образом пробы хранят при температуре от 2°С до 12°C не более 6 сут.

d) Бихромат калия: концентрация в пробе для анализа не должна превышать 0,2 г/100 см. Законсервированные таким образом пробы хранят при температуре 2°C-12°C в течение последующих 6 сут. Рекомендуются следующие цветовые индикаторы:

- патентованный синий V с концентрацией в пробе для анализа до 0,15 мг/100 см;

- желтый оранжевый S (E110) с концентрацией в пробе для анализа до 1 мг/100 см;

- смесь из патентованного синего V и эозина B с концентрацией в пробе для анализа до 0,03 мг/100 см и 0,45 мг/100 см соответственно.