ГОСТ ISO 15141-2-2013

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение содержания охратоксина А в зерне и зерновых продуктах

Часть 2

Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с очисткой бикарбонатом

Foodstuffs. Determination of ochratoxin A in cereals and cereal products. Part 2. High performance liquid chromatographic method with bicarbonate clean up

МКС 67.120

Дата введения 2017-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Республиканским государственным предприятием "Казахстанский институт стандартизации и сертификации" и Техническим комитетом по стандартизации Республики Казахстан ТК 71 "Экологическая безопасность сырья, материалов, веществ и сооружений" на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии международного стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Комитетом технического регулирования и метрологии Министерства индустрии и новых технологий Республики Казахстан

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации по переписке (протокол от 5 ноября 2013 г. N 61-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 25 августа 2016 г. N 943-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 15141-2-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 15141-2:1998* "Продукты пищевые. Определение содержания охратоксина А в зерне и зерновых продуктах. Часть 2. Метод жидкостной хроматографии высокого разрешения с очисткой бикарбонатом" ("Foodstuffs - Determination of ochratoxin A in cereals and cereal products - Part 2. High performance liquid chromatographic method with bicarbonate clean up", IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Международный стандарт ISO 15141-2:1998 подготовлен Европейским комитетом по стандартизации (CEN) в сотрудничестве с Техническим комитетом ISO ТС 34 "Сельскохозяйственные пищевые продукты", Подкомитетом SC ПК 4 "Зерновые и бобовые" в соответствии с Соглашением по техническому сотрудничеству между ISO и CEN (Венское Соглашение).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения охратоксина А (ОТА) и распространяется на зерно и зерновые продукты. Нижний предел количественного определения составляет 3 мкг/кг.

Метод успешно валидирован при проведении межлабораторных сравнительных испытаний по [1] на цельном ячмене, содержащем 2,9; 3,0; 7,4; 14,4 мкг/кг охратоксина А, на цельной кукурузе, содержащей 8,2 мкг/кг и 16,3 мкг/кг охратоксина А, а также на пшеничных отрубях, содержащих 3,8 мкг/кг и 4,5 мкг/кг охратоксина А.

Настоящий метод не распространяется на определение охратоксина А во ржи.

Примечание - Данный метод также применим к пшеничной муке.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на межгосударственные стандарты*, которые являются обязательными. Для датированных ссылок применяют только указанное издание. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного документа (включая все его изменения).

________________

* Таблицу соответствия национальных стандартов международным см. по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.

EN ISO 3696:1995 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний).

     3 Сущность метода

Охратоксин А экстрагируют из зерна смесью хлороформа и водного раствора фосфорной кислоты и выделяют разделением жидких фаз. Выделенный водный бикарбонатный раствор переносят в патрон для твердофазной экстракции С и элюируют охратоксин А смесью этилацетат-метанол-уксусная кислота. Охратоксин А отделяют методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее ВЭЖХ) и количественно определяют хроматографией с флуоресцентным детектором. Хроматография производного метилового эфира подтверждает идентификацию охратоксина А [2]-[5].

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Охратоксин А вызывает повреждение почек и печени и является канцерогеном. Соблюдают соответствующие меры предосторожности [6] при работе с такими соединениями и, в частности, избегают работы в сухом виде, т.к. вследствие электростатических свойств это может привести к рассеиванию и вдыханию. Стеклянная посуда должна быть очищена 4%-ным раствором гипохлорита натрия. Следует обратить внимание на положение, сделанное Международным агентством по изучению рака [7], [8].

     4 Реактивы

При проведении испытаний используют только реактивы общепризнанного аналитического класса, дистиллированную воду или воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696. Растворитель должен иметь степень чистоты, необходимую для проведения анализа методом ВЭЖХ.

4.1 Хлороформ, стабилизированный 2-метил-2-бутеном или этанолом.

4.2 Фосфорная кислота, с (HPO)=0,1 моль/дм.

4.3 Диатомовая земля

900 г диатомовой земли, обработанной кислотой, на всю ночь помещают в метанол (см. 4.7). Фильтруют через двойной слой бумаги в воронку Бюхнера (см. 5.6), промывают 8 дм воды и сушат в течение 12 ч при температуре 150°С.

4.4 Раствор бикарбоната натрия, с (NaHCO)=30 г/дм.

4.5 Этилацетат

4.6 Толуол

4.7 Метанол

4.8 Ледяная уксусная кислота (CHCOOH)=98%

4.9 Ацетонитрил

4.10 Дихлорметан

4.11 Раствор для элюирования: смешивают в объемном отношении 95:5:0,5 этилацетат (см. 4.5), метанол (см. 4.7) и ледяную уксусную кислоту (см. 4.8).

4.12 Подвижная фаза: смешивают ацетонитрил (см. 4.9), воду и ледяную уксусную кислоту (см. 4.8) в объемном соотношении 99:99:2 и дегазируют.

4.13 Смесь растворителей: смешивают толуол (см. 4.6) и ледяную уксусную кислоту (см. 4.8) в объемном соотношении 99:1.

4.14 Трифторид бора

4.15 Трифторид бора, раствор в метаноле, с (BF)=14 г/см

Примечание - Испытания проводят в вытяжном шкафу, избегая контакта с кожей, глазами и дыхательными путями.

4.16 Охратоксин А, кристаллический и в жидком виде

4.17 Охратоксин А, основной раствор

Растворяют 1 мг охратоксина А (кристаллы) (см. 4.16) или содержимое 1 ампулы (в жидком виде) в смеси растворителей (см. 4.13) для получения раствора, содержащего от 20 до 30 мкг/см охратоксина А.

Для определения точной концентрации регистрируют спектр поглощения между длиной волны 300 нм и 370 нм с шагом в 5 нм в кварцевой кювете с толщиной слоя 1 см (см. 5.4) относительно смеси растворителей. Определяют длину волны в максимуме поглощения, регистрируя спектр вблизи него с шагом в 1 нм.

Массовую концентрацию охратоксина А, , в мг/см вычисляют по формуле

,                                                      (1)

где - оптическая плотность в максимуме поглощения (при 333 нм);

- относительная молекулярная масса охратоксина А (=403 г/моль);

- относительный молярный коэффициент поглощения охратоксина А в смеси растворителей (544 м/моль);

- толщина поглощающего слоя кварцевой кюветы, см.

4.18 Стандартный раствор охратоксина А

Разбавляют основной раствор (см. 4.17) смесью растворителя (см. 4.13) до получения стандартного раствора с массовой концентрацией охратоксина А 4 мкг/см.

Этот раствор может храниться в холодильнике при 4°С. Его устойчивость должна проверяться.

4.19 Градуировочные растворы охратоксина А

Дозируют 5; 10; 25; 50; 100 мкл аликвоты стандартного раствора (см. 4.18) в разные пробирки емкостью от 4 до 5 см (см. 5.16) с помощью шприцов с фиксированным объемом (см. 5.16). Выпаривают досуха под током азота. Добавляют 1,0 см подвижной фазы (см. 4.12) в каждую пробирку для получения массовых концентраций охратоксина А, составляющих 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 10,0 нг/25 мкл.

4.20 Раствор гипохлорита натрия, с (NaOCI)=4 г/100 см.

     5 Средства измерений и оборудование

Применяют следующее лабораторное оборудование:

5.1 Мельница лабораторная и сито с размером ячеек 1 мм.

5.2 Блендер высокоскоростной с сосудом вместимостью 1250 см с крышкой.

5.3 Спектрометр для проведения измерений в области длин волн в диапазоне от 300 до 370 нм, имеющий ширину спектральной полосы не более ±2 нм.