ГОСТ EN 15791-2015

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

КОРМА

Определение дезоксиниваленола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с очисткой на иммуноаффинной колонке

Animal feed. Determination of deoxynivalenolby high performance liquid chromatographic (HPLC) method with immunoaffinity column clean-up

     

МКС 65.120

Дата введения 2017-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Научно-производственным республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации" (БелГИСС) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 февраля 2015 г. N 75-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 августа 2016 г. N 970-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 15791-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту EN 15791:2009* "Продукция пищевая. Определение дезоксиниваленола в кормах для животных. Метод ВЭЖХ с очисткой на иммуноаффинной колонке" ("Foodstuffs - Determination of Deoxynivalenol in animal feed - HPLC method with immunoaffinity column clean-up", IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Европейский стандарт разработан Техническим комитетом по стандартизации CEN/TC 327 "Корма" Европейского комитета по стандартизации (CEN).

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного европейского стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочного европейского стандарта соответствующий ему межгосударственный стандарт, сведения о котором приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль 2020 г.

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на метод определения дезоксиниваленола (ДОН) в комбикормах при концентрациях от 150 до 4000 мкг/кг.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий межгосударственный стандарт. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все его изменения).

EN ISO 3696:1995, Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

     3 Сущность метода

Дезоксиниваленол (ДОН) экстрагируют из продукта, используя воду. Затем водный экстракт очищают на иммуноаффинной колонке, чтобы удалить примеси из пробы. Затем ДОН количественно определяют методом ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектором.

     4 Реактивы

Для проведения анализа, если не указано иное, используют только реактивы признанной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696. Качество растворителей должно соответствовать требованиям растворителей для ВЭЖХ.

4.1 Ацетонитрил

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Ацетонитрил опасен, поэтому работать с ним необходимо в вытяжном шкафу. Необходимо использовать средства индивидуальной защиты (лабораторный халат, очки, перчатки).

4.2 Дезоксиниваленол (ДОН), чистотой не менее 97%

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Дезоксиниваленол высокотоксичен. Все время необходимо носить перчатки и очки, а все работы по подготовке пробы и стандартного образца необходимо выполнять в вытяжном шкафу.

4.3 Метанол

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Метанол опасен, поэтому работать с ним необходимо в вытяжном шкафу. Необходимо использовать средства индивидуальной защиты (лабораторный халат, очки, перчатки).

4.4 Ледяная уксусная кислота

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Ледяная уксусная кислота опасна, поэтому работать с ней необходимо в вытяжном шкафу. Необходимо носить соответствующие средства защиты (лабораторный халат, очки, перчатки).

4.5 Подвижная фаза

Смешивают 15 объемных частей метанола (4.3) с 84,9 объемной части воды и 0,1 объемной части ледяной уксусной кислоты (4.4). Точное количество используемого метанола и необходимость использования уксусной кислоты зависят от выбранной для анализа ВЭЖХ колонки. При необходимости регулируют количество метанола. Дегазируют раствор перед его применением.

4.6 Промывной растворитель

Смешивают 50 объемных частей метанола (4.3) с 50 объемными частями воды.

4.7 Исходный раствор ДОН

Раствор содержит 250 мкг дезоксиниваленола на 1 см ацетонитрила.

Раствор можно приготовить следующим образом: добавляют 4,0 мл ацетонитрила (4,1) в 5 мг ДОН (4.2) для получения раствора с концентрацией 1,25 мг/см. Разбавляют 1000 мкл раствора с концентрацией 1,25 мг/см до 5 см ацетонитрилом для получения исходного раствора с концентрацией 250 мкг/см. Разбавляют 200 мкл исходного раствора с концентрацией 250 мкг/см в мерной колбе вместимостью 2,0 см (5.11) ацетонитрилом, чтобы получить разбавленный исходный раствор с концентрацией 25 мкг/см.

Для того чтобы определить точную концентрацию, измеряют значения оптической плотности данного разбавленного исходного раствора с концентрацией 25 мкг/см при помощи спектрофотометра (5.15) в диапазоне 200-270 нм в кварцевой кювете с оптической длиной пути 1 см, а в качестве эталона используют ацетонитрил (4.1). Измеряют оптическую плотность при 220 нм. Рассчитывают массовую концентрацию дезоксиниваленола , мкг/см, по формуле

,                                        (1)

где А - оптическая плотность, измеренная при максимальном значении на кривой оптической плотности (220 нм);

М - молярная масса дезоксиниваленола (M=296,3 г/моль);

k - молярный коэффициент поглощения дезоксиниваленола в ацетонитриле (4.1), (681,0±12,6) м/моль) ([1]);

d - оптическая длина пути кварцевой кюветы, см (1 см).

Рассчитывают точную концентрацию исходного раствора с концентрацией 250 мкг/мл по следующей формуле

.                               (2)

Исходный раствор хранят в темном месте не более 3 мес при температуре 4°C-8°C или не более 6 мес при температуре ниже минус 18°C.

Примечание - Приготовление исходного раствора можно выполнять гравиметрически, при этом точно взвешивают стандартный образец ДОН и растворитель, используемый для его растворения.

4.8 Раствор для обогащения дезоксиниваленолом

Пипеткой переносят аликвоту исходного раствора ДОН (4.7), эквивалентную 500 мкг ДОН, в мерную колбу вместимостью 5 см (5.11). Объем содержимого в колбе доводят до метки ацетонитрилом (4.1). Получают обогащающий раствор с концентрацией 100 мкг/см.

4.9 Рабочий раствор ДОН

Пипеткой переносят аликвоту разбавленного исходного раствора ДОН (4.7), эквивалентную 50 мкг ДОН, в мерную колбу вместимостью 5 см (5.11). Объем содержимого в колбе доводят до метки ацетонитрилом (4.1). Получают рабочий раствор ДОН с концентрацией 10 мкг/см.

4.10 Градуировочные растворы ДОН

Градуировочные растворы готовят из рабочего раствора с концентрацией ДОН 10 мкг/см (4.9). Добавляют объемы рабочего раствора с концентрацией ДОН 10 мкг/см (4.9), приведенные в таблице 1, в мерные колбы вместимостью 10 см (5.11). Объем содержимого в колбах доводят до метки подвижной фазой (4.5). Допускаются отклонения, поскольку самый низкий уровень выше предела детектирования, самый высокий уровень не ведет к насыщению сигнала детектора, и существует еще не менее двух уровней, равноудаленных друг от друга.

Таблица 1 - Приготовление стандартных растворов