ГОСТ EN 14526-2015

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение сакситоксина и DC-сакситоксина в мидиях.
Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением предколоночной дериватизации методом пероксидного или периодатного окисления

Foodstuffs. Determination of saxitoxin and DC-saxitoxin in mussels. HPLC method using pre-column derivatization with peroxide or periodate oxidation

МКС 67.120.30

Дата введения 2017-01-01

     

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" на основе собственного аутентичного перевода на русский язык европейского регионального стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 октября 2015 г. N 81-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 октября 2015 г. N 1673-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 14526-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту EN 14526:2004* Foodstuffs - Determination of saxitoxin and dc-saxitoxin in mussels - HPLC method using pre-column derivatization with peroxide or periodate oxidation (Продукты пищевые. Определение сакситоксина и DC-сакситоксина в мидиях. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением предколоночной дериватизации методом пероксидного или периодатного окисления).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Международный стандарт разработан техническим комитетом CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы", секретариатом которого считается DIN.

Перевод с немецкого языка (de).

Официальные экземпляры европейского регионального стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и европейского регионального стандарта, на который дана ссылка, имеются в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.

Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным европейским региональным стандартам приведены в дополнительном приложении ДА.

Степень соответствия - идентичная (IDT)

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

Введение

В основе настоящего стандарта лежит метод Lawrence и Menard [1]. В методе-оригинале аналит выделяют из пробы путем твердофазной экстракции на обращенно-фазовом сорбенте с привитыми октадецильными группами (), после чего проводят его очистку также методом твердофазной экстракции на слабом катионообменнике. При этом токсины моллюсков разделяют на три различные группы путем использования элюентов различной ионной силы и полярности. Далее проводят пероксидную или периодатную дериватизацию каждой группы токсинов по отдельности с тем, чтобы обеспечить наиболее достоверную идентификацию пиков их производных на хроматограмме. Настоящий стандарт распространяется на определение только сакситоксина и декарбамоил-сакситоксина (DC-сакситоксина), поэтому в приведенном в нем методе используется только очистка на обращенно-фазовом сорбенте.

Приведенный в настоящем стандарте метод предполагает возможность выбора между экстракцией уксусной кислотой и соляной кислотой. Выбор аналитиком способа экстракции зависит от цели испытания.

Экстракция соляной кислотой при температуре кипения приводит к частичному гидролизу паралитических токсинов моллюсков, приводящему к трансформации многих из этих токсинов (С-1, С-2, GTX-6) в их токсичные аналоги (GTX-2, GTX-3, сакситоксин). Этот процесс в той или иной мере происходит также в желудке человека. Поэтому данный способ экстракции можно использовать для приблизительной оценки общей токсичности продукта в данном отношении.

Экстракция уксусной кислотой при более низких температурах является более мягким способом, при котором профиль токсинов в пробе практически не меняется. Этот способ экстракции может быть применен, когда важнее установить безопасность продукта в отношении только некоторых токсинов. Экстракция уксусной кислотой применяется при изготовлении аттестованных образцов сравнения паралитических токсинов моллюсков ([2], [3]).

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения сакситоксина и декарбамоил-сакситоксина (DC-сакситоксина) в мидиях. Метод применим также для других моллюсков, например для гребешков. Метод обеспечивает предел количественного определения (при отношении уровня аналитического сигнала к уровню шума, равном 10) 0,006 мг/кг (млн) для сакситоксина и 0,02 мг/кг (млн) для DC-сакситоксина. Метод прошел валидацию путем межлабораторных испытаний при содержании (массовой доле) сакситоксина в пробах 0,4 мг/кг (млн) и 0,5 мг/кг (млн) и при содержании (массовой доле) DC-сакситоксина в пробе 0,4 мг/кг (млн) и 1,6 мг/кг (млн).

     2 Нормативные ссылки

Для применения настоящего стандарта необходим следующий ссылочный документ*. Для недатированной ссылки применяют последнее издание ссылочного документа (включая все его изменения).

________________

* Таблицу соответствия национальных стандартов международным см. по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.

EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

     3 Сущность метода

Паралитические токсины моллюсков экстрагируют из гомогенизированной пробы уксусной или соляной кислотой. После центрифугирования надосадочную жидкость очищают методом твердофазной экстракции на патроне с обращенно-фазовым сорбентом (). Аликвоту экстракта подвергают дериватизации перекисью водорода.

Предупреждение - Паралитические токсины моллюсков являются сильными нейротоксинами. При проведении испытания следует использовать перчатки и защитные очки, а все операции по подготовке стандартных растворов и проб следует проводить в вытяжном шкафу.

При дериватизации сакситоксина и DC-сакситоксина образуются различные продукты окисления, которые определяют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием обращенно-фазовой колонки и флуориметрического детектирования. В таблице 1 приведены производные сакситоксина и DC-сакситоксина, образующиеся при дериватизации перекисью водорода.

Таблица 1 - Производные сакситоксина и DC-сакситоксина, образующиеся при дериватизации перекисью водорода

Приведенный в настоящем стандарте метод пригоден для количественного определения сакситоксина и DC-сакситоксина. Однако следует принимать во внимание указанные ниже особенности.

Совместное присутствие в пробе различных паралитических токсинов может оказывать взаимное влияние на результат определения каждого из них в отдельности, поскольку при дериватизации различных токсинов частично могут образовываться одни и те же производные. Поэтому следует проявлять тщательность при интерпретации хроматограмм.

На результат определения сакситоксина не оказывает влияния присутствие в пробе других паралитических токсинов при дериватизации путем окисления перекисью водорода.

На результат определения DC-сакситоксина оказывает незначительное влияние присутствие сакситоксина, поскольку один из продуктов пероксидного окисления сакситоксина практически идентичен основному производному DC-сакситоксина (см. таблицу 1). Вклад производного сакситоксина, пик которого имеет то же время удерживания, что и пик основного производного DC-сакситоксина, в величину пика последнего составляет примерно 4% ([4], [5]).

Токсины водорослей-динофлагеллятов GTX-2 и GTX-3 преобразуются при пероксидной дериватизации в такие же производные, а токсины GTX-1 и GTX-4 при этом не обнаруживаются. Периодатное окисление GTX-1, GTX-2, GTX-3 и GTX-4 приводит к образованию таких же производных. Токсины GTX-5 и нео-STX обнаруживаются только при периодатном окислении.

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696.

Допускается использовать для градуировки аналитические стандарты токсинов других производителей, чем те, что указаны ниже, при условии их однозначной идентификации и точно установленной массовой доли основного вещества.

4.2 Метанол.

4.3 Ацетонитрил для ВЭЖХ.

4.4 Аммония формиат

4.4.1 Аммония формиат, раствор 1 молярной концентрации 0,3 моль/дм

Для приготовления раствора 18,9 г формиата аммония по 4.4 растворяют в воде, объем раствора доводят до 1 дм.

4.4.2 Аммония формиат, раствор 2 молярной концентрации 0,1 моль/дм

К 350 см раствора аммония формиата 1 добавляют 700 см воды. Значение рН полученного раствора доводят до 6 по индикаторной бумаге добавлением уксусной кислоты, после чего раствор фильтруют через мембранный фильтр по 5.15. Срок годности раствора - 2 дня.

4.5 Кислота соляная

4.5.1 Общие положения

Для приготовления растворов используют концентрированную соляную кислоту массовой долей (HCI) = 25%, определенной ацидиметрическим методом.

4.5.2 Кислота соляная, раствор молярной концентрации (HCI) = 5 моль/дм (раствор 1)

Для приготовления раствора 100 см концентрированной соляной кислоты по 4.5.1 смешивают с 54 см воды.