ГОСТ EN 16155-2015

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение сукралозы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Foodstuffs. Determination of sucralose by high performance liquid chromatographic method

     

МКС 67.050

Дата введения 2017-01-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным бюджетным государственным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт технологии консервирования" (ФБГНУ "ВНИИТеК") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии европейского стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 29 мая 2015 г. N 77-П)

     За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 8 сентября 2015 г. N 1288-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 16155-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту ЕN 16155:2012* "Продукты пищевые. Определение сукралозы. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии" ("Foodstuffs - Determination of sucralose - High performance liquid chromatographic method", IDT)

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Международный стандарт разработан техническим комитетом CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы", секретариатом которого считается DIN (Германия).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочного европейского стандарта соответствующий ему межгосударственный стандарт, сведения о котором приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Ноябрь 2019 г.

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения сукралозы в пищевых продуктах с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием колонки с обращенно-фазовым сорбентом, водного раствора метанола в качестве подвижной фазы и рефрактометрического детектирования. Метод прошел валидацию путем двух межлабораторных испытаний, при этом анализ сукралозы проводили в пробах кетчупа, майонеза, бисквита, йогурта, растворимых сухих напитков и конфет с добавлением сукралозы от 83 мг/кг (млн) до 737 мг/кг (млн).

Подробная информация о результатах валидации метода содержится в приложении А.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий стандарт:

EN ISO 3696, Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний).     

     3 Сущность метода

Пробы в зависимости от консистенции либо растворяют в воде, либо разбавляют водой и при необходимости фильтруют или осветляют модифицированными растворами Карреза. Затем их подвергают очистке методом твердофазной экстракции, элюирование проводят смесью метанола с водой.

Содержание сукралозы определяют с помощью ВЭЖХ с использованием колонки с обращенно-фазовым сорбентом, водного раствора метанола в качестве подвижной фазы и последующего рефрактометрического детектирования.

В качестве альтернативы может быть использован испарительный детектор по светорассеянию. Для количественного определения применяют метод внешнего стандарта. За содержание сукралозы в пищевом продукте принимают содержание 1,6-дихлор-1,6-дидезокси--D-фруктофуранозил-4-хлор-4-дезокси--D-галактопиранозида, определенное в соответствии с методом, приведенным в настоящем стандарте.

     4 Реактивы

Для проведения испытания при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и воду, не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696. Используемые растворители по степени чистоты должны быть пригодны для применения в анализе с помощью ВЭЖХ, если не оговорены другие условия. Допускается использование доступных для приобретения готовых растворов при условии, что их характеристики не отличаются от приведенных ниже.

4.1 Сукралоза, , М=397,63 г/моль.

4.2 Калий железистосинеродистый (II), .

4.3 Цинк азотнокислый, .

4.4 Метанол для ВЭЖХ.

4.5 Основной раствор сукралозы массовой концентрации приблизительно 1000 мг/дм

Навеску сукралозы массой приблизительно 100 мг, взвешенную с точностью до 0,1 мг, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в небольшом количестве воды и доводят содержимое до метки водой. Свежий раствор готовят ежедневно. Следует учитывать содержание влаги и чистоту стандартного вещества, из которого готовят раствор.

4.6 Градуировочные растворы массовой концентрации () от 20 мг/дм до 100 мг/дм

Концентрации градуировочных растворов, приведенные ниже, носят рекомендательный характер и могут быть изменены в зависимости от чувствительности прибора и диапазона определяемых концентраций. Следует стараться не заходить за линейную область системы детектора.

Готовят не менее пяти градуировочных растворов из основного раствора сукралозы по 4.5 разбавлением его таким образом, чтобы получились растворы с концентрацией сукралозы, например, 20, 40, 60, 80 и 100 мг/дм. Готовят свежие растворы ежедневно в день анализа.

4.7 Модифицированные растворы Карреза

4.7.1 Раствор А [калий железистосинеродистый (II)]

Разбавляют 53,45 г калия железистосинеродистого (II) по 4.2 водой до 500 см.

4.7.2 Раствор В (цинк азотнокислый)

148,75 г цинка азотнокислого по 4.3 разбавляют водой до 500 см.

4.8 Подвижная фаза для ВЭЖХ

Смешивают одну объемную часть метанола по 4.4 с тремя объемными частями воды.

     5 Основное и вспомогательное оборудование

При проведении испытания используют обычное оборудование, в частности, перечисленное ниже.

5.1 Мембранный фильтр для фильтрования пробы с диаметром пор не более 0,45 мкм.

5.2 Фильтр складчатый.

5.3 Колонка (патрон) для твердофазной экстракции, заполненная обращенно-фазовым сорбентом с привитыми октадецильными группами С-18, массой 500 мг.

5.4 Система для ВЭЖХ в указанной ниже комплектации:

- насос для подачи подвижной фазы;

- устройство для ввода проб;

- рефрактометрический детектор с кюветой с контролируемой температурой или как альтернатива испарительный детектор по светорассеянию;

- термостат колоночный;

- система обработки данных.

5.5 Колонка для ВЭЖХ аналитическая, длиной 250 мм с внутренним диаметром 4 мм, заполненная обращенно-фазовым сорбентом (С18) с привитыми октадецильными группами, например Li-chrospher® 100 RP-18, диаметром частиц 5 мкм, либо аналогичная им колонка.

_________________

Lichrospher® 100 RP-18 приведена как пример подходящей колонки, имеющейся в продаже. Эта информация дана для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламой CEN данного продукта.

Для защиты аналитической колонки используют предколонку, заполненную тем же сорбентом.

     6 Процедура проведения испытания

     6.1 Подготовка пробы

Гомогенизируют испытуемую пробу подходящим способом. Например, пробы жидких продуктов перемешивают, пробы твердых продуктов, таких как конфеты, измельчают, а пробы продуктов, таких как жевательная резинка, подвергают глубокому замораживанию и затем измельчают. Пробы густых жидких продуктов, таких как йогурт или кетчуп, гомогенизируют перемешиванием и при необходимости осветляют модифицированными растворами Карреза по 4.7.

Некоторые пробы требуют предварительной подготовки с использованием патрона для твердофазной экстракции.

     6.2 Приготовление растворов пробы для анализа

6.2.1 Растворимые в воде продукты (например, карамель и аналогичные продукты)

Измельченную пробу для анализа массой 5 г, взвешенную с точностью до 1 мг, растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 50 см и доводят содержимое водой до метки. Если раствор мутный, фильтруют через мембранный фильтр.

6.2.2 Продукты, не полностью растворимые в воде (например, пирожные, жевательная резинка, йогурт, кетчуп, майонез)

Измельченную пробу массой 5 г, взвешенную с точностью до 1 мг, помещают в мерную колбу вместимостью 50 см. В колбу добавляют около 25 см воды, после чего содержимое в колбе перемешивают в течение 30 мин при помощи магнитной мешалки при температуре от 40°С до 60°С либо обрабатывают в ультразвуковой бане. В растворы проб, содержащих белок, вносят по 1 см каждого из модифицированных растворов Карреза (4.7.1 и 4.7.2). Колбы с содержимым встряхивают после добавления каждого раствора. Затем полученные растворы охлаждают до комнатной температуры, и объем раствора в колбе доводят водой до метки. Полученный раствор фильтруют сначала через складчатый фильтр, а затем, если раствор остается мутным, фильтруют через мембранный фильтр.