ГОСТ EN 14176-2015

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

     

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

     
Определение домоевой кислоты в мидиях методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     
Foodstuffs. Determination of domoic acid in mussels by HPLC

МКС 67.120.30

Дата введения 2017-01-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 18 июня 2015 г. N 47)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 июля 2015 г. N 1012-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 14176-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту EN 14176:2003* "Продукты пищевые. Определение домоевой кислоты в мидиях методом ВЭЖХ" ("Foodstuffs - Determination of domoic acid in mussels by HPLC", IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Европейский стандарт разработан техническим комитетом CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы", секретариатом которого является DIN (Германия).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочного европейского стандарта соответствующий ему межгосударственный стандарт, сведения о котором приведено в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Декабрь 2019 г.

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"          

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения домоевой кислоты в мидиях с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Метод успешно прошел валидацию в соответствии с руководством Ассоциации официальных химиков-аналитиков (АОАС) путем межлабораторных испытаний проб мидий с содержанием домоевой кислоты 14,1 мкг/г (проба с внесением домоевой кислоты) и 186 мкг/г (проба, контаминированная домоевой кислотой естественным образом).

Экспериментально установлена применимость метода также в отношении сердцевидки съедобной (Cerastoderma edule), скробикулярии плоской (Scrobicularia plana), моллюсков Venerupis pullastra и Ruditapes decussate, устриц (Crassostrea japonica) и моллюсков родов Ensis и Solen [1].

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий стандарт:

EN ISO 3696, Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

     3 Сущность метода

Метод основан на экстракции домоевой кислоты из гомогенизированной пробы путем кипячения с соляной кислотой, охлаждении, разбавлении, центрифугировании и фильтрации экстракта и его анализе методом обращенно-фазовой ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием в ультрафиолетовой области спектра.

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696.

4.2 Кислота соляная, раствор молярной концентрации c(HCI)=0,1 моль/дм.

4.3 Кислота фосфорная, раствор массовой долей w(HPО)=8,5%.

4.4 Ацетонитрил для ВЭЖХ.

4.5 Подвижная фаза

Смешивают две объемных части раствора фосфорной кислоты по 4.3 с 873 объемными частями воды. Проверяют значение pH полученного раствора, которое должно быть равно 2,5. Добавляют 125 объемных частей ацетонитрила по 4.4, смесь перемешивают. Полученную подвижную фазу перед использованием дегазируют. Проводят предварительный хроматографический анализ градуировочного раствора домоевой кислоты по 4.6 и при необходимости корректируют объемную долю ацетонитрила в подвижной фазе так, чтобы время удерживания пика домоевой кислоты составляло примерно 8 мин при прочих неизменных условиях хроматографического анализа.

4.6 Градуировочный раствор домоевой кислоты

Готовят градуировочный раствор домоевой кислоты точно известной массовой концентрации, близкой к 1 мкг/см. При необходимости раствор разбавляют водой. Раствор хранят в холодном месте, перед использованием его выдерживают до достижения комнатной температуры.

     5 Приборы и оборудование

5.1 Общие положения

При проведении испытания используют обычные лабораторные приборы и оборудование, в частности, перечисленные ниже.

5.2 Блендер или бытовой измельчитель.

5.3 Фильтры мембранные диаметром пор примерно 0,45 мкм в комплекте со стеклянным или одноразовым пластиковым шприцем вместимостью 5 см.

5.4 Центрифуга, обеспечивающая фактор разделения 700 g при использовании центрифужных пробирок вместимостью от 50 до 100 см, снабженная таймером.

5.5 Пробирки центрифужные вместимостью от 50 до 100 см.

5.6 Система для ВЭЖХ

5.6.1 Насос для ВЭЖХ, обеспечивающий постоянную скорость подачи подвижной фазы 1,5 см/мин, в комплекте с устройством ввода проб, обеспечивающим объем инжекции 20 мм.

5.6.2 Колонка для ВЭЖХ аналитическая, заполненная обращенно-фазовым сорбентом на основе силикагеля с привитыми октадецильными группами, обеспечивающая отделение пика домоевой кислоты от всех прочих пиков на уровне базовой линии.

Колонка, гарантированно обеспечивающая удовлетворительное качество хроматографического разделения, имеет следующие характеристики:

- материал корпуса колонки - нержавеющая сталь или другой подходящий материал;

- длина - 150 мм;

- внутренний диаметр - 4,6 мм;

- диаметр частиц сорбента - 5 мкм.

Примечание - Тип обращенно-фазового сорбента несущественно влияет на результаты анализа при условии, что объемная доля ацетонитрила в подвижной фазе обеспечивает оптимальное время удерживания пика домоевой кислоты (примерно 8 мин) и отделение от прочих пиков компонентов матрицы пробы в начале хроматограммы.

5.6.3 Детектор спектрофотометрический с проточной кюветой, установленный на рабочую длину волны 242 нм.

5.6.4 Система обработки данных.

     6 Отбор проб

Важно, чтобы поступающая в лабораторию проба была представительной и не была повреждена или изменила свой состав и свойства при транспортировании или хранении.

     7 Процедура проведения испытания

7.1 Общие положения

Всю процедуру испытания необходимо провести за один рабочий день. В течение этого дня при перерывах в проведении испытания пробы и экстракты охлаждают до температуры 4°С-7°С.

Предупреждение - Домоевая кислота в экстракте из пробы нестабильна. Поэтому следует строго соблюдать требования настоящего стандарта относительно температуры и кислотности экстракта на отдельных этапах, а также продолжительности проведения отдельных операций.

Примечание - В кислой среде при комнатной температуре домоевая кислота подвергается медленному разрушению. При хранении экстрактов при комнатной температуре в течение четырех или пяти дней концентрация домоевой кислоты в них уменьшается на 30%-50%. При хранении экстрактов охлажденными до 4°С заметного изменения концентрации домоевой кислоты в них не наблюдается в течение трех недель [2].

7.2 Подготовка пробы

Мидии снаружи тщательно промывают водой. Пальцами одной руки аккуратно раздвигают створки раковины так, чтобы между ними образовалась узкая щель, в которую вводят лезвие небольшого ножа до тех пор, пока острие не упрется во внутреннюю стенку одной из створок. Сохраняя острие ножа в этом положении, движением лезвия отрезают приводящую мышцу. Поднимают одну створку, после чего внутреннюю часть мидии промывают водой для удаления песка или других примесей. Ножом вырезают мякоть мидии из другой створки.

Перед вскрытием мидий не допускается их нагревать или использовать анестезию. Также не допускается разрезать или повреждать мякоть мидий на этом этапе. Мякоть мидий массой от 100 до 150 г выдерживают на сите в течение 5 мин. Удаляют частицы скорлупы и отбрасывают вытекшую жидкость, после чего мякоть измельчают с помощью блендера или измельчителя по 5.2 до достижения гомогенного состояния.

7.3 Экстракция и очистка экстракта

В стакан вместимостью 250 см помещают гомогенизированную мякоть мидий массой примерно 50 г, взвешенной с точностью до 0,1 г. В стакан добавляют 50 см раствора соляной кислоты по 4.2, содержимое стакана тщательно перемешивают и быстро (в течение 10 мин) нагревают до кипения. Содержимое стакана выдерживают в кипящем состоянии точно 5 мин при постоянном перемешивании, после чего стакан с содержимым немедленно помещают в ледяную баню и охлаждают до комнатной температуры в течение примерно 10 мин.

Далее смесь переносят в градуированный цилиндр с пробкой вместимостью 100 см или мерную колбу и доводят объем содержимого в них до 100 см раствором соляной кислоты по 4.2, после чего содержимое колбы или цилиндра перемешивают до достижения однородного состояния смеси.

Порцию полученной смеси объемом не менее 50 см переносят в центрифужную пробирку по 5.5 и центрифугируют в течение 5 мин при факторе разделения 700 g. Пипеткой переносят 5 см прозрачной надосадочной жидкости в мерную колбу вместимостью 50 см, объем содержимого в колбе доводят до метки водой, содержимое тщательно перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр по 5.3. Фильтрат объемом от 1 до 2 см собирают в подходящий флакон и используют для хроматографического анализа. Если концентрация домоевой кислоты слишком высока для количественного определения, полученный раствор разбавляют до достижения концентрации, приемлемой для количественного определения.