ГОСТ EN 12014-3-2015

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение содержания нитрата и/или нитрита

Часть 3

Спектрофотометрический метод определения содержания нитрата и нитрита в мясных продуктах с применением ферментативного восстановления нитрата до нитрита

Foodstuffs. Determination of nitrate and/or nitrite content. Part 3. Spectrophotometric determination of nitrate and nitrite content of meat products after enzymatic reduction of nitrate to nitrite

     

МКС 67.120.10

Дата введения 2017-01-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" на основе собственного перевода на русский язык европейского стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 29 мая 2015 г. N 77-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 июля 2015 г. N 1010-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 12014-3-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту ЕN 12014-3:2005* "Продукты пищевые. Определение содержания нитрата и/или нитрита. Часть 3. Спектрофотометрический метод определения содержания нитрата и нитрита в мясных продуктах с применением ферментативного восстановления нитрата до нитрита" ("Foodstuffs - Determination of nitrate and/or nitrite content - Part 3: Spectrometric determination of nitrate and nitrite content of meat products after enzymatic reduction of nitrate to nitrite", IDT)

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Международный стандарт разработан техническим комитетом CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы", секретариатом которого считается DIN (Германия).

Сведения о соответствии ссылочных европейских стандартов межгосударственным стандартам приведены в дополнительном приложении ДА.

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Декабрь 2019 г.

          

     Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
     
     В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает спектрофотометрический метод определения содержания нитрата и нитрита в мясных продуктах. Метод прошел валидацию путем межлабораторных испытаний различных мясных продуктов с содержанием (массовой долей) нитрита от 9 до 22 мг/кг (млн) в пересчете на нитрит натрия и с содержанием (массовой долей) нитрата от 23 до 48 мг/кг (млн) в пересчете на нитрат натрия.

Примечание - Дополнительно экспериментально установлена применимость метода при суммарном содержании (массовой доле) в пробе нитрата и нитрита от 5 мг/кг (млн) до 125 мг/кг (млн) в пересчете на нитрит натрия. Подробная информация о применимости метода содержится в [1].

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения).

EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

     3 Сущность метода

Определение нитрита основано на реакции нитрита в водном экстракте из пробы с сульфаниламидом и N-(1-нафтил)-этилендиаминдигидрохлоридом с образованием соединения красного цвета и спектрофотометрическом измерении интенсивности окраски раствора при длине волны 540 нм [2].

Определение нитрата основано на восстановлении нитрата в водном экстракте из пробы до нитрита ферментом нитратредуктазой с последующим проведением таким же образом реакции с сульфаниламидом и N-(1-нафтил)-этилендиаминдигидрохлоридом, в которой участвуют как нитрит, образовавшийся при восстановлении нитрата, так и нативный нитрит пробы. Интенсивность окраски раствора образовавшегося красного соединения измеряют спектрофотометрически при длине волны 540 нм. Содержание нитрата в пробе находят по разнице результатов спектрофотометрических измерений.

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

Для проведения испытания при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и воду не ниже третьей степени чистоты по EN ISO 3696. При приготовлении растворов следует принимать во внимание массовую долю основного вещества в реактиве.

4.2 Натрия гидроксид, раствор молярной концентрации c(NaOH)=1 моль/дм.

4.3 Раствор Карреза I

Для приготовления раствора 150 г гексацианоферрата (II) калия растворяют в некотором количестве воды, объем раствора доводят до 1000 см водой, раствор тщательно перемешивают. Полученный раствор хранят в сосуде из темного стекла. Срок годности раствора - 2 мес.

4.4 Раствор Карреза II

Для приготовления раствора 230 г уксуснокислого цинка растворяют в некотором количестве воды, объем раствора доводят до 1000 см водой.

4.5 Реактивы для ферментативного определения нитрата

________________

Комплект для ферментативного определения нитрата и нитрита изготовляет компания Boehringer Mannheim/Roche Diagnostics, Mannheim, дистрибьютором которой является компания R-Biopharm, Дармштадт, Германия. Данная информация приведена исключительно для удобства применения настоящего стандарта и не является рекламной поддержкой МГС указанного изделия. Допускается использовать аналогичные изделия при условии, что они обеспечивают сопоставимость результатов.

4.5.1 Буферный раствор на основе имидазола с рН 7,8

В мерной колбе вместимостью 100 см растворяют 0,68 г имидазола в 80 см воды. Значение рН раствора доводят до 7,8 добавлением раствора соляной кислоты молярной концентрации с(HCl)=2 моль/дм, после чего объем раствора доводят до 100 см водой.

4.5.2 Раствор тетранатриевой соли бета-никотинамидадениндинуклеотидфосфата в восстановленной форме (, массовая доля основного вещества - не менее 98%)

Растворяют 125 мг восстановленного -никотинамидадениндинуклеотидфосфата и 2,5 мг динатриевой соли флавинадининдинуклеотида с массовой долей основного вещества не менее 88% в 50 см буферного раствора имидазола по 4.5.1. Раствор используют свежеприготовленным.

4.5.3 Буферный раствор нитратредуктазы

Для приготовления раствора 11 мг лиофилизата нитратредуктазы из грибов рода Aspergillus (номер Комиссии по ферментам (ЕС) 1.6.6.2) активностью примерно 0,4 Е/мг растворяют в 10 см буферного раствора на основе имидазола по 4.5.1. В раствор добавляют 50 мг динатриевой соли дигидрата этилендиаминтетрауксусной кислоты.

________________

Обозначение международной (стандартной) единицы активности, определяемой как количество фермента, катализирующее преобразование 1 мкмоль субстрата за минуту в заданных условиях.

Срок годности раствора - 14 сут при температуре хранения 4°С.

4.6 Реактивы для проведения цветной реакции

4.6.1 Реактив 1

Реактив готовят растворением 8 г сульфаниламида в 500 см воды при нагревании на водяной бане по 5.3. Раствор охлаждают до комнатной температуры и при необходимости фильтруют, после чего в него добавляют 330 см соляной кислоты по 4.9 при постоянном перемешивании. Объем раствора доводят до 1000 см водой. Раствор стабилен в течение нескольких недель при хранении при комнатной температуре.

4.6.2 Реактив 2

0,330 г N-(1-нафтил)-этилендиаминдигидрохлорида растворяют в 250 см воды. Срок годности раствора - 1 неделя при хранении в сосуде из темного стекла.

4.6.3 Смешанный реактив для цветной реакции

Смешанный реактив для цветной реакции готовят в день проведения испытаний в необходимом количестве путем смешивания равных объемов реактива 1 по 4.6.1 и реактива 2 по 4.6.2.

4.7 Растворы нитрита натрия

4.7.1 Общие положения