Профессиональное решение
для специалистов строительной отрасли

     
     ГОСТ ISO 8607-2015

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

Средства воспроизводства

СПЕРМА ПЛЕМЕННЫХ БЫКОВ ЗАМОРОЖЕННАЯ

Подсчет живых аэробных микроорганизмов

Product for reproduction. Frozen semen of breeding bulls. Enumeration of living aerobic microorganisms

     

МКС 65.020.30

Дата введения 2016-07-01

     

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным бюджетным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства имени академика Л.К.Эрнста" (ВИЖ им.Л.К.Эрнста) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 29 мая 2015 г. N 77-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по
МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 5 июня 2015 г. N 558-ст введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2016 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 8607:2003* "Оплодотворение искусственное животных. Замороженная сперма племенных быков. Подсчет живых аэробных микроорганизмов" ("Artificial insemination of animals - Frozen semen of breeding bulls - Enumeration of living aerobic microorganisms", IDT), включая его изменение Amd.1:2011.

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.


Международный стандарт разработан Техническим комитетом по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO).

Изменение к международному стандарту, принятое после его официальной публикации, внесено в текст настоящего стандарта и выделено двойной вертикальной линией на полях справа* от соответствующего текста.

________________

* В оригинале выделение двойной вертикальной линией не приводится. - Примечание изготовителя базы данных.


Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Май 2020 г.


Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Введение


Количественный микробиологический контроль гигиены отбора и обработки спермы быков имеет большое значение в обеспечении эффективности искусственного осеменения и выполнении требований биобезопасности [1]. По этой же причине очень важно исследование бактериальной загрязненности и возможного присутствия факультативных патогенных микроорганизмов в замороженной сперме быков.

Существует необходимость в разработке международного метода, подходящего для подсчета микроорганизмов в замороженной сперме, который указывал бы на гигиенический статус в период отбора проб, обработки и хранения. Метод подсчета колоний, указанный в настоящем стандарте, устанавливает правила подсчета сапрофитных микроорганизмов, которые изначально присутствуют или поступили в сперму быков из окружающей среды. С помощью этого метода обнаруживают только общее количество бактерий, главным образом аэрофильные и мезофильные сапрофиты, а также некоторые факультативно патогенные микроорганизмы, не очень чувствительные к условиям окружающей среды.

Поскольку образцы замороженной спермы крупного рогатого скота дополнительно содержат антибиотики, определение микробиологической загрязненности данного типа образцов несколько отличается от общепринятых микробиологических методов. При исследовании образцов замороженной спермы при низком разведении число колоний может быть ниже, чем ожидалось, и не отвечать обычным пропорциям. Поэтому для компенсации эффекта действия антибиотиков необходимо использовать относительно высокое десятикратное разведение. В результате использования высокого разведения в каждой чашке Петри получают 15 или меньшее количество колоний, и результат подсчета этих колоний должен быть принят как окончательный. В этом состоит отличие от обычного микробиологического исследования пищевых продуктов, при котором разведение образцов может быть выбрано таким образом, что число колоний в чашке Петри для более точного исследования может быть 15 и более.

Микробиальные клетки часто образуют в образце сгустки или группы. Встряхивание проб и разведение позволяют равномерно распределить сгустки бактерий, но не разбивают их полностью до отдельных клеток. В последующем каждая колония, появляющаяся на среде, может вырасти как от сгустка, так и от одной клетки, это позволяет получить более точный результат по числу колониеобразующих единиц по сравнению с результатом по числу микроорганизмов [2].

Настоящий стандарт устанавливает значение допустимого предела не для всех КОЕ-бактерий, которые могут быть затребованы покупателями в торговле. Это должно быть указано в коммерческих контрактах.

     1 Область применения


Настоящий стандарт устанавливает метод подсчета живых аэробных микроорганизмов в замороженной сперме племенных быков. Подсчитывают число колоний, выросших на питательной среде после аэробной инкубации при температуре 37°С. Микробиологическое загрязнение выражают как число колониеобразующих единиц микроорганизмов на кубический сантиметр испытуемой пробы.

     2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения).

ISO 6887-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений)

ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs - General requirements and guidance for microbiological examinations (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям)

     3 Термины и определения


В настоящем стандарте применены термины по ISO 6887-1, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 сперма (semen): Продукт генитальных органов самцов, предназначенный для оплодотворения самок.

3.2 эякулят (ejculate): Количество спермы, полученной в результате одной садки самца.

3.3 доза (dose): Количество спермы, индивидуально расфасованной для одного осеменения.

3.4 серия доз (series doses): Группа доз спермы, полученных от одного быка и одного или более эякулятов в один день и подвергнутых одной и той же обработке.

3.5 живые аэробные микроорганизмы (living aerobic microorganisms): Бактерии, дрожжи, плесени, которые растут аэробно при температуре 37°С в условиях, указанных в настоящем стандарте.

3.6 колониеобразующая единица, КОЕ (colony-forming unit, CFU): Единичные микробные клетки или колонии, или группы клеток, формирующие одну колонию на питательной среде в условиях, указанных в настоящем стандарте.

     4 Принцип


Две чашки Петри заполняют определенной питательной средой. Среду инокулируют на значительной глубине определенным количеством испытуемой пробы с последующей аэробной инкубацией при температуре 37°С.

Число КОЕ микроорганизмов на кубический сантиметр испытуемой пробы подсчитывают по числу полученных колоний.

     5 Разбавитель и питательная среда


Общее руководство - по ISO 7218.

Химические вещества должны отвечать требованиям для аналитических и микробиологических исследований.

Используемая вода должна быть дистиллированной или эквивалентной по качеству (см. ISO 7218).

     5.1 Разбавитель


Разбавителем является солевой раствор пептона, как указано в ISO 6887-1. Его состав, приготовление и использование приведены только для удобства пользователя настоящего стандарта.

Чтобы добиться воспроизводимости результатов, для приготовления разбавителя используют обезвоженные основные компоненты или обезвоженный готовый разбавитель. Следует строго соблюдать инструкции производителя.

5.1.1 Состав

Фермент, расщепляющий казеин

1,0 г;

хлорид натрия (NaCI)

8,5 г;

вода

1000 см.

5.1.2 Приготовление

Растворяют компоненты в воде, при необходимости подогревают.

При необходимости, регулируют рН так, чтобы после стерилизации он был 7,0±0,2 при температуре 25°С.

5.1.3 Распределение и стерилизация

Для приготовления исходной суспензии разбавитель разливают в испытательные пробирки или колбы (6.3) определенной вместимости.

Для приготовления десятикратного разведения разбавитель разливают в пробирки или колбы (6.3) таким образом, чтобы после стерилизации каждая пробирка или колба содержала 9,0 см. Неопределенность измерений данного конечного объема после стерилизации не должна превышать ±2%.

     5.2 Агаровая среда

5.2.1 Состав

Мясной бульон

10 г;

обезвоженная D-глюкоза

1,0 г;

обезвоженный экстракт дрожжей

2,5 г;

пептон

3,0 г;

хлорид натрия (NaCI)

2,0 г;

гидроортофосфат натрия ()

2,0 г;

желатин

10 г;

агар в виде порошка или хлопьев

от 12 до 18 г;

________________

Согласно прочности геля агара.

вода

1000 см