ГОСТ EN 12821-2014

Группа IDT

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение содержания холекальциферола (витамина D) и эргокальциферола (витамина D) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Foodstuffs. Determination of cholecalciferol (vitamin D) and ergocalciferol (vitamin D) content by high performance liquid chromatography

МКС 67.050

Дата введения 2016-01-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

    Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") на основе аутентичного перевода на русский язык европейского регионального стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (ТК 335)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол 25 июня 2014 г. N 45-2014)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 августа 2014 г. N 963-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 12821-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2016 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту EN 12821:2009* Foodstuffs - Determination of vitamin D by high performance liquid chromatography - Measurement of cholecalciferol (D) or ergocalciferol (D) [Продукты пищевые. Определение витамина D высокоэффективной жидкостной хроматографией. Измерение холекальциферола (витамина D) или эргокальциферола (витамина D)]

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Перевод с английского языка (en).

Официальный экземпляр европейского регионального стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, имеется в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации.

Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным европейским региональным стандартам приведены в дополнительном приложении ДА.

Степень соответствия - идентичная (IDT)

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения витамина D (холекальциферол) или D (эргокальциферол) в пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Витамин D присутствует, главным образом, в продуктах питания животного происхождения, в то время как витамин D - в дикорастущих грибах. Как витамин D, так и витамин D могут присутствовать в витаминизированных пищевых продуктах. Настоящий стандарт не применим к пробам, содержащим одновременно как витамин D, так и витамин D.

Кроме исходных форм - витамина D и витамина D, соответствующие метаболиты - 25-гидроксивитамин D и 1,25-дигидроксивитамин D, также обладают D-витаминной активностью. Настоящий стандарт распространяется на определение витамина D или витамина D по отдельности.

Настоящий стандарт составляет основу аналитических методов, на базе которой аналитик может разработать собственную методику в соответствии со стандартной процедурой.

Метод прошел валидацию при межлабораторных испытаниях с использованием как витаминизированных, так и невитаминизированных проб, таких как маргарин, молоко, жидкое детское питание, детское питание, растительное масло для жарения, рыбий жир в диапазоне от 0,4 до 14 мкг/100 г продукта. Подробная информация о валидации приведена в приложении D.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий стандарт*:

_______________

* Таблицу соответствия национальных стандартов международным см. по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.     

EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

     3 Сущность метода

Метод основан на выделении витаминов D и D из пробы путем ее омыления и экстракции витаминов подходящим растворителем с последующей очисткой экстракта с помощью полупрепаративной нормально-фазовой высокоэффективной хроматографии (далее - ВЭЖХ) и количественным определением витаминов методом обращенно-фазовой ВЭЖХ.

При определении витамина D в качестве внутреннего стандарта используют витамин D. Если определению подлежит витамин D, то в качестве внутреннего стандарта используют витамин D.

Витамин D детектируют спектрофотометрическим методом в ультрафиолетовой области и идентифицируют пики по значениям времени удерживания и дополнительно по спектру поглощения в ультрафиолетовой области, если используется диодноматричный детектор. Количественный анализ проводят с применением внутреннего стандарта по результатам измерений значений высот или площадей пиков, см. [1]-[8].

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

Если не указано иное, то при анализе используют только реактивы гарантированной чистоты и воду, по крайней мере, степени чистоты 1 по EN ISO 3696.

4.2 Метанол.

4.3 Этанол абсолютный, объемная доля (CHOH) =100%.

4.4 Этанол, (CHOH)=96%.

4.5 Сульфат натрия, безводный.

4.6 Растворы гидроксида калия для омыления - водный раствор массовой концентрации (КОН)=50 г/100 см или 60 г/100 см или водно-этанольный раствор (КОН)=28 г/100 см при объемном соотношении этанола и воды 9:1.

4.7 Антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота (АК), аскорбат натрия, пирогаллол, сульфид натрия (NaS) или бутилокситолуол (ВНТ).

4.8 Растворители и экстрагенты, например диэтиловый эфир (не содержащий перекисей), дихлорметан, петролейный эфир, н-гексан, этилацетат или подходящая их смесь.

4.9 Подвижные фазы для ВЭЖХ

4.9.1 Варианты подвижных фаз, пригодных для нормально-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ

Примерами подходящих подвижных фаз (состав в объемных долях) для полупрепаративной ВЭЖХ являются смеси:

- н-гексана и пропанола-2 (98+2), (99+1) или (95+5);

- н-гексана и изоамилового спирта (99+1);

- н-гексана, пропанола-2 и тетрагидрофурана (98+1+1);

- изооктана и изобутанола (99+1);

- н-гептана и пропанола-2 (97+3).

4.9.2 Варианты подвижных фаз, пригодных для обращенно-фазовой аналитической ВЭЖХ

Примерами подходящих подвижных фаз (состав в объемных долях) для обращенно-фазовой аналитической ВЭЖХ являются:

- метанол;

- смеси метанола и воды (95+5) или (93+7);

- смеси ацетонитрила и метанола (80+20), (90+10) или (70+30);

- смесь ацетонитрила, хлороформа и метанола (93+4+3).

4.10 Образцы сравнения

4.10.1 Образец сравнения эргокальциферола (витамин D), М(СНO)=396,7 г/моль

В качестве образца сравнения витамина D следует использовать препарат максимально доступной степени чистоты с массовой долей основного вещества более 98%. Образец сравнения хранят в соответствии с инструкциями поставщика (при отсутствии света, обычно при температуре ниже 4°С).

4.10.2 Образец сравнения холикальциферола (витамин D), М(СНO)=384,6 г/моль