ГОСТ EN 12014-5-2014

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ


ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение нитрата и (или) нитрита

Часть 5

Ферментативный метод определения нитрата в продуктах для питания грудных детей и детей раннего возраста, содержащих овощи

Foodstuffs. Determination of nitrate and/or nitrite content. Part 5. Enzymatic determination of nitrate content of vegetable containing food for babies and infants

МКС 67.080.20

Дата введения 2016-01-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

    Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИКОП Россельхозакадемии) на основе собственного перевода на русский язык немецкоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 июля 2014 г. N 68-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 1 августа 2014 г. N 849-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 12014-5-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2016 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту EN 12014-5:1997* "Продукты пищевые. Определение нитрата и (или) нитрита. Часть 5. Ферментативный метод определения нитрата в продуктах, содержащих овощи, для питания грудных детей и детей раннего возраста" ("Foodstuffs - Determination of nitrate and/or nitrite content - Part 5: Enzymatic determination of nitrate content of vegetable containing food for babies and infants", IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Международный стандарт разработан техническим комитетом CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы", секретариатом которого считается DIN.

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных и европейских стандартов соответствующие им национальные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Ноябрь 2019 г.

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает ферментативный метод определения нитрата в продуктах для питания грудных детей и детей раннего возраста, содержащих овощи [1], [2]. Диапазон измерений содержания нитрата данным методом - от 50 мг/кг до 200 мг/кг.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения).    

EN 12014-1 Foodstuffs. Determination of nitrate and/or nitrite content. Part 1: General considerations (Продукты пищевые. Определение нитратов и (или) нитритов. Часть 1. Общие положения)     

EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

     3 Сущность метода

Метод основан на экстрагировании нитратов из пробы водой и ферментативном восстановлении нитрата до нитрита в присутствии восстановленной формы кофермента никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФ·Н) по приведенной ниже реакции.

Нитрат+НАДФ·Н+ННитрит+НАДФ+.

Количество НАДФ·Н, израсходованное в ходе данной реакции, соответствующее количеству нитрата, измеряют фотометрическим методом [3].

     4 Реактивы

Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и дистиллированную воду или воду не ниже третьей степени чистоты по EN ISO 3696. При приготовлении растворов следует принимать во внимание массовую долю основного вещества в реактиве.     

4.1 Раствор Карреза I

Для приготовления раствора 150 г гексацианоферрата (II) калия растворяют в некотором количестве воды, объем раствора доводят до 1000 см водой, раствор тщательно перемешивают. Полученный раствор хранят в сосуде темного стекла. Срок годности раствора - 2 недели.     

4.2 Раствор Карреза II

Для приготовления раствора 200 г сернокислого цинка растворяют в некотором количестве воды, объем раствора доводят до 1000 см водой.

4.3 Натрия гидроксид, раствор молярной концентрации c(NaOH) = 2 моль/дм.     

4.4 Буферный раствор на основе имидазола с рН 7,3

________________

При использовании доступных для приобретения тест-комплектов реактивы готовят в соответствии с указаниями изготовителя.

Для приготовления раствора 0,66 г имидазола растворяют в 80 см воды. Значение рН раствора доводят до 7,3 добавлением раствора соляной кислоты молярной концентрации c(HCI)=2 моль/дм, после чего объем раствора доводят до 100 см водой. Срок годности раствора - не менее 1 года при хранении при температуре 4°С.     

4.5 Раствор ФАД

________________

При использовании доступных для приобретения тест-комплектов реактивы готовят в соответствии с указаниями изготовителя.

Готовят раствор динатриевой соли флавинадениндинуклеотида (ФАД·) массовой концентрации 0,17 мг/см с использованием препарата ФАД· массовой долей основного вещества не менее 88%. Срок годности раствора - не менее 1 дня при хранении при температуре 4°С.     

4.6 Раствор НАДФ·Н

________________

При использовании доступных для приобретения тест-комплектов реактивы готовят в соответствии с указаниями изготовителя.

Готовят раствор тетранатриевой соли бета-никотинамидадениндинуклеотидфосфата (-НАДФ·Н·) массовой концентрации 5,6 мг/см с использованием препарата -НАДФ·Н· массовой долей основного вещества не менее 98%. Срок годности раствора не менее 1 сут при хранении при температуре 4°С и не более 2 ч при хранении при комнатной температуре.     

4.7 Раствор нитрат-редуктазы

________________

При использовании доступных для приобретения тест-комплектов реактивы готовят в соответствии с указаниями изготовителя.

Для приготовления раствора 60 мг лиофилизата нитрат-редуктазы активностью около 0,4 Е/мг, выделенной из грибов рода Aspergillus (ЕС 1.6.6.2) [4], растворяют в 5 см воды. Срок годности раствора - не менее 2 недель при хранении при температуре 4°С.

________________

Е - обозначение международной (стандартной) единицы активности, определяемой как количество фермента, катализирующее преобразование 1 микромоля субстрата за минуту в заданных условиях.

     5 Приборы и оборудование

При проведении испытания используют обычные лабораторные приборы и оборудование, в частности, перечисленные ниже.     

5.1 Измельчитель проб (гомогенизатор, миксер или диспергатор)

Измельчитель проб должен обеспечивать получение гомогенной диспергированной пробы и гарантировать при этом отсутствие перехода в пробу металлов переменной валентности, способных ингибировать действие ферментов.

5.2 Мешалка магнитная лабораторная с нагревательной платформой.

5.3 Фильтры бумажные.

5.4 Пипетки для ферментативного анализа, градуированные на частичный слив объемом дозирования 0,05 см, 0,1 см, 1 см и 2 см, или дозаторы пипеточные с взаимозаменяемыми наконечниками.

5.5 Кюветы спектрофотометрические стеклянные или пластиковые длиной оптического пути 1 см, не обладающие существенной оптической плотностью при длинах волн 334, 340 или 365 нм.

5.6 Спектрофотометр, пригодный для проведения измерений при длине волны 340 нм с шириной спектральной полосы не более ±5 нм.

Примечание - Допускается использовать фильтровые фотометры, оснащенные ртутной разрядной лампой, пригодные для проведения измерений при длинах волн 365 и 334 нм.

5.7 Центрифуга, обеспечивающая центробежное ускорение 2900 g на уровне дна центрифужных пробирок.

5.8 Пробирки центрифужные подходящей вместимости.

5.9 Шкаф холодильный, обеспечивающий поддержание температуры внутреннего пространства 4°С.