ГОСТ ISO 16472-2014

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

КОРМА ДЛЯ ЖИВОТНЫХ

Определение содержания нейтрально-детергентной клетчатки с применением амилазы (аНДК)

Animal feeding stuffs. Determination of amylase-treated neutral detergent fibre content (aNDF)

МКС 65.120

Дата введения 2015-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом кормов им.В.Р.Вильямса (ГНУ ВИК Россельхозакадемии) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 18 апреля 2014 г. N 66-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 мая 2014 г N 452-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 16472-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.     

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 16472:2006* "Корма для животных. Определение содержания нейтрально-детергентной клетчатки с применением амилазы (аНДК)" ("Animal feeding stuffs - Determination of amylase-treated neutral detergent fibre content (aNDF)", IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Международный стандарт разработан Техническим комитетом по стандартизации ISO/TC 34 "Food products", подкомитетом SC 10 "Animal feeding stuffs" Международной организации по стандартизации (ISO).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2020 г.     

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Применение настоящего стандарта может включать опасные материалы, операции и оборудование. Настоящий стандарт не ставит целью решить все проблемы, угрожающие безопасности, связанные с его применением. При использовании настоящего стандарта пользователь самостоятельно несет ответственность за установление соответствующих правил безопасности и охраны здоровья и определение применимости ограничений, налагаемых местными условиями.

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает методы определения содержания нейтрально-детергентной клетчатки с применением амилазы (далее - аНДК) во всех типах кормов для животных.

Стандарт включает в себя гравиметрический рабочий и контрольный методы.

     2 Нормативные ссылки          

В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий стандарт. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения).

ISO 6498, Animal feeding stuffs - Preparation of test samples (Корма для животных. Подготовка проб для анализа)     

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применент следующий термин с соответствующим определением:

3.1 содержание нейтрально-детергентной клетчатки с применением амилазы (содержание аНДК): Массовая доля нерастворимого остатка клетчатки, определенная по методу, установленному в настоящем стандарте.

Примечание - Содержание аНДК выражается в процентах.

     4 Сущность метода

Сущность метода заключается в использовании раствора нейтрального детергента (НД) и термостабильной альфа-амилазы для растворения легкопереваримых белков, жиров, сахаров, крахмала и пектиновых веществ в кормах, оставляя нерастворимый волокнистый остаток, представляющий собой, главным образом, компоненты клеточных стенок растительных материалов (целлюлозы, гемицеллюлозы и лигнина) и нерастворимые азотистые вещества в кормах животного происхождения.

     5 Реактивы

Применяют только реактивы квалификации х.ч. для анализа, ч.д.а., если не установлено другое, и только дистиллированную или деминерализованную воду, или воду эквивалентной чистоты.

5.1 Сернистокислый натрий, безводный .

5.2 Высушенная лущеная дробленая кукуруза (кукурузная мука грубого помола сырая), измельченная до прохода через сито с отверстиями 1 мм мельницы режущего типа.

5.3 Раствор иода, содержащий 2 г иодистого калия и 1 г иода в 100 см воды.

Раствор хранят в бутыли из темного стекла.

5.4 Термо-стабильная альфа-амилаза, в виде раствора или водного экстракта лиофилизированного энзимного порошка (около 1 г порошка экстрагируют в 100 см воды).

ПРИМЕР - Termamyl 120 l от Novo Enzymes или эквивалент.

Раствор термостабильной амилазы или экстракт порошка энзима стандартизируют таким образом, чтобы двукратное внесение раствора энзима по 2 см обеспечило удаление крахмала из 0,5 г сырого кукурузного крахмала (5.2). Подробный метод стандартизации раствора термостабильной альфа-амилазы приведен в приложении В.

5.5 Раствор нейтрального детергента (НД)

В мерную колбу вместимостью 1000 см вносят 400-500 см воды. Добавляют 4,0 г гидроокиси натрия , 14,6 г этилендиамин-NNNN-тетрауксусной кислоты (ЭДТА), 4,56 г двузамещенного фосфорнокислого натрия и 6,81 г десятиводного борнокислого натрия и перемешивают до растворения (при необходимости нагревают). и ЭДТА могут быть заменены 18,6 г динатриевой соли ЭДТА.

Под вытяжкой добавляют 30 г лаурил сульфата натрия и после его растворения - 10 см триэтилен гликоля (противопенное средство). Доливают воду приблизительно до 950 см и перемешивают. Устанавливают рН между 6,95 и 7,05 с помощью концентрированной хлористоводородной кислоты или гидроокиси натрия и разбавляют водой до 1000 см. Если рН выходит за установленные пределы более чем на 0,5 ед. рН, раствор бракуют.

Раствор НД хранят при комнатной температуре. Если появляется осадок, раствор нагревают до 25°С и перед использованием перемешивают. Регистрируют дату приготовления раствора НД, данные измерения рН и все проведенные регулирования рН в журнале приготовления реактивов.

     6 Оборудование

Используют обычное лабораторное оборудование, в том числе, следующее:

6.1 Аналитические весы, обеспечивающие взвешивание с точностью до 0,0001 г.

6.2 Мельница циклон с ситом отверстиями 2 мм или режущая мельница с ситом отверстиями 1 мм, обеспечивающие измельчение проб до получения частиц средним размером 220-260 мкм.

6.3 Установка для кипячения с обратным холодильником, с индивидуальными нагревателями и водяными холодильниками, которые подходят к колбам вместимостью 600 см.

Приемлема любая установка, применяемая при определении сырой клетчатки. Нагреватель подбирают таким образом, чтобы обеспечить закипание 50 см воды в течение 4-5 мин при использовании водяных холодильников. Допускается использовать установку типа Fibertec, на которой 50 см воды закипает в течение 10 мин.

6.4 Тигли Гуча с дисками из фриттового стекла, крупной пористости (размер пор 40-60 мкм), высокие тигли вместимостью 40-50 см, или Р2 (размер пор 40-100 мкм) вместимостью 26-28 см.

Новые тигли моют и прокаливают при температуре 500°С в течение 1 ч. После каждого использования тигли очищают путем прокаливания при температуре 500°С в течение 3 ч, удаления золы, погружения в раствор детергента и обработки ультразвуком в течение 7-10 мин. Споласкивают тигли горячей водой и замачивают в воде при комнатной температуре в течение не менее 30 мин. Днище каждого тигля снабжают резиновой пробкой, подогнанной к порту, который соединен с ловушкой и вакуумной линией. Каждый тигель промывают путем повторного погружения тигля в воду.

Периодически контролируют скорость фильтрования следующим образом. Каждый тигель наполняют 50 см дистиллированной воды (25 см для тиглей Р2 установки Fibertec) и регистрируют время, необходимое для полного вытекания воды без вакуума (должно быть (180±60) с для тигля Гуча или (75±30) с для Р2). Если время фильтрации менее 100 с (или менее 30 с для Р2), тигель бракуют. Если время менее 120 с (или менее 45 с для Р2), проверяют диск из фриттового стекла на наличие трещин. Если фильтрование занимает более 240 с (или более 105 с для Р2), тигель моют кислотным или щелочным моющим раствором [1]. Если промывание не улучшает скорость фильтрования, тигель бракуют.

Вместо тиглей Р2,  также можно использовать металлические тигли из нержавеющей стали с металлическим ситом из нержавеющей стали с отверстиями 90 мкм.

6.5 Вакуумный коллектор для фильтрования (например, типа Fibertec), который позволяет должным образом промыть остаток клетчатки.

Коллектор должен герметично соединяться с тиглем, чтобы уменьшить образование пены в вакуумных линиях. Используют толстостенные вакуумные шланги для присоединения коллектора к ловушке (4-18 дм) и источнику вакуума. Рекомендуется установить вакуумный резервуар (18 дм) между ловушкой и источником вакуума, чтобы обеспечить вакуум достаточной мощности для удаления пены.

6.6 Обеспечение горячей водой

Используют генератор непрерывной кипящей воды в соответствии с [1] или подходящее аналогичное оборудование. Источник должен обеспечивать горячей водой (более 95°С) в количествах, достаточных для одновременного промывания всех проб через носик, дающий тонкую струю (скорость вытекания 35-40 см за 10 с; приемлемым является наконечник 2,5 см имеющейся пластиковой пипетки). Тонкий носик способствует уменьшению количества воды, требующейся для переноса частичек в тигель, и создает давление воды, необходимое для удаления остатков, прилипших к стенкам колбы. Важно, чтобы добавляемая в тигли вода была горячей, особенно для проб, содержащих крахмал, пектиновые вещества, слизи или глико-протеины. Для установки типа Fibertec используют шприц с носиком, дающим конусообразную струю для смывания частичек с холодильников и 60 см шприц с 12-игольчатым носиком, который имеет длину 10 см, чтобы смыть все остатки, прилипшие к холодильникам.

     7 Отбор проб

Отбор проб не является частью метода, установленного настоящим стандартом. Рекомендованный метод отбора проб приведен в [2].

Важно, чтобы в лабораторию поступила проба, которая действительно является представительной и не была повреждена или изменена при транспортировании или хранении.

     8 Подготовка проб для анализа

Лабораторную пробу готовят по ISO 6498.

Для хранения и облегчения измельчения лабораторная проба должна быть сухой (около 90% сухого вещества). Чтобы предотвратить образование искусственной клетчатки, сырую пробу сушат при температуре менее 60°С. Результат анализа зависит от размера частиц лабораторной пробы. Лабораторную пробу измельчают до получения среднего размера частиц 220-260 мкм (см. 6.2). При измельчении лабораторная проба разделяется, и материал с высоким содержанием клетчатки проходит через измельчитель последним. Материал в измельчителе не отбрасывают, смешивают его с материалом из приемника измельчителя. Перемешивают измельченную пробу путем помещения ее на квадратный лист бумаги (приблизительно 4040 см), загнутый вдоль обеих диагоналей. Приподнимают противоположные углы листа, чтобы сдвинуть пробу по направлению к центру. Лист снова расстилают, поворачивают его на 90° и приподнимают другие два угла. Повторяют 11 раз. Пробу переносят в подходящий контейнер.