ГОСТ 32474-2013 Методы испытаний химической продукции, представляющей опасность для окружающей среды. Определение коэффициента распределения н-октанол/вода методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     3 Основные положения

3.1 Коэффициент распределения н-октанол/вода () является соотношением равновесных концентраций вещества растворенного в двухфазной системе, состоящей из двух практически несмешивающихся растворителей. В случае н-октанола и воды см. формулу

,                                            (1)

где - концентрация н-октанола;

- концентрация воды.

Будучи отношением двух концентраций, является безразмерным и обычно приводится в виде десятичного логарифма.

3.2 является важным параметром в изучении трансформации химических веществ в окружающей среде. Была показана высокая значимость связи неионизированной формы вещества с его способностью к биоаккумулированию в рыбе. Также было доказано, что является удобным параметром для предсказания адсорбции веществ в почве и для установления количественной зависимости структура - активность для широкого диапазона биологических эффектов.

3.3 Значение в диапазоне от минус двух до четырех (иногда свыше 5) может быть экспериментально определено методом [2]. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) применим для диапазона значений от ноля до шести. Этот метод может требовать оценки для выбора референтного вещества и поддержки любых выводов, основывающихся на данных, полученных в тесте. Методы расчета кратко обсуждаются в приложении А к настоящему стандарту. При ВЭЖХ используется изократный метод.

_______________

Верхний предел определяется необходимостью достижения полного разделения фаз после установления распределительного равновесия и перед отбором проб для аналитического определения. Если надлежащие условия тщательно соблюдаются, то верхний лимит может быть расширен до более высоких значений .

3.4 Значения зависят от условий окружающей среды, таких как температура, рН, ионная сила и т.д., и для правильной интерпретации данных о эти условия должны быть определены в эксперименте. Для ионизируемых веществ могут быть использованы другие альтернативные методы, но в некоторых случаях более целесообразно использовать методы ВЭЖХ для рН, свойственных для окружающей среды (см. 3.8).

3.5 Обратно-фазовая ВЭЖХ выполняется на аналитических колонках, заполненных доступной в промышленных масштабах твердой фазой, содержащей длинные углеводородные цепи (например, С8, С18) химически связанной на силикагеле.

3.6 Вещество вводится в перегородки колонки между фазой подвижного растворителя и стационарной углеводородной фазой, так он транспортируется вдоль колонны по подвижной фазе. Химические вещества удерживаются в пропорции с их коэффициентом разделения углеводород-вода, где гидрофильное соединение элюируется первым, а липофильное - последним. Это время удержания описывается емкостным фактором , вычисляемым по формуле:

,                                                     (2)

где - время удержания исследуемого вещества;

- "мертвое" время, т.е. среднее время, необходимое для прохождения через колонку молекул растворителя.

Количественные методы анализа не требуются, необходимо только определение времени удерживания.

3.7 Коэффициент распределения октанол/вода тестируемого вещества может быть рассчитан экспериментальным определением его емкостного фактора , а затем подставлением значения фактора в следующую формулу

,                                           (3)

где , коэффициенты линейной регрессии.

Вышеуказанная формула может быть выведена путем построения уравнения линейной регрессии зависимости референтного вещества от емкостного фактора референтного вещества.

3.8 Обратно-фазовая ВЭЖХ дает возможность оценить коэффициент распределения в диапазоне от ноля до шести, но, в исключительных случаях, может быть расширено до покрытия диапазона от шести до десяти. Это может требовать того, чтобы подвижная фаза менялась. Этот метод не применим для сильных кислот и оснований, комплексов металлов, веществ, которые реагируют с элюентом, или поверхностно-активными веществами. Значения для ионизированной формы могут быть представлены в виде их неионизированных форм (свободная кислота или свободное основание) только путем использования соответствующего буферного раствора с рН ниже, чем для свободных кислот или выше для свободных оснований.

Примечание - - отрицательный десятичный логарифм константы диссоциации кислоты.

Кроме того, может быть представлен этот рН метрический метод для испытаний неионизированных форм веществ. Если значение определено для использования в классификации оценки опасности для окружающей среды или оценки экологических рисков, испытание должно быть представлено в диапазоне рН, соответствующему природному значению, например, рН в диапазоне от пяти до девяти.

3.9 В некоторых случаях примеси могут затруднить интерпретацию результатов из-за неопределенности в распределении пиков. Для смесей, которые приводят к нерешенным полосам, должны быть представлены вышний* и нижний пороги и процент области каждого пика. Для смесей, которые являются группой гомологов, также, должен быть указан средневзвешенный показатель , рассчитанный на основе единичных значений и соответствующих процентных значений областей. При расчете во внимание должны быть приняты все пики, которые делают вклад от 5% и более от общей площади пика.

________________