ГОСТ 32294-2013

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ, ПРЕДСТАВЛЯЮЩЕЙ ОПАСНОСТЬ ДЛЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Определение токсичности для рыб на ранних стадиях развития

Testing of chemicals of environmental hazard. Fish, Early-Life Stage Toxicity Test

МКС 71.040.50

Дата введения 2014-08-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ" (ФГУП "ВНИЦСМВ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 5 ноября 2013 г. N 61-П )

За принятие проголосовали:

4      Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 780-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32294-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 августа 2014 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному документу OECD, Test No 210:1992* "Определение токсичности для рыб на ранних стадиях развития" ("Fish, Early-Life Stage Toxicity Test", IDT)

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Декабрь 2019 г.

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

     1 Область применения

Настоящий стандарт является руководством по определению токсичности химических веществ для рыбы на ранних стадиях развития (икра, личинки, эмбрионы и мальки). Тесты, проводимые на рыбе на ранних стадиях ее развития, направлены на определение летального и сублетального воздействия химических веществ. Информацию, полученную в ходе теста, используют для последующей оценки хронического летального и сублетального воздействия химических веществ.

     2 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины с соответствующими определениями:

2.1 наименьшая наблюдаемая эффективная концентрация (LOEC): Минимальная концентрация исследуемого вещества, при которой наблюдается статистически значимое воздействие (при <0,05) по сравнению с контрольным тестом в пределах установленного периода экспозиции. Все тестовые концентрации исследуемого вещества, превышающие LOEC, должны иметь токсический эффект, равный или больше наблюдаемого при LOEC.

2.2 неэффективная наблюдаемая концентрация (NOEC): Концентрация исследуемого вещества, находящаяся сразу под LOEC, которая не имеет никакого статистически значимого эффекта по сравнению с контрольным тестом в пределах установленного периода экспозиции.

     3 Принцип теста

3.1 Рыба на ранних стадиях ее развития подвергается воздействию растворенного в воде исследуемого вещества в различных концентрациях в определенном диапазоне, предпочтительно в проточных условиях, или, если это возможно, в полустатичных условиях. Тест начинают с того, что помещают оплодотворенную икру в тестовые сосуды, и продолжают, по крайней мере до того момента, пока все рыбы из контрольной группы не перейдут на свободное питание. Затем оценивают летальные и сублетальные воздействия и сравнивают их с контрольными величинами для определения наименьшей наблюдаемой эффективной концентрации (LOEC) и неэффективной наблюдаемой концентрации (NOEC).

     4 Информация об исследуемом веществе

4.1 Информация об исследуемом веществе должна содержать сведения о результатах испытаний на острую токсичность, проведенных на особях рыб выбранного вида (ГОСТ 32473). Также должны быть известны растворимость в воде и давление паров исследуемого вещества. Количественное определение исследуемого вещества в тестируемых растворах необходимо проводить с помощью достоверного аналитического метода с известной точностью и пределом обнаружения.

4.2 Полезной может быть также информация о:

- структурной формуле исследуемого вещества;

- чистоте исследуемого вещества;

- стабильности в воде и на свету;

- константе диссоциации ;

- коэффициенте распределения н-октанол/вода ;

- результатах испытания на потенциальную способность к биоразложению (ГОСТ 32295).

     5 Достоверность теста

5.1 Тест считается достоверным в случае, если выполняются следующие условия:

- концентрация растворенного кислорода должна составлять от 60 до 100% от степени насыщения воздуха при заданных условиях в течение всего теста;

- температура воды в тестовых сосудах во все последующие дни теста не должна отличаться более чем на ±1,5°С и должна сохраняться в диапазоне, рекомендуемом для тестовых видов рыб (приложения Б и Д);

- должно быть представлено подтверждение того, что концентрация исследуемого вещества в растворе удовлетворительно поддерживается в пределах ±20% от средних измеренных значений;

- полная выживаемость оплодотворенной икры в контрольной группе; в контрольном тесте с раствором, содержащим только солюбилизатор (растворитель, эмульгатор или диспергатор), выживаемость должна превышать пределы или быть равной пределам выживаемости, определенным в приложениях Б и Д;

- использование солюбилизатора (растворителя, эмульгатора или диспергатора) не должно оказывать существенное воздействие на выживаемость или являться причиной других негативных воздействий на ранние стадии развития рыбы.

     6 Описание метода

     6.1 Оборудование

6.1.1 Для проведения тестирования могут использоваться любые сосуды, изготовленные из стекла, нержавеющей стали или другого химически инертного материала. Все сосуды, используемые в тесте, должны быть изготовлены из одного и того же материала. Размеры сосудов должны обеспечивать соблюдение критериев загрузки, приведенных в п.7.1.2. Тестовые сосуды нельзя подвергать нежелательному воздействию.

     6.2 Выбор видов

6.2.1 Рекомендуемые для использования при тестировании виды рыб приведены в таблице 1. Помимо этого, можно также использовать и другие виды (примеры приведены в таблице 2), но в подобном случае тестовые процедуры необходимо адаптировать к соответствующим тестовым условиям. В отчете о проведении теста должно быть приведено обоснование выбора тестового вида и экспериментального метода.

     6.3 Содержание рыб

6.3.1 Требования к кормлению и содержанию приведены в приложении А.

6.4 Обработка эмбрионов и личинок

6.4.1 Первоначально, эмбрионы и личинки могут быть в пределах тестового сосуда помещены в небольшие контейнеры, изготовленные из стекла или нержавеющей стали и оснащенные сеткой или концевыми отверстиями для прохождения через них потока тестируемого раствора. Нетурбулентное течение потока тестируемого раствора через контейнеры может обеспечиваться путем остановки механизма, перемещающего контейнеры вверх и вниз. При этом рыбы должны быть постоянно погружены в тестируемый раствор.

Оплодотворенная икра лососевых рыб может быть размещена на подставках или сетках с отверстиями достаточно большого диаметра для того, чтобы личинки могли свободно проходить вниз после вылупливания.

6.4.2 Если для удержания икры в пределах тестового сосуда используются контейнеры, подставки или сетки, то данные ограничители необходимо удалять после вылупливания личинок (приложение А), за исключением тех случаев, когда сетки необходимо оставить для предотвращения уноса рыбы из тестового сосуда. Если при замене тестируемого раствора необходимо переносить личинки в другой тестовый сосуд, нельзя подвергать их воздействию воздуха, также нельзя использовать сетки для извлечения рыбы из контейнеров. Выбор времени для переноса личинок зависит от используемого вида, для некоторых видов перенос личинок не требуется.

     6.5 Вода

6.5.1 Любая вода, в которой тестовые виды демонстрируют выживаемость, по крайней мере в пределах, указанных в приложениях Б и Д, является пригодной для проведения тестирования. Качество воды должно быть постоянным на протяжении всего теста. Для гарантии того, что вода не оказывает негативного воздействия на результаты теста (в частности, не способствует комплексообразованию исследуемого вещества) или на тестовый вид, необходимо периодически отбирать пробы воды для анализа. Если известно, что вода обладает постоянным качеством, анализы содержания тяжелых металлов (меди, свинца, цинка, ртути, кадмия, никеля), основных анионов и катионов (кальция, магния, натрия, калия, хлора и сульфат-иона), пестицидов, полного органического углерода и взвешенных частиц должны проводиться один раз в три месяца. Некоторые химические характеристики воды, пригодной для проведения теста, приведены в приложении В.

     6.6 Тестируемые растворы

6.6.1 Для проведения теста в проточных условиях требуется система, которая непрерывно распределяет и разбавляет основной раствор исследуемого вещества (дозирующий насос, автоматический разбавитель) для обеспечения необходимой концентрации исследуемого вещества в тестовых сосудах. Расходы основного раствора и воды должны измеряться в определенные промежутки времени в течение теста и не должны изменяться более чем на 10%. Подходящими считаются расходы, равные как минимум пяти объемам тестового сосуда за 24 ч.

6.6.2 Для подготовки основного раствора соответствующей концентрации может потребоваться использование солюбилизатора (растворителя, эмульгатора или диспергатора).

6.6.3 При проведении теста в полустатичных условиях могут использоваться две различные процедуры обновления тестируемого раствора. Либо новый тестируемый раствор готовят в чистом сосуде и выжившую икру и личинки аккуратно переносят в новый сосуд, либо икру и личинки оставляют в тестовых сосудах, при этом пропорционально заменяя как минимум две трети тестируемого раствора.

     7 Процедура тестирования

     7.1 Условия воздействия

     7.1.1 Продолжительность

Тест необходимо проводить как можно скорее после оплодотворения икры. Предпочтительно погружать эмбрионы в тестируемые растворы прежде, чем начнется разрыв бластодиска, или как можно раньше после этой стадии. Тест должен продолжаться по крайней мере до тех пор, пока все особи рыб в контрольном тесте не перейдут на свободное кормление. Продолжительность теста зависит от выбранного вида рыб. Рекомендуемая продолжительность теста для выбранного вида рыб приведена в приложениях Б и Д.

     7.1.2 Загрузка

Количество оплодотворенной икры в начале теста должно быть достаточным для соблюдения статистических требований. Икра должна быть распределена между тестовыми сосудами случайным образом. Для тестирования одной концентрации необходимо использовать как минимум 60 икринок, разделенных на две равные порции между двумя параллельными тестовыми сосудами. Уровень загрузки (количество биомассы на объем тестируемого раствора) должен быть достаточно низким для того, чтобы концентрация растворенного кислорода в тестируемом растворе, составляющая как минимум 60% от величины насыщения воздуха при данных условиях, могла поддерживаться без дополнительной аэрации. Для проведения теста в проточных условиях рекомендуется скорость загрузки, не превышающая 0,5 г/л тестируемого раствора в сутки (24 ч), загрузка не должна превышать 5 г/л раствора в любое время теста.

     7.1.3 Температура и освещение

7.1.3.1 Параметры температуры и освещенности должны соответствовать выбранному виду рыб (приложение Б).

     7.1.4 Кормление

7.1.4.1 Выбор корма и периодов кормления имеет большое значение. Важно, чтобы на каждой стадии тестирования рыбам предоставлялся правильный корм в подходящее время и в количестве, необходимом для поддержания нормального развития. Должно обеспечиваться свободное кормление с минимальными излишками пищи. Излишки пищи и отходы жизнедеятельности рыб необходимо вовремя убирать из тестового сосуда для того, чтобы предотвратить его загрязнение. Требования к кормлению и содержанию рыб приведены в приложении А, однако данные рекомендации непрерывно пересматриваются для улучшения кормления и оптимизации роста рыб.

     7.1.5 Тестируемые концентрации

7.1.5.1 Используют пять концентраций исследуемого вещества, образующих геометрическую прогрессию со знаменателем, не превышающим 3.2. При выборе диапазона тестируемых концентраций необходимо учитывать кривую зависимости от периода экспозиции в испытании на острую токсичность. В пороговых тестах можно использовать менее пяти концентраций или более узкий диапазон концентраций. При использовании менее пяти концентраций в отчете о проведении теста должно приводиться соответствующее обоснование. Концентрации исследуемого вещества, превышающие (96 ч) или 10 мг/л, не тестируются.