ГОСТ ИСО 21569-2009

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и производных продуктов. Методы качественного обнаружения на основе анализа нуклеиновых кислот

Foodstuffs
Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products. Qualitative nucleic acid based methods

МКС 67.050

Дата введения*
_____________________
* Стандарт не введен на территории Российской Федерации
в качестве национального стандарта Российской Федерации.
- Примечание изготовителя базы данных.

Предисловие

Евразийский совет по стандартизации, метрологии и сертификации (ЕАСС) представляет собой региональное объединение национальных органов по стандартизации государств, входящих в Содружество Независимых Государств. В дальнейшем возможно вступление в ЕАСС национальных органов по стандартизации других государств.

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Порядок разработки, принятия, применения, обновления и отмены".

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт метрологии" (БелГИМ) на основе собственного аутентичного перевода стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Евразийским советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 36-2009 от 11 ноября 2009 г.)

За принятие проголосовали:

4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 21569:2005* Foodstuffs - Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products - Qualitative nucleic acid based methods (Продукты пищевые. Методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и производных продуктов. Методы качественного обнаружения на основе анализа нуклеиновых кислот).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Международный стандарт разработан CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы" Европейского комитета по стандартизации (CEN) совместно с ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO) в соответствии с Соглашением о техническом сотрудничестве между ISO и CEN (Венским соглашением).

Перевод с английского языка (en).

В разделе "Нормативные ссылки" и тексте стандарта ссылки на международные стандарты актуализированы.

Сведения о соответствии межгосударственного стандарта ссылочному международному стандарту приведены в дополнительном приложении Д.А.

Степень соответствия - идентичная (IDT)

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных (государственных) стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация также будет опубликована в сети Интернет на сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Зарегистрирован N 6007 7 сентября 2010 г.

ВНЕСЕНО Изменение N 1, принятое Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 116-П от 28.02.2019)*

Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных

________________

* Изменение N 1 не введено в действие на территории Российской Федерации. - Примечание изготовителя базы данных.

Введение

Обнаружение генетически модифицированных источников в ингредиентах пищевых продуктов выполняется посредством описанных далее действий, выполняемых последовательно или одновременно. После отбора пробы из анализируемой порции проводят выделение нуклеиновых кислот. Выделенные нуклеиновые кислоты могут быть дополнительно очищены, одновременно с процессом выделения или после него. Дальнейшими действиями являются определение их концентрации (при необходимости), разведение (при необходимости) и использование в аналитических процедурах (например, в анализе ПЦР). Проведение этих действий подробно описано в настоящем стандарте, а также в группе международных стандартов, объединенных общим заголовком: "Пищевые продукты. Методы анализа для определения генетически модифицированных организмов и содержащих их продуктов":

- "Методы количественного определения на основе анализа нуклеиновых кислот" (ISO 21570);

- "Выделение нуклеиновых кислот" (ISO 21571).

Дополнительная информация об общих требованиях и определениях, включая описанные выше шаги, приводится в международном стандарте ISO 24276.

Качественное определение целевых последовательностей ДНК выполняется с целью получения ответа "да" или "нет" на вопрос о содержании или отсутствии целевой последовательности ДНК с учетом соответствующих контрольных проб в пределах обнаружения используемого метода анализа и для анализируемой части образца.

Специфичность методов, в соответствии с описаниями в приложениях А-D, варьируется от скрининга (определение типичных последовательностей ДНК, характерных для ГМО) до специфической идентификации генетической конструкции или специфического события генетической трансформации.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

     1 Область применения

Настоящий стандарт содержит описание процедур качественного определения генетически модифицированных организмов (ГМО) и содержащих их продуктов путем анализа нуклеиновых кислот, выделяемых из исследуемого образца. Основное внимание уделено методам анализа на основе амплификации нуклеиновых кислот с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР).

В настоящем стандарте приводятся общие требования к специфическому определению и идентификации целевых последовательностей нуклеиновой кислоты (ДНК) и к подтверждению идентичности амплифицированной последовательности ДНК.

Руководства, минимальные требования и критерии выполнения, установленные в настоящем стандарте, предназначены для обеспечения получения сопоставимых, точных и воспроизводимых результатов в различных лабораториях.

Настоящий стандарт был разработан для матриц пищевых продуктов, однако может быть также применен для анализа других матриц (например, корма для животных, образцы растений из окружающей среды).

Примеры конкретных методов приводятся в приложениях A-D.

     2 Нормативные ссылки

Для применения настоящего стандарта необходимы следующие ссылочные документы*. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного документа, для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного документа.

________________

* Таблицу соответствия национальных стандартов международным см. по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.

ISO 21571:2005 Продукты пищевые. Методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и их производных. Извлечение нуклеиновой кислоты

ISO 24276:2006 Продукты пищевые. Методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и полученных из них продуктов. Общие требования и определения

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применяют термины и определения, установленные в ISO 24276.

     4 Принцип метода

4.1 Общие положения

Качественный анализ представляет собой специфическое определение целевых последовательностей нуклеиновой кислоты в анализируемых образцах. Каждый метод должен быть специфичен для целевой последовательности.

Качественный анализ должен четко показывать наличие или отсутствие исследуемого генетического элемента с учетом соответствующих контролей.

Примечание - Пределы обнаружения используемого метода анализа и размер анализируемой части образца представляют собой критические аспекты метода.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

4.2 ПЦР-амплификация

Амплификация целевой последовательности ДНК производится in vitro посредством реакции, катализируемой ДНК-полимеразой, в присутствии олигонуклеотидов-праймеров и дезоксирибонуклеотидтрифосфатов в заданном реакционном буфере [1], [2]. Необходимым условием для проведения амплификации целевой последовательности является отсутствие ингибиторов полимеразы в реакционной смеси. Амплификация ДНК - это циклический процесс, состоящий из следующих этапов:

- денатурация двухнитевой ДНК в однонитевую нуклеиновую кислоту посредством нагрева;

- отжиг (специфическая гибридизация) праймеров к целевой последовательности при соответствующей температуре и

- элонгация праймеров, связанных с обеими одинарными спиралями, ДНК-полимеразой, применимой в ПЦР, при соответствующей температуре.

4.3 Обнаружение и подтверждение продуктов ПЦР

Обнаружение продуктов ПЦР производится с помощью электрофореза в агарозном геле или при необходимости альтернативными доступными методами после изоляции посредством соответствующей процедуры разделения.

Идентификация любой обнаруженной целевой последовательности может быть подтверждена соответствующей методикой (например, с помощью рестрикционного анализа ферментами рестрикции, гибридизации или анализа последовательности ДНК).

В случае использования анализа ПЦР в реальном времени амплификация и детектирование происходят одновременно.

     5 Реактивы

Если это не оговаривается особо, растворы реактивов, используемых для анализа, обычно хранят приблизительно при минус 20°С.

Целесообразно разделить используемые для аналитического метода растворы реактивов на малые порции, это позволит избежать многократного повторения циклов размораживания/замораживания, а также снизить риск перекрестной контаминации.

5.1 Целевая ДНК/Контроль

5.2 Вода

5.3 Раствор дезоксирибонуклеотидтрифосфатов (dNTP), содержащий dATP, dCTP, dGTP и dTTP или dUTP.

Примечание - Использование dUTP может отрицательно повлиять на дальнейшее проведение анализа продуктов амплификации ПЦР с помощью рестрикционного анализа.

5.4 Буферный раствор для ПЦР

Буферный раствор для ПЦР обычно поставляется с ДНК-полимеразой. Этот раствор может содержать или не содержать в концентрации, указанной производителем. Конечная концентрация индивидуальна для каждого метода и, следовательно, приводится в каждом приложении. На рынке также могут быть представлены готовые к использованию реактивы. Для таких реактивов следует соблюдать инструкцию, предоставляемую производителем.