3.1 Тест состоит из двух частей: фазы воздействия (поглощения) и фазы поствоздействия (очистки). Во время фазы поглощения отдельные группы рыб одного вида подвергают воздействию образцов исследуемого вещества, по меньшей мере, в двух концентрациях. Затем помещают в промежуточную среду, не содержащую исследуемое вещество, для прохождения фазы очистки. Данная фаза необходима всегда, за исключением случаев, когда поглощение вещества во время первой фазы оказалось незначительным (например, показатель меньше 10). Концентрацию тестируемого вещества в/на рыбе (или специальных образцах ткани) отслеживают на протяжении обеих фаз теста. Помимо тестирования с применением двух разных концентраций, контрольную группу рыб помещают в идентичные условия за исключением отсутствия в среде тестируемого вещества для соотнесения возможных негативных последствий, наблюдаемых в двух первых тестируемых группах с показателями контрольной группы и получения информации о фоновом уровне концентрации тестируемого вещества.
3.2 Фаза поглощения длится 28 сут за исключением случаев, когда стационарное состояние достигается раньше. Стационарное состояние достигается при значении концентрации исследуемого вещества в рыбе в пробах, взятых с двухдневным интервалом и различающихся не более чем на 20%.
Прогнозирование длительности фазы поглощения и времени наступления стационарного состояния может основываться на уравнениях, приведенных в приложении C.
Фазу очистки начинают с перемещения рыбы в чистый сосуд с аналогичной средой без содержания тестируемого вещества. Коэффициент биоконцентрации рассчитывают одновременно и как соотношение () концентрации в рыбе (), и в воде () в предполагаемый момент стационарного состояния, и как кинетический коэффициент биоконцентрации , являющийся соотношением констант поглощения () и выделения () при условии, что биоконцентрация может быть представлена реакцией первого порядка.
_________________
Если реакция не первого порядка, следует использовать более сложные модели (см. приложение E).
3.3 Если в течение 28 дней стадия стабильности не наступает, фаза поглощения продлевается до ее наступления или до 60 дней, в зависимости от того, что наступит раньше; после этого начинается фаза очистки.
3.4 Константа поглощения, константа очистки (потери) (или константы, для получения которых применяются более сложные модели), коэффициент биоконцентрации, а также, если возможно, предел достоверности для каждого из этих параметров рассчитываются при помощи моделей, наиболее соответствующих полученным данным по концентрации в рыбе и в воде.
3.5 Коэффициент биоконцентрации выражается функцией общего веса рыбы во влажном состоянии. В определенных целях могут использовать специальные образцы ткани или органы (например, мышцы, печень), если рыба достаточно велика, кроме того, рыба может быть разделена на филе и внутренности. Так как для многих органических веществ существует зависимость между потенциальной биоконцентрацией и липофильностью, наличествует соответствующая взаимосвязь между количеством жира в тестируемой рыбе и наблюдаемым уровнем биоконцентрации тестируемых веществ. Таким образом, для снижения воздействия этой причины вариативности в результатах теста, для веществ с высокой липофильностью (т.е. имеющих 3) биоконцентрацию следует определять относительно количества жировой ткани в дополнение к весу всей туши. Содержание жира должно, по возможности, определяться на том же биологическом материале, что и применяемый для определения биоконцентрации тестируемого вещества.