ИЗМЕНЕНИЕ N 2
ГОСТ Р 52174-2003 "Биологическая безопасность. Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения с применением биологического микрочипа"

ОКС 65.140, 65.160, 67.060, 67.080, 67.100, 67.120, 67.140,

        67.140.30, 67.160, 67.180, 67.190, 67.200, 67.220

Дата введения 2014-07-01

УТВЕРЖДЕНО И ВВЕДЕНО В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22.11.2013 N 1896-ст

Раздел 1. Второй абзац. Заменить слова: "пяти" на "десяти", "10 г (1 пг)" на "10 г (1 нг, ~10 геном-эквивалентов тотальной растительной ДНК/1 мкл пробы)".

Раздел 2 дополнить ссылкой:

"ГОСТ 20015-88 Хлороформ. Технические условия".

Пункты 4.1, 4.2 изложить в новой редакции:

"4.1 Универсальный аппаратно-программный комплекс (УАПК) для анализа биологических микрочипов с компьютерной программой для анализа полученных результатов [1].

4.2 Хлороформ по ГОСТ 20015, х.ч.".

Пункт 4.3. Заменить ссылку: [3] на [2].

Пункт 4.4. Заменить ссылку: [4] на [3].

Пункт 4.8. Заменить ссылку: [5] на [4].

Пункт 4.9. Заменить ссылку: [6] на [5].

Пункт 4.10. Заменить ссылку: [7] на [6].

Пункт 4.13. Заменить ссылку: [8] на [7].

Пункт 4.14. Заменить ссылку: [9] на [8].

Пункт 4.24. Заменить ссылку: [10] на [9].

Пункт 4.25. Заменить ссылку: [11] на [10].

Пункт 4.28 изложить в новой редакции:

"4.28 Цетилтриметиламмоний бромид [11]".

Пункт 4.31 изложить в новой редакции:

"4.31 Фермент термостабильный HotTaq-полимераза для ПЦР с "горячим стартом", оптимум активности при температуре 70 °С - 72 °С [12]".

Пункты 4.33-4.36 изложить в новой редакции:

"4.33 Буфер гибридизационный [13].

4.34 Баня водяная [18].

4.35 Раствор водный дезоксирибонуклеозидтрифосфатов: дАТФ, дГТФ, дУТФ, дЦТФ с молярной концентрацией по 2 мМ каждого [14].

4.36 Раствор флуоресцентного субстрата ФС [15]".

Пункт 4.37. Заменить ссылку: [17] на [16].

Пункт 4.38. Заменить ссылку: [18] на [17].

Пункты 4.39-4.41 изложить в новой редакции:

"4.39 Раствор водный праймеров "ПР-1" для амплификации соответствующих участков генома, включающий следующие пары праймеров [19]:

- праймеры для амплификации фрагмента гена RBCL, кодирующего большую субъединицу рибулозы-1,5-бифосфат карбоксилазы/оксигеназы (Асc. N Z95552, поз.160-720);

- праймеры для амплификации фрагмента гена лектина LE1 (Асc. N К00821М30884, поз.1080-1720);

- праймеры для амплификации фрагмента гена IVR1, кодирующего бета-фруктозидазу (Асc. N U16123, поз.300-1090);

- праймеры для амплификации фрагмента 35S-промотора вируса мозаики цветной капусты (Асc. N FM 177585, поз.3560-3870);

- праймеры для амплификации фрагмента 35S-терминатора вируса мозаики цветной капусты (Асc. N FM177585, поз.1260-1590);

- праймеры для амплификации фрагмента 35S-промотора каулимовируса мозаики норичника (FMV, Асc. N Х06166, поз.6260-6630);

- праймеры для амплификации фрагмента терминатора гена белка теплового шока пшеницы (Асc. N Х58279,поз.10-210);

- праймеры для амплификации фрагмента маркерного гена BAR, определяющего устойчивость к фосфинотрицину (Асc. N AY310901, поз.380-920);

- праймеры для амплификации фрагмента терминатора nos из агробактерии Agrobacterium tumefaciens: (Асc. N FM177585, поз.10-370).

4.40 Раствор водный праймеров "ПР-2" для амплификации соответствующих участков генома, включающий следующие пары праймеров [20]:

- праймеры для амплификации фрагмента гена фосфорилазы УДФ-глюкозы (UDP-GP) (Асc. N D00667, поз.50-310);

- праймеры для амплификации фрагмента гена фосфат-синтазы риса (SPS) (Асc. N U33175, поз.5910-6250);

- праймеры для амплификации фрагмента маркерного гена nptll из транспозона Тn5 бактериального происхождения (Асc. N EU886197, поз.9792-10145);

- праймеры для амплификации фрагмента терминатора ocs из агробактерии Agrobacterium tumefaciens (Асc. N AJ311872, поз.5050-5240);

- праймеры для амплификации фрагмента терминатора гена RBCS гороха (Асc. N FM177582.1, поз.5782-5920);

- праймеры для амплификации фрагмента промотора гена актина риса АСТ1 (Асc. N S44221, поз.12-380);

- праймеры для амплификации фрагмента маркерного гена gus из бактерии Escherichia coli (Асc. N EU503042, поз.2770-3140).

4.41 Биологический микрочип с иммобилизованными олигонуклеотидами, назначение которых приведено в таблице 1 (название олигонуклеотида соответствует изображенному на рисунке 1) [21]:

Таблица 1 - Обозначение и назначение олигонуклеотидных зондов, иммобилизованных на биологическом микрочипе

Рисунок 1 - Схема биологического микрочипа для идентификации генетически модифицированных источников растительного происхождения

Обозначение ячеек приведено в соответствии с назначением иммобилизованного в ней зонда, указанного в таблице 1.

Биологический микрочип представляет собой пластиковую подложку, выполненную в формате предметного стекла по ГОСТ 9284, на поверхности которой в определенном порядке расположена 31 ячейка полиакриламидного геля в форме полусферы диаметром 100 мкм (обозначены кружками на рисунке 1). 22 из них содержат индивидуальный ковалентно иммобилизованный олигонуклеотид (перечень и назначение олигонуклеотидов приведены в таблице 1). Пять ячеек с индексом "0" не содержат перечисленных индивидуальных ковалентно иммобилизованных олигонуклеотидов и выполняют роль отрицательного контроля гибридизации. Четыре ячейки с индексом "М", содержат ковалентно связанный флуоресцентный краситель и предназначены для автоматического вычисления интенсивности флуоресценции ячеек биологического микрочипа после гибридизации. Поверхность биологического микрочипа должна быть закрыта специальной составной крышкой с отверстиями, которая вместе с подложкой образует гибридизационную камеру, предназначенную для проведения реакции гибридизации анализируемых ПЦР-продуктов с иммобилизованными на биологическом микрочипе олигонуклеотидами, и исключающую возможность испарения реакционной смеси в процессе гибридизации. Диагностическая специфичность при идентификации растительной ДНК сои, картофеля, кукурузы, риса составляет не менее 95%.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, а также оборудования и реактивов с техническими характеристиками не хуже указанных выше".

Пункт 6.1.2. Заменить слова: "186,12 г/дм" на "74,4 г/дм", "18,61 г" на "7,44 г", "гидроокиси натрия" на "".

Пункты 6.1.4-6.1.9 изложить в новой редакции:

"6.1.4 Приготовление раствора Трис- массовой концентрации 242,2 г/дм

В колбу вместимостью 100 см помещают 24,22 г трис(оксиметил)аминометана по 4.25 [10] и растворяют приблизительно в 80 см особо чистой стерильной воды. Концентрированной соляной кислотой по ГОСТ 3118 доводят рН раствора до 7,5 ед. рН, а объем - до 100 см особо чистой стерильной водой.

Срок хранения при комнатной температуре - не более 6 мес.