ИЗМЕНЕНИЕ N 2
ГОСТ Р 52174-2003 "Биологическая безопасность. Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения с применением биологического микрочипа"



ОКС 65.140, 65.160, 67.060, 67.080, 67.100, 67.120, 67.140,

        67.140.30, 67.160, 67.180, 67.190, 67.200, 67.220

Дата введения 2014-07-01



УТВЕРЖДЕНО И ВВЕДЕНО В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22.11.2013 N 1896-ст

Раздел 1. Второй абзац. Заменить слова: "пяти" на "десяти", "10 г (1 пг)" на "10 г (1 нг, ~10 геном-эквивалентов тотальной растительной ДНК/1 мкл пробы)".

Раздел 2 дополнить ссылкой:

"ГОСТ 20015-88 Хлороформ. Технические условия".

Пункты 4.1, 4.2 изложить в новой редакции:

"4.1 Универсальный аппаратно-программный комплекс (УАПК) для анализа биологических микрочипов с компьютерной программой для анализа полученных результатов [1].

4.2 Хлороформ по ГОСТ 20015, х.ч.".

Пункт 4.3. Заменить ссылку: [3] на [2].

Пункт 4.4. Заменить ссылку: [4] на [3].

Пункт 4.8. Заменить ссылку: [5] на [4].

Пункт 4.9. Заменить ссылку: [6] на [5].

Пункт 4.10. Заменить ссылку: [7] на [6].

Пункт 4.13. Заменить ссылку: [8] на [7].

Пункт 4.14. Заменить ссылку: [9] на [8].

Пункт 4.24. Заменить ссылку: [10] на [9].

Пункт 4.25. Заменить ссылку: [11] на [10].

Пункт 4.28 изложить в новой редакции:

"4.28 Цетилтриметиламмоний бромид [11]".

Пункт 4.31 изложить в новой редакции:

"4.31 Фермент термостабильный HotTaq-полимераза для ПЦР с "горячим стартом", оптимум активности при температуре 70 °С - 72 °С [12]".

Пункты 4.33-4.36 изложить в новой редакции:

"4.33 Буфер гибридизационный [13].

4.34 Баня водяная [18].

4.35 Раствор водный дезоксирибонуклеозидтрифосфатов: дАТФ, дГТФ, дУТФ, дЦТФ с молярной концентрацией по 2 мМ каждого [14].

4.36 Раствор флуоресцентного субстрата ФС [15]".

Пункт 4.37. Заменить ссылку: [17] на [16].

Пункт 4.38. Заменить ссылку: [18] на [17].

Пункты 4.39-4.41 изложить в новой редакции:

"4.39 Раствор водный праймеров "ПР-1" для амплификации соответствующих участков генома, включающий следующие пары праймеров [19]:

- праймеры для амплификации фрагмента гена RBCL, кодирующего большую субъединицу рибулозы-1,5-бифосфат карбоксилазы/оксигеназы (Асc. N Z95552, поз.160-720);

- праймеры для амплификации фрагмента гена лектина LE1 (Асc. N К00821М30884, поз.1080-1720);

- праймеры для амплификации фрагмента гена IVR1, кодирующего бета-фруктозидазу (Асc. N U16123, поз.300-1090);

- праймеры для амплификации фрагмента 35S-промотора вируса мозаики цветной капусты (Асc. N FM 177585, поз.3560-3870);

- праймеры для амплификации фрагмента 35S-терминатора вируса мозаики цветной капусты (Асc. N FM177585, поз.1260-1590);

- праймеры для амплификации фрагмента 35S-промотора каулимовируса мозаики норичника (FMV, Асc. N Х06166, поз.6260-6630);

- праймеры для амплификации фрагмента терминатора гена белка теплового шока пшеницы (Асc. N Х58279,поз.10-210);

- праймеры для амплификации фрагмента маркерного гена BAR, определяющего устойчивость к фосфинотрицину (Асc. N AY310901, поз.380-920);

- праймеры для амплификации фрагмента терминатора nos из агробактерии Agrobacterium tumefaciens: (Асc. N FM177585, поз.10-370).

4.40 Раствор водный праймеров "ПР-2" для амплификации соответствующих участков генома, включающий следующие пары праймеров [20]:

- праймеры для амплификации фрагмента гена фосфорилазы УДФ-глюкозы (UDP-GP) (Асc. N D00667, поз.50-310);

- праймеры для амплификации фрагмента гена фосфат-синтазы риса (SPS) (Асc. N U33175, поз.5910-6250);

- праймеры для амплификации фрагмента маркерного гена nptll из транспозона Тn5 бактериального происхождения (Асc. N EU886197, поз.9792-10145);

- праймеры для амплификации фрагмента терминатора ocs из агробактерии Agrobacterium tumefaciens (Асc. N AJ311872, поз.5050-5240);

- праймеры для амплификации фрагмента терминатора гена RBCS гороха (Асc. N FM177582.1, поз.5782-5920);

- праймеры для амплификации фрагмента промотора гена актина риса АСТ1 (Асc. N S44221, поз.12-380);

- праймеры для амплификации фрагмента маркерного гена gus из бактерии Escherichia coli (Асc. N EU503042, поз.2770-3140).

4.41 Биологический микрочип с иммобилизованными олигонуклеотидами, назначение которых приведено в таблице 1 (название олигонуклеотида соответствует изображенному на рисунке 1) [21]:


Таблица 1 - Обозначение и назначение олигонуклеотидных зондов, иммобилизованных на биологическом микрочипе

Наименование олигонуклеотида

Детектируемая мишень

Назначение олигонуклеотида

pIDNA (rbcL)

ген RBCL

Зонд для идентификации ДНК растительного происхождения в анализируемом материале

GM/ST1(RBCL)

ген RBCL

Видоспецифичный зонд для идентификации ДНК сои и/или картофеля

ZM1(RBCL)

ген RBCL

Видоспецифичный зонд для идентификации ДНК кукурузы

OS1 (RBCL)

ген RBCL

Видоспецифичный зонд для идентификации ДНК риса

ST1(RBCL)

ген RBCL

Видоспецифичный зонд для идентификации ДНК картофеля

GM2(RBCL)

ген RBCL

Видоспецифичный зонд для идентификации ДНК сои

ZM/OS2(RBCL)

ген RBCL

Видоспецифичный зонд для идентификации ДНК кукурузы и/или риса

ST2(RBCL)

ген RBCL

Видоспецифичный зонд для идентификации ДНК картофеля

Le1(Gm)

ген лектина (LE1)

Специфичный зонд для идентификации ДНК сои

Zein(Zm)

ген IVR1

Специфичный зонд для идентификации ДНК кукурузы

UDP-GP (St)

ген фосфорилазы УДФ-глюкозы

Специфичный зонд для идентификации ДНК картофеля

SPS (Os)

ген фосфат-синтазы риса

Специфичный зонд для идентификации ДНК риса

nptll

ген npt

Специфичный зонд для идентификации маркерного гена nptll из транспозона Тn5

35S_p CAMV

промотор 35S

Специфичный зонд для идентификации 35S промотора вируса мозаики цветной капусты

35S_p FMV

промотор FMV

Специфичный зонд для идентификации 35S FMV промотора каулимовируса мозаики норичника

Act1_p

ген актина АСТ1

Специфичный зонд для идентификации промотора гена актина риса

Gus

ген gus

Специфичный зонд для идентификации маркерного гена gus

nos_t

терминатор nos

Специфичный зонд для идентификации терминатора nos из агробактерии Agrobacterium tumefaciens

35S_t CAMV

терминатор 35S

Специфичный зонд для идентификации 35S терминатора вируса мозаики цветной капусты

rbcSt

Терминатор гена RBCS

Специфичный зонд для идентификации терминатора гена RBCS гороха

Ocs_t

Терминатор Ocs

Специфичный зонд для идентификации терминатора ocs из агробактерии Agrobacterium tumefaciens

Bar

ген BAR

Специфичный зонд для идентификации маркерного гена BAR



Рисунок 1 - Схема биологического микрочипа для идентификации генетически модифицированных источников растительного происхождения

Обозначение ячеек приведено в соответствии с назначением иммобилизованного в ней зонда, указанного в таблице 1.

Биологический микрочип представляет собой пластиковую подложку, выполненную в формате предметного стекла по ГОСТ 9284, на поверхности которой в определенном порядке расположена 31 ячейка полиакриламидного геля в форме полусферы диаметром 100 мкм (обозначены кружками на рисунке 1). 22 из них содержат индивидуальный ковалентно иммобилизованный олигонуклеотид (перечень и назначение олигонуклеотидов приведены в таблице 1). Пять ячеек с индексом "0" не содержат перечисленных индивидуальных ковалентно иммобилизованных олигонуклеотидов и выполняют роль отрицательного контроля гибридизации. Четыре ячейки с индексом "М", содержат ковалентно связанный флуоресцентный краситель и предназначены для автоматического вычисления интенсивности флуоресценции ячеек биологического микрочипа после гибридизации. Поверхность биологического микрочипа должна быть закрыта специальной составной крышкой с отверстиями, которая вместе с подложкой образует гибридизационную камеру, предназначенную для проведения реакции гибридизации анализируемых ПЦР-продуктов с иммобилизованными на биологическом микрочипе олигонуклеотидами, и исключающую возможность испарения реакционной смеси в процессе гибридизации. Диагностическая специфичность при идентификации растительной ДНК сои, картофеля, кукурузы, риса составляет не менее 95%.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, а также оборудования и реактивов с техническими характеристиками не хуже указанных выше".

Пункт 6.1.2. Заменить слова: "186,12 г/дм" на "74,4 г/дм", "18,61 г" на "7,44 г", "гидроокиси натрия" на "".

Пункты 6.1.4-6.1.9 изложить в новой редакции:

"6.1.4 Приготовление раствора Трис- массовой концентрации 242,2 г/дм

В колбу вместимостью 100 см помещают 24,22 г трис(оксиметил)аминометана по 4.25 [10] и растворяют приблизительно в 80 см особо чистой стерильной воды. Концентрированной соляной кислотой по ГОСТ 3118 доводят рН раствора до 7,5 ед. рН, а объем - до 100 см особо чистой стерильной водой.

Срок хранения при комнатной температуре - не более 6 мес.

Доступ к полной версии документа ограничен
Полный текст этого документа доступен на портале с 20 до 24 часов по московскому времени 7 дней в неделю.
Также этот документ или информация о нем всегда доступны в профессиональных справочных системах «Техэксперт» и «Кодекс».
Нужен полный текст и статус документов ГОСТ, СНИП, СП?
Попробуйте «Техэксперт: Лаборатория. Инспекция. Сертификация» бесплатно
Реклама. Рекламодатель: Акционерное общество "Информационная компания "Кодекс". 2VtzqvQZoVs