ГОСТ 7702.2.7-2013 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы выявления бактерий рода Proteus (Переиздание)

     8 Проведение исследований

8.1 Методы выявления бактерий рода Proteus

8.1.1 Выявление Н-форм бактерий рода Proteus

С помощью стерильной пипетки 0,5 см исходного разведения анализируемой пробы продукта или другого эквивалентного разведения вносят в конденсационную воду пробирок со свежескошенным питательным агаром (см. 7.3.2, 7.3.3), не касаясь поверхности среды. Пробирки с посевами, вертикально поставленные в штатив, инкубируют при температуре (37±1)°С. Предварительный учет результатов проводят через (24±2) ч, окончательный - через (48±2) ч инкубирования. После инкубирования пробирки с посевами просматривают.

Н-формы бактерий рода Proteus из конденсационной жидкости растут вверх по поверхности среды с образованием ползучего вуалеобразного налета с голубым оттенком.

8.1.2 Выявление О-форм бактерий рода Proteus

С помощью стерильной пипетки по 0,2 см исходного разведения анализируемой пробы продукта или другого эквивалентного разведения наносят на поверхность среды Плоскирева (см. 7.3.4) в чашках Петри и растирают по поверхности среды шпателем - изогнутой стеклянной палочкой. Чашку закрывают крышкой и оставляют на 15 мин при комнатной температуре для адсорбирования посевного материала. Инкубируют чашки с посевами дном вверх при температуре (37±1)°С. Предварительный учет результатов проводят через (24±2) ч, окончательный - через (48±2) ч инкубирования. После инкубирования чашки Петри с посевами просматривают и отмечают на обратной стороне дна чашки Петри типичные и (или) предполагаемые колонии.

О-формы бактерий рода Proteus растут в виде прозрачных колоний с характерным запахом, слегка подщелачивающих среду, с окрашиванием ее в желтый цвет.

8.2 Подтверждение принадлежности выявленных микроорганизмов к бактериям рода Proteus

Выявленные микроорганизмы с характерными культуральными свойствами (см. 8.1.1, 8.1.2) исследуют на подтверждение принадлежности к бактериям рода Proteus.

Подтверждение принадлежности выросших микроорганизмов к бактериям рода Proteus определяют по отношению к окраске по Граму, способности ферментировать глюкозу, образовывать сероводород, дезаминировать фенилаланин.

8.2.1 Окраска по Граму и микроскопирование

Из выявленных культур готовят мазки, окрашивают по Граму - по ГОСТ ISO 7218 и микроскопируют.

При микроскопировании бактерий рода Proteus - полиморфные грамотрицательные палочки, подвижные (перетрихи), не образующие спор и капсул.

8.2.2 Приготовление чистой культуры

Пересевы производят для получения чистых культур и использования их для биохимических исследований.

Из каждой отобранной типичной или предполагаемой колонии (см. 8.1.1, 8.1.2) (не менее пяти колоний) проводят пересев на поверхность скошенного мясо-пептонного агара (см. 7.3.2) или в мясо-пептонный бульон (см. 7.3.6). Посевы инкубируют при температуре (37±1)°С в течение (24±2) ч. Готовят мазки, окрашивают их по Граму, микроскопируют (см. 8.2.1). По мазкам, окрашенным по Граму, проверяют чистоту выделенной культуры.

8.2.3 Определение ферментации глюкозы и образования сероводорода

Для определения ферментации глюкозы и образования сероводорода чистую культуру высевают в пробирки уколом в столбик и штрихом по поверхности скошенного трехсахарного агара (см. 7.3.7, 7.3.8) или питательного агара с глюкозой (см. 7.3.9).

Посевы инкубируют при температуре (37±1)°С. Предварительный учет результатов проводят через (24±2) ч, окончательный - через (48±2) ч.

Бактерии рода Proteus ферментируют глюкозу с образованием кислоты и газа, при этом скошенная поверхность среды окрашивается в ярко-красный цвет, а в столбике появляется газ.

Бактерии рода Proteus образуют сероводород, при этом столбик среды чернеет.

8.2.4 Определение дезаминирования фенилаланина

Для определения дезаминирования фенилаланина суточную чистую культуру высевают в пробирку со скошенной средой для расщепления фенилаланина (см. 7.3.10). Посев делают штрихами на поверхность скошенной среды. Инкубируют при температуре (37±1)°С в течение (48±2) ч. Затем на поверхность агара с выросшей культурой наносят три-пять капель раствора железа треххлорного 6-водного с массовой долей 8,0% (см. 7.3.11).

Появление интенсивной зеленой окраски среды свидетельствует о дезаминировании фенилаланина - положительная реакция. При отрицательной реакции цвет среды не меняется.

Бактерии рода Proteus дезаминируют фенилаланин.