ГОСТ ISO 29981-2013

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ МОЛОЧНЫЕ

Подсчет презумптивных бифидобактерий. Метод определения количества колоний при температуре 37°С

Milk products. Enumeration of presumptive bifidobacteria. Colony count technique at 37°С

МКС 67.100.01

Дата введения 2015-07-01

     

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" на основе аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 5 ноября 2013 г. N 61-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 1708-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 29981-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 29981:2010* Milk products. Enumeration of presumptive bifidobacteria - Colony count technique at 37°C (Продукты молочные. Подсчет презумптивных бифидобактерий. Метод определения количества колоний при температуре 37°C).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Международный стандарт разработан техническим комитетом по стандартизации ИСО/ТК 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO).

Перевод с английского языка (en).

Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в национальных (государственных) органах по стандартизации указанных выше государств.

Степень соответствия - идентичная IDT

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод селективного подсчета презумптивных бифидобактерий в молочных продуктах, используя технику подсчета колоний при температуре 37°С в анаэробных условиях.

Данный метод применим к молочным продуктам, к ферментированным и неферментированным продуктам, сухому молоку, детским молочным смесям и закваскам, к тем продуктам, где рассматриваемые микроорганизмы жизнеспособны и присутствуют наряду с другими молочнокислыми бактериями. (Критерии качества молочных продуктов [6].)

Бифидобактерии, используемые в молочных продуктах, относятся к следующим видам ([7], [8], [16]):

a) Bifidobacterium adolescentis;

b) В. animalis subsp. animalis;

c) В. animalis subsp. lactis;

d) B. bifidum;

e) B. breve;

f) B. infantis;

g) B. longum.

     2 Нормативные ссылки

Приведенные ниже ссылочные нормативные документы* являются обязательными для применения настоящего стандарта. Датированные ссылки предполагают возможность использования только указанного издания документа. В случае недатированных ссылок используют последнее издание документа, включая любые изменения.

_______________

* Таблицу соответствия национальных стандартов международным см. по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.     

ISO 6887-1 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений)

ISO 6887-5 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 5. Специальные правила для приготовления молока и молочных продуктов)

ISO 7218 Microbiology of food and animal feeding stuffs - General requirements and guidance for microbiological examinations (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям)

ISO 7889|IDF 117 Yogurt. Enumeration of characteristic microorganisms. Colony-count technique at 37°C (Йогурт. Подсчет характеристических микроорганизмов. Метод определения количества колоний при 37°C)

ISO/TS 11133-1 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Guidelines on preparation and production of culture media - Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству питательных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления питательных сред в лаборатории)

ISO 14461-1|IDF 169-1 Milk and milk products - Quality control in microbiological laboratories - Part 1: Analyst performance assessment for colony counts (Молоко и молочные продукты. Контроль качества в микробиологических лабораториях. Часть 1. Оценка работы аналитика при подсчете числа колоний)

ISO 14461-2|IDF 169-2 Milk and milk products - Quality control in microbiological laboratories - Part 2: Determination of the reliability of colony counts of parallel plates and subsequent dilution steps (Молоко и молочные продукты. Контроль качества в микробиологических лабораториях. Часть 2. Определение достоверности подсчета числа колоний при посеве на параллельных чашках Петри с последующими стадиями разведений)

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1 бифидобактерии (bifidobacterium): анаэробные микроорганизмы, которые образуют колонии двояковыпуклой или круглой формы белесого цвета, частично в форме звездочки или трехлопастной формы диаметром от 1 мм до 4 мм на питательной среде, приготовленной на основе олигосахаридов, обработанных трансгалактозой с добавлением литиевой соли мупироцина (TOS-MUP), в условиях, установленных в настоящем стандарте.

     4 Сущность метода

4.1 Антибиотик, литиевая соль мупироцина (MUP), подавляет рост большинства молочнокислых бактерий, обычно используемых в ферментированных и неферментированных молочных продуктах.

Благодаря доказанной избирательности антибиотика MUP при добавлении его в питательную среду обычно не происходит роста типичных йогуртовых бактерий (Streptococcus thermophilus, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus), мезофильных культур (например, Lactococcus lactis), Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei и Lactobacillus rhamnosus на установленной среде.

Это свойство протестировано на репрезентативном количестве контрольных штаммов и выделенных культур.

Среда TOS-на агаре способствует росту бифидобактерий, используемых в молочных продуктах [17].

Примечания

1 Фазово-контрастная микроскопия с применением 100-кратного увеличения и масляной иммерсии показывает палочки очень разнообразных форм, обычно искривленные и с утолщениями, зачастую ветвистые, растущие по отдельности, парами, группами, располагающиеся клином (V-образная форма расположения колоний), цепочками, столбиками из параллельно расположенных клеток или розетками, порою демонстрирующими форму набухшей сферы (кокка).

2 Бифидобактерии не являются кислотоустойчивыми, спорообразующими микроорганизмами, они - граммположительные, немобильные и каталаза-отрицательные хемоорганотрофы, которые выделяют уксусную кислоту и молочную кислоту. Глюкоза разлагается полностью и характерным образом посредством фруктоза-6-фосфатного шунта, в котором фруктоза-6-фосфат-фосфокетолаза (F6PPK, ЕС 4.1.2.22) расщепляет фруктоза-6-фосфат на ацетилфосфат и эритроза-4-фосфат.

3 Температура оптимального роста находится в интервале от 37°C до 41°C. Дополнительная информация приведена в [9].

4.2 Посев десятичных разведений однородной пробы в TOS-агар с добавлением MUP, с использованием чашечного метода, с последующей анаэробной инкубацией при температуре 37°C в течение 72 ч.

4.3 Подсчет колоний

Примечание - Выбранные культуры из чашек можно подтвердить соответствующими тестами по [14], [15].

4.4 Количество бифидобактерий в грамме пробы рассчитывают по числу колоний, полученных в чашках с разведениями такой концентрации, чтобы получить значимый результат.

     5 Питательные среды, разбавители и реактивы

Используют реактивы только признанной аналитической чистоты, если нет иных указаний, и дистиллированную или деминерализованную воду, или воду равноценной чистоты.

5.1 Основные материалы

Основные материалы - по ISO 6887-5 и ISO/TS 11133-1.

5.2 Разбавители

Приготовление разбавителей - по ISO 6887-5.

Чтобы обеспечить сопоставимость результатов в установленных колониеобразующих единицах (КОЕ), соблюдают следующие правила.

Используют раствор Рингера (Ringer's) с 1/4 концентрации или любой другой подходящий разбавитель, установленный в ISO 6887-5 и подтвержденный как эквивалентный.

Стерилизуют и используют подходящий стерильный дозатор.

Доводят разбавитель до температуры (22±2)°С. Переносят разбавитель стеканием каплями, не захватывая воздух.

Неопределенность измерения используемых объемов должна соответствовать требованиям ISO 6887-1.

5.3 Питательная среда (среда TOS-MUP)

Используют свежеприготовленную среду на основе обработанных трансгалактозой олигосахаридов с добавлением литиевой соли мупироцина (TOS-MUP), защищенную от прямого солнечного света.

5.3.1 Основная среда (среда TOS-пропионат на агаре [10])

5.3.1.1 Состав:

пептон триптиказа - 10,0 г;

дрожжевой экстракт - 1,0 г;

- 3,0 г;

- 4,8 г;

- 3,0 г;

- 0,2 г;