ГОСТ 32277-2013 Средства воспроизводства. Сперма. Методы испытаний физических свойств и биологического, биохимического, морфологического анализов

     7 Методы биохимического анализа

7.1 Определение содержания кетоновых тел
     

    7.1.1 Сущность метода

Сущность качественного метода анализа содержания кетоновых тел в неразбавленной свежеполученной сперме заключается в положительной реакции нитропруссидной пробы в присутствии кетоновых тел и визуальной оценке интенсивности окрашивания.

7.1.2 Оборудование и реактивы

Для проведения анализа применяют:

- пробирки стеклянные типа П 2Т вместимостью 10 см по ГОСТ 25336;

- пипетки пастеровские;

- натрий нитропруссид, насыщенный раствор;

- сульфосалициловую кислоту по ГОСТ 4478, 10%-ный водный раствор;

- натрия гидрооксид (натрий едкий) по ГОСТ 4328, 40%-ный раствор;

- воду дистиллированную по ГОСТ 6709.

Допускается использование других реактивов и посуды по качеству не ниже вышеуказанных.

7.1.3 Подготовка к проведению анализа

7.1.3.1 Приготовление 10%-ного раствора сульфосалициловой кислоты

В стеклянную пробирку вместимостью 10 см по ГОСТ 25336 вносят 1,00 г порошка сульфосалициловой кислоты и растворяют в 9,0 см дистиллированной воды.

Раствор применяют свежеприготовленным.

7.1.3.2 Приготовление 40%-ного раствора гидроокисида натрия

В стеклянной пробирке вместимостью 10 см по ГОСТ 25336 растворяют 4,00 г гидрооксида натрия в 6,0 см дистиллированной воды.

Раствор применяют свежеприготовленным.

7.1.4 Проведение анализа

В пробирку вместимостью 10 см вносят 0,4 см неразбавленной свежеполученной спермы, прибавляют три капли 10%-ного раствора сульфосалициловой кислоты. Пробирку встряхивают, затем добавляют одну каплю насыщенного раствора нитропруссида натрия. Пробирку снова тщательно встряхивают после чего осторожно пастеровской пипеткой с длинным концом подслаивают на дно пробирки 0,2-0,3 см 40%-ного раствора гидрооксида натрия.

При наличии кетоновых тел на границе соприкосновения раствора гидрооксида натрия со спермой в течение 30 с образуется окрашенное кольцо.

7.1.5 Обработка результатов

Массовую долю кетоновых тел в процентах определяют по интенсивности окрашивания кольца:

- слабо-розовое и светло-малиновое окрашивание - 0,5-2,9·10%;

- окрашивание в малиновый цвет - 3,0-3,4·10%;

- окрашивание в вишневый цвет - 3,5-4,9·10%;

- окрашивание в темно-вишневый цвет - более 5·10% кетоновых тел.