ГОСТ 32031-2012 Продукты пищевые. Методы выявления бактерий Listeria monocytogenes (с Поправкой)

     10 Проведение испытания

Схема проведения испытания приведена в приложении А.

10.1 Проба для анализа и исходная суспензия

Анализируемую пробу X (г или см) вносят в селективную среду первичного обогащения, исходя из соотношения продукта и среды 1:9.

10.2 Первичное обогащение

Исходную суспензию (см. 10.1) культивируют при температуре (30±1) °С в течение (24±3) ч.

10.3 Вторичное обогащение

10.3.1 Посевной материал, полученный по 10.2 в объеме 0,1 см, пересевают в пробирку, содержащую 10 см среды обогащения (см. 6.3).

10.3.2 Посевы (см. 10.3.1) культивируют в течение (48±2) ч при температуре (37±1)°С.

10.4 Пересев на плотные селективные среды

10.4.1 Из пробирок с посевами (см. 10.2) после культивирования с помощью петли или шпателя (см. 7.5) проводят пересев на поверхность первой плотной селективной среды (см. 6.4.1) так, чтобы получить хорошо изолированные колонии.

Аналогичным образом проводят пересев и на вторую плотную селективную среду (см. 6.4.2 или 6.4.3, или 6.4.4)* .

________________     

* Письмом Росстандарта от 09.08.2021 N 2319-ОГ/03 разъясняется, что "подпункт 10.4.1 ГОСТ 32031-2012 должен быть изложен в следующей редакции: "10.4.1 Из пробирок с посевами (см. 10.2) после культивирования с помощью петли или шпателя (см. 7.5) проводят пересев на поверхность первой плотной селективной среды (см. 6.4.1 или 6.4.2) так, чтобы получить хорошо изолированные колонии." - Примечание изготовителя базы данных.

10.4.2 С посевным материалом, выращенным на среде обогащения (см. 10.3.2), повторяют процедуру приведенную в 10.4.1.

10.4.3 Чашки с посевами на первой плотной селективной среде (см. 10.4.1 и 10.4.2) культивируют вверх дном в термостате при температуре (37±1) °С в течение 24-48 ч.

Чашки с посевами на второй плотной селективной среде инкубируют согласно инструкции производителя питательных сред.

10.4.4 Через (24±3) ч или (48±2) ч [если после (24±3) ч отмечен слабый рост культуры или его отсутствие] культивирования на первой и второй плотной селективной средах (10.4) учитывают наличие колоний с ростом характерных для бактерий рода Listeria и Listeria monocytogenes.

10.4.4.1 На первой селективной плотной среде бактерии вида L. monocytogenes и L. ivanovii растут в виде сине-зеленых колоний, окруженные непрозрачным ореолом (типичные колонии). Другие виды бактерий рода Listeria также растут в виде сине-зеленых колоний, без ореола.

Примечания

1 Некоторые штаммы L. monocytogenes могут давать очень слабый ореол вокруг колонии или вовсе не иметь его. Это характерно для "поврежденных" клеток L. monocytogenes (например, вследствие воздействия кислот).

2 Некоторые штаммы L. monocytogenes характеризуются пониженной фосфатидилинозитолфосфолипазной С активностью. Для выявления таких штаммов требуется более продолжительное культивирование.

10.4.4.2 Посевы на второй плотной селективной среде просматривают на наличие колоний с ростом характерным для бактерий рода Listeria.

На Палкам агаре все виды бактерий рода Listeria формируют мелкие серовато-зеленые или оливково-зеленые колонии с черным ореолом, иногда с черным центром.

На Оксфорд агаре все виды бактерий рода Listeria формируют мелкие сероватые колонии, окруженные черным ореолом.

На ПАЛ все виды бактерий рода Listeria формируют мелкие серовато-желтые колонии с черным ореолом.

10.4.4.3 При отсутствии роста характерных колоний бактерий рода Listeria и Listeria monocytogenes на первой и второй плотных селективных средах исследования прекращают и делают заключение об отсутствии в исследуемой пробе продукта бактерий Listeria monocytogenes.

10.5 Идентификация выделенных культур до рода Listeria

10.5.1 Выбор колоний для подтверждения