ГОСТ Р 55576-2013

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КОРМА И КОРМОВЫЕ ДОБАВКИ

Метод качественного определения регуляторных последовательностей в геноме сои и кукурузы

Feed and feed additives. Method for determining quality of regulatory sequences in the genomes of soybean and corn

ОКС 65.120

Дата введения 2015-07-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ")

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 454 "Охрана жизни и здоровья животных и ветеринарно-санитарная безопасность продуктов животного происхождения и кормов"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 6 сентября 2013 г. N 851-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ИЗДАНИЕ (февраль 2020 г.) с Изменением N 1 (ИУС 1-2017)

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ "О стандартизации в Российской Федерации". Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на корма, кормовые добавки и сырье для их производства и устанавливает скрининговый метод качественного определения регуляторных последовательностей в геноме генетически модифицированной сои (далее - ГМ сои) и генетически модифицированной кукурузы (далее - ГМ кукурузы) методом полимеразной цепной реакции (далее - ПЦР) с гибридизационно-флюоресцентной детекцией в режиме реального времени {Real Time PCR).

Раздел 1 (Измененная редакция, Изм. N 1)

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 5962-2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТ ISO 6497-2011 Корма для животных. Отбор проб

ГОСТ ISO 7218 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

ГОСТ ISO/IEC 17025-2009* Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

________________

* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ ISO/IEC 17025-2019. - Примечание изготовителя базы данных.

ГОСТ 31719-2012 Продукты пищевые и корма. Экспресс-метод определения сырьевого состава (молекулярный)

ГОСТ Р 51848-2001 Продукция комбикормовая. Термины и определения

ГОСТ Р 52173-2003 Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

     3 Термины и определения

3.1 В настоящем стандарте приведены термины по ГОСТ Р 51848, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1.1

3.1.2 генетически модифицированные источники; ГМИ: Корма, кормовые добавки и сырье для их производства, полученные из генетически модифицированных организмов, используемые в натуральном или переработанном виде в пищу животным.

3.1.3

3.1.4

3.1.5

3.1.6 промотор: Последовательность нуклеотидов в молекуле ДНК, ответственная за начало транскрипции.

3.1.7 терминатор: Последовательность нуклеотидов в молекуле ДНК, ответственная за прекращение транскрипции.

3.1.8 рекомбинантная ДНК: Молекула ДНК, полученная в результате объединения in vitro чужеродных (в природе никогда вместе не существующих) фрагментов ДНК с использованием методов генной инженерии.

3.1.9 праймеры: Искусственно синтезируемые короткие последовательности нуклеотидов, комплементарные определенному участку искомой ДНК, используемые в полимеразной цепной реакции.

3.1.10 генетическая конструкция: Генно-инженерная последовательность ДНК, вносимая в геном растения, представляющая один или несколько генов, маркерные гены и регуляторные последовательности (промотор и терминатор).

3.2 В настоящем стандарте использованы следующие сокращения:

НК - нуклеиновые кислоты;

ОКО - отрицательный контрольный образец;

ОК - отрицательный контроль.

     4 Условия выполнения испытаний и требования безопасности

4.1 Условия выполнения испытаний

4.1.1 Общие требования к помещениям - по ГОСТ ISO 7218, [1] и в соответствии с приложением А.

4.1.2 Требования к персоналу - по ГОСТ ISO 7218, ГОСТ ИСО/МЭК 17025.

4.1.2.1 Персонал должен быть обучен работе методом ПЦР и ознакомлен с правилами проведения работ в ПЦР-лабораториях.

4.1.2.2 Персонал должен быть обеспечен лабораторной одеждой для каждой зоны ПЦР-лаборатории. Первичную обработку и подготовку проб проводят в специально предназначенной для этого лабораторной одежде, используя новые перчатки для каждой пробы (исключают использование перчаток, обсыпанных пудрой, в том числе кукурузным крахмалом).

4.2 Требования безопасности

4.2.1 При выполнении всех работ необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007.

4.2.2 Помещение должно быть оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией по ГОСТ 12.4.021. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных ГОСТ 12.1.005.

4.2.3 При работе с электроустановками требования к безопасности должны соответствовать ГОСТ Р 12.1.019.

4.2.4 Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и быть оснащено средствами пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

     5 Оборудование, материалы, реагенты

5.1 Требования к оборудованию - по ГОСТ ИСО/МЭК 17025.

5.2 При проведении испытаний применяют оборудование и материалы по ГОСТ 31719, а также следующие реагенты:

- комплект реагентов для выделения ДНК:

_______________

Данный комплект реагентов является рекомендуемым и приведен для удобства пользователей настоящего стандарта.

- буфер для лизирующего реагента, содержащий гуанидин хлорид, 1мМ Трис-HCI, 12мМ ЭДТА;

- лизирующий реагент: протеиназа К;

- раствор для отмывки 1: гуанидин тиоционат, 1мМ Трис-HCI, 12мМ ЭДТА;

- раствор для отмывки 2: 50%-ный этиловый спирт;

- сорбент универсальный: диоксид кремния с примесями оксидов алюминия, кальция, железа, натрия и калия, HCI;

- буфер для элюции ДНК: ТЕ-буфер с рН 8,0 ед.рН;

- ПЦР-комплект для выявления ДНК генетически модифицированной сои:

- ПЦР-смесь-1: смесь специфичных праймеров и флуоресцентных зондов согласно таблице, 0,4-0,6 мМ дНТФ, кратность смеси 2,5х;

- ПЦР-буфер: 0,3М Трис-HCI (рН 8,3 ед.рН), 30-180 мМ , 10-25 мМ , глицерин;

- полимераза (TaqF): полимераза (TaqF) химически модифицированная для обеспечения горячего старта;

- положительный контрольный образец (ПКО ГМ соя), состоящий из участков последовательности регуляторных конструкций и содержащий места посадки праймеров и флуоресцентных зондов ПЦР-смеси-1. Положительный контроль ПЦР должен давать положительный сигнал по всем используемым каналам флуоресцентной детекции;