МУ 2.3.2.2789-10 Методические указания по санитарно-эпидемиологической оценке безопасности и функционального потенциала пробиотических микроорганизмов, используемых для производства пищевых продуктов

5.3.1. Методика молекулярно-генетического анализа таксономической принадлежности бифидобактерий

Принцип метода. Молекулярно-генетическая идентификация штаммов молочнокислых бактерий базируется на определении последовательностей информационного гена 16S рРНК и фрагментов операционных генов, кодирующих ферменты у бифидобактерий. Поскольку филогения по 16S рРНК в значительной степени соотносится с эволюционной историей организмов, формируемые группы по последовательности гена 16S рРНК, как правило, подтверждаются данными анализов фенотипических свойств. Для более детальной штаммоспецифической идентификации используется подход двухлокусного секвенирования, в частности с использованием -субъединицы АТФазы, или гена трансальдолазы [4] в случае отсутствия ПРЦ- фрагментов с видоспецифическими праймерами.

5.3.1.1. Оборудование, материалы, лабораторная посуда, реактивы*

_______________

* Допускается использовать другие оборудование, материалы, лабораторную посуду, реактивы с аналогичными характеристиками, прошедшие регистрацию в РФ в установленном порядке.

A) аппаратура и инструментарий

Анаэростат для анаэробного выращивания микроорганизмов или система газогенераторная настольная;

Термостат суховоздушный;

Высокоскоростная микроцентрифуга;

Микротермостат "Термит";

Амплификатор типа "Терцик" или РТС-0150;

Камера для горизонтального электрофореза "SE-2";

Источник питания;

Трансиллюминатор ТСР-20 МС.

Б) питательные среды

Бульон и агар МРС с 0,5% цистеина

     B) реактивы и материалы

     Трис HCl

ЭДТА

NaCl

Тритон-Х100

саркозил

додецилсульфат натрия (SDS)

фенол

оксихинолин

хлороформ

изоамиловый спирт

изопропанол

этиловый спирт