МУ 2.3.2.2789-10 Методические указания по санитарно-эпидемиологической оценке безопасности и функционального потенциала пробиотических микроорганизмов, используемых для производства пищевых продуктов

5.2.2. Методика проведения биохимической идентификации штамма

Из чистой 18-24-часовой культуры готовят суспензию в стерильной дистиллированной воде. Суспензию тщательно гомогенизируют. Суспензию доводят до определенной мутности по шкале McFarland в зависимости от вида исследуемого штамма. Неправильно приготовленная суспензия (слишком густая или очень жидкая) может привести к получению ложных результатов.

Параллельно суспензию штамма или контрольного штамма высевают на питательные среды для проверки чистоты культуры, ее ростовых свойств и/или постановки дополнительных тестов.

Планшет для идентификации извлекают из упаковки и на прилагаемом к планшету бланке регистрируют номер испытуемого штамма и контрольного штамма.

Суспензию бактерий тщательно встряхивают и в каждую лунку инокулируют определенный объем суспензии (0,1-0,2 см) в зависимости от требований фирмы-изготовителя и вида исследуемого штамма.

После инокуляции в ряд лунок может добавляться стерильное вазелиновое масло, полностью закрывающее внесенную суспензию клеток для создания анаэробных условий.

После инокуляции планшет накрывают крышкой и инкубируют 5-24 ч при оптимальной температуре для исследуемого вида (например, 42 °С - лактобациллы).

По окончании инкубации результаты учитывают визуально, отмечая цвет каждой лунки, и заносят в прилагаемые бланки.

В некоторые лунки (например, для ферментация индола) могут быть добавлены реактивы. Учет результатов на бета-галактозидазу проводят дважды: через 3-5 и 18-24 ч.

Идентификацию проводят с помощью таблиц, книг-каталогов кодов, компьютерного обеспечения соответствующих фирм-изготовителей, в заключении, учитывая данные, полученные по п.5.1.1, указывают род и вид штамма.

Тестирование биохимических свойств используют для проверки стабильности фенотипических свойств штамма. Для этого культуру подвергают пассированию на жидких и плотных питательных средах и повторному через 3-5 пассажей тестированию биохимических свойств. Трехкратное совпадение всех исследованных биохимических реакций, выявленное при пассировании культур (не менее 10 пассажей), свидетельствует о стабильности фенотипических признаков. Вариабельность результатов по 1-2 реакциям свидетельствует о необходимости постановки дополнительных тестов на стабильность фено- и генотипических признаков штамма. Вариабельность результатов по большему числу реакций является свидетельством нестабильности фенотипических признаков и непригодности штамма для использования в пищевой промышленности.