ГОСТ 32010-2013 Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Shigella

8.1 Проба для анализа и исходное разведение

8.1.1 Общие положения

Для приготовления исходного разведения в основном используют как разбавитель неселективную среду, указанную в 5.2.1 и 4.2 (забуференную пептонную воду).

Соотношение массы (объема) анализируемого продукта и объема неселективной среды должно составлять 1:10.

Допускается объединение проб для анализа в том случае, если анализируется больше одной пробы от продукта и когда объединенная проба не влияет на результат испытания. (Например, необходимо исследовать 10 навесок по 25 г. Объединяют 10 навесок (общая масса составит 250 г) и прибавляют 2,25 дм неселективной среды).

8.1.2 Специфика приготовления исходного разведения для некоторых продуктов

Указанную специфику приготовления применяют только для выявления бактерий рода Shigella.

8.1.2.1 Какао и какаосодержащие продукты (какао больше чем 20%)

Добавляют в забуференную пептонную воду (по 5.2.1) 50 г казеина (не используют кислый казеин) или 100 г обезжиренного молочного порошка. Казеин и молочный порошок добавляют при приготовлении забуференной пептонной воды до стерилизации.

8.1.2.2 Высококислотные пищевые продукты.

При неселективном обогащении должна быть гарантия того, что рН будет не менее 5,0.

рН высококислотных пищевых продуктов стабилизируют путем использования забуференной пептонной воды двойной концентрации.

Допускается при высеве жидких высококислотных пищевых продуктов, для предотвращения снижения рН сред на 0,5 и более, рН продукта перед посевом доводить до (7,0±0,2).

При высеве твердых высококислотных пищевых продуктов допускается перед посевом доводить рН продукта до (7,0±0,2).

Доведение рН продукта проводят с соблюдением правил асептики с помощью стерильных растворов гидроокиси натрия и соляной кислоты, приготовленных по ГОСТ 10444.1. Количество добавляемых растворов устанавливают опытным путем.

8.2 Неселективное обогащение

Посев в забуференную пептонную воду по 8.1.1 инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (18±2) ч.

8.3 Селективное обогащение

Культуры, полученные после инкубирования по 8.2, пересевают в среду для селективного обогащения. Для этого по 1 см культуральной жидкости пересевают в 10 см бульона для бактерий рода Shigella.

Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±2) ч.

Если от одного пищевого продукта проведен высев нескольких проб продукта (каждой пробы отдельно) для выявления бактерий рода Shigella, то допускается из каждой пробы по 8.2 проводить пересев в один флакон с бульоном для шигелл. При этом количество селективной среды во флаконе должно быть увеличено, по сравнению с 10 см, во столько раз, из скольких проб проводят пересев.

Свежие продукты, не содержащие сублетально поврежденных микроорганизмов, подвергнутых каким-либо воздействиям, например сушке, заморозке и т.д., допускается высевать непосредственно в селективную среду, минуя этап неселективного обогащения. Объем высеваемого продукта и среды должны быть в соотношении не менее 1:10.

8.4 Выделение чистой культуры

8.4.1 Культуры через 24 ч инкубирования на селективной среде пересевают так, чтобы получить изолированные колонии на ксилоза лизин дезоксихолатный агар (XLD агар) и на одну из агаризованных сред: гектоеновый энтероагар, сальмонелла-шигелла агар, висмут-сульфит агар, среду Плоскирева, среду Эндо, среду Левина или дезоксихолатный цитратный агар.

При отсутствии чашек большого размера по 6.14 используют для посева петлей две чашки нормального размера по 6.14 (одну за другой). Пересев проводят в соответствии с требованиями приложения В.

На ксилозализин дезоксихолатном агаре проводят учет ферментации лактозы, сахарозы, ксилозы, декарбоксилирование лизина, образование сероводорода.

Бактерии рода Shigella не ферментируют лактозу, сахарозу, ксилозу, не декарбоксилируют лизин и не образуют сероводород.