ГОСТ 31710-2012
(ISO 8870:2006)

Группа Н09

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МОЛОКО И ПРОДУКТЫ НА ОСНОВЕ МОЛОКА

Обнаружение термонуклеазы, образуемой коагулазоположительными стафилококками

Milk and milk-based products. Detection of themrmoneuclease produced by coagulase-positive staphylococci

МКС 67.100.01

Дата введения 2013-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН ОАО "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" совместно с ГУ "Ярославская государственная испытательная лаборатория молочного сырья и продукции" на основе аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 1 октября 2012 г. N 51)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. N 1770-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31710-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.

5 Настоящий стандарт модифицирован по отношению к международному стандарту ISO 8870:2006* Milk and mik-based products - Detection of themrmoneuclease produced by coagulase-positive staphylococci (Молоко и продукты на основе молока. Обнаружение термонуклеазы, образуемой коагулазоположительными стафилококками) путем изменения отдельных фраз (слов, значений показателей, ссылок), которые выделены в тексте курсивом**.

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей.

** В оригинале обозначения и номера стандартов и нормативных документов в "Предисловии" и разделе 6 приводятся обычным шрифтом, остальные по тексту документа выделены курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

Степень соответствия - модифицированная (MOD).

Стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 52832-2007

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты".

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты"

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает качественный метод определения термонуклеазы, образуемой коагулазоположительными стафилококками в молоке и продуктах на основе молока.

Наличие в молоке и продуктах на основе молока термонуклеазы может использоваться как индикатор достижения роста стафилококков опасного уровня и может отражать вероятное присутствие стафилококкового энтеротоксина.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ ISO 7218-11 Микробиология продуктов питания и кормовых продуктов. Общие правила микробиологических исследований

ГОСТ 9225-84 Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю "Национальные стандарты", составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1 термонуклеаза (thermonuclease): Фермент, образуемый коагулазоположительными стафилококками, гидролизирующий дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) при условиях, описанных в настоящем стандарте.

     4 Сущность метода

Метод основан на расщеплении ДНК термонуклеазой, при котором цвет агара изменяется с синего на розовый. Цветная реакция обусловлена метахроматическими свойствами толуидинового синего О.

     5 Подготовка к испытанию

5.1 Основные материалы

Для текущей лабораторной практики см. ГОСТ 9225.

Используют реактивы только аналитического качества, если не оговорено иначе, и только дистиллированную или деминерализованную воду, или воду аналогичной чистоты.

Если приготовленные среды и реактивы не используют немедленно, их хранят, если не оговорено иначе, в защищенном от света месте при температуре от 0 °С до 5 °С не более 1 мес в условиях, предотвращающих любые изменения в их составе.

5.2 Толуидиновый синий О-ДНК агар

5.2.1 Трис-буфер

5.2.1.1 Состав:

трис(гидроксиметил)аминометан (CHNO) - 6,06 г;

хлорид кальция (CaCI) - 0,11 г;

вода - 1000 см.

5.2.1.2 Приготовление

Растворяют трис(гидроксиметил)аминометан и хлорид кальция в 980 см воды. Доводят рН до 9,0 и воду до 1000 см.

5.2.2 Основа среды

5.2.2.1 Состав:

дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) - 0,3 г;

хлорид натрия (NaCI) - 10,0 г;

агар - 10,0 г;

трис-буфер (см. 5.2.1) - 1000 см.

5.2.2.2 Приготовление

Компоненты нагревают на водяной бане (см. 6.2) до полного растворения ДНК и агара (около 1,5 ч).

5.2.3 Раствор толуидинового синего О

5.2.3.1 Состав:

толуидиновый синий О (CHNSCI) - 0,31 г;

________________

Толуидиновый синий О (цветовой индекс: C.I. основной синий 17; C.I. No. 52040).

вода - 10 см.

5.2.3.2 Приготовление

Толуидиновый синий О растворяют в воде при слабом нагревании и фильтруют через марлю (см. 6.12).

5.2.4 Полная среда

5.2.4.1 Состав:

основа среды (см. 5.2.2) - 1000 см;

раствор толуидинового синего О (см. 5.2.3) - 3 см.

5.2.4.2 Приготовление

Основу среды охлаждают до (50±1) °С, добавляют профильтрованный раствор толуидинового синего О и перемешивают.

Полная среда может храниться маленькими порциями в закупоренных колбах или бутылях несколько месяцев в защищенном от света месте при температуре от 0 °С до 5 °С.

5.2.5 Приготовление чашек со средой

В чашки Петри (см. 6.8) вносят по 13 см свежей полной среды (см. 5.2.4) или хранившейся среды, предварительно расплавленной при (50±1) °С. Дают агару застыть.

Приготовленные среды могут храниться не более 2 мес (дном кверху и защищенными от высыхания) в защищенном от света месте при температуре от 0 °С до 5 °С.

5.3 Соляная кислота, (HCL)=2 моль/дм.

5.4 Гидроокись натрия, (NaOH)=2 моль/дм.

5.5 Трихлоруксусная кислота, (CClСООН)=3 моль/дм.

Растворяют 49,02 г трихлоруксусной кислоты в 100 см воды.