ГОСТ 31709-2012 (ISO 14674:2005) Молоко и сухое молоко. Определение содержания афлатоксина М(1). Очистка с помощью иммуноаффинной хроматографии и определение с помощью тонкослойной хроматографии

     5 Реактивы

При отсутствии специальных указаний используют реактивы только признанных аналитических марок.

Вода должна соответствовать требованиям ГОСТ 6709. Вода не должна содержать органические примеси.

5.1 Чистые растворители

5.1.1 Хлороформ по ГОСТ 20015.

5.1.2 Ацетонитрил.

5.1.3 Диэтиловый эфир по ГОСТ 22300.

5.1.4 Метанол по ГОСТ 6995.

5.1.5 Толуол по ГОСТ 5789.

5.1.6 Ацетон по ГОСТ 2603.

5.1.7 Изопропанол.

5.2 Смесь ацетонитрил/метанол, в объемном соотношении 3:2

Смесь приготовляют, добавляя 30 см ацетонитрила (см. 5.1.2) к 20 см метанола (см. 5.1.4), и перемешивают.

5.3 Смесь толуол/ацетонитрил, в объемном соотношении 9:1

Смесь приготовляют, добавляя 9 смтолуола (см. 5.1.5) к 1 см ацетонитрила (см. 5.1.2), и перемешивают. Этот раствор используют для повторного суспендирования стандартных растворов афлатоксина (см. 5.5) и выпаренного элюата перед проведением анализа методом тонкослойной хроматографии.

5.4 Растворители для проведения тонкослойной хроматографии

5.4.1 Раствор для однонаправленной тонкослойной хроматографии

Приготовляют 100 см раствора для однонаправленной тонкослойной хроматографии путем добавления 4 см метанола (см. 5.1.4) и 1 см воды к 95 см диэтилового эфира (см. 5.1.3) и тщательно перемешивают (объемное отношение 95:4:1).

5.4.2 Раствор для двунаправленной тонкослойной хроматографии

Приготовляют 100 см раствора для двунаправленной тонкослойной хроматографии путем добавления 10 см ацетона (см. 5.1.6) и 3 см изопропанола (см. 5.1.7) к 87 см хлороформа (см. 5.1.1) и тщательно перемешивают (объемное отношение 87:10:3).

5.5 Стандартный раствор афлатоксина

5.5.1 Основной стандартный раствор афлатоксина

Приготовляют основной стандартный раствор афлатоксина с номинальной концентрацией афлатоксина 10 мкг/см (см. 5.1.1) путем повторного суспендирования 10 мкг лиофилизированной пленки афлатоксина в 1 см хлороформа.

Согласно протоколу АОАС [1] концентрацию основного стандартного раствора афлатоксина определяют путем измерения его оптической плотности при длине волны максимального поглощения в диапазоне длин волн 200-400 нм относительно хлороформа (см. 5.1.1), применяемого в качестве образца сравнения.

Контролируют чистоту афлатоксина , регистрируя спектр в интервале 200-400 нм. Измеряют оптическую плотность () при длине волны максимума поглощения (), близкой к 365 нм. Вычисляют массовую концентрацию , мкг/см, по формуле

,                                                                     (1)

где - числовое значение оптической плотности, измеренной при ;     

- числовое значение молярной массы афлатоксина , г/моль (328 г/моль);