УНИФИЦИРОВАННАЯ МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ РАСТИТЕЛЬНОГО И ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ, ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЯХ, КОРМАХ, ВОДЕ, ПОЧВЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ

УТВЕРЖДЕНО 11.03.85 N 3222-85

В методических указаниях обобщены сведения о физико-химических свойствах ФОП, об основных растворителях и реактивах, применяемых для экстракции пестицидов и анализа их методами ТСХ и ГЖХ. Дана информация о способах очистки экстрактов в зависимости от свойств анализируемого материала, приведены сведения об основных приемах аналитического определения ФОП методами ТСХ и ГЖХ. Детально изложена методика хроматоферментного определения ФОП. Приведен перечень методик, утвержденных Министерством здравоохранения СССР, положенных в основу Унифицированной методики.

В разработке методики принимали участие специалисты многих стран.

В основу унифицированных методических указаний положены следующие методические указания, утвержденные Минздравом СССР: 30.07.73 N 1112; 22.09.75 N 1350; 20.12.76 NN 1357, 1544, 1547, 1551-1553, 1558; 18.02.77 NN 1772, 1785, 1788, 1798-1800, 1802; 5.06.78 NN 1881,1884; 27.09.78 NN 1911, 1916, 1920; 19.10.79 NN 2058, 2075, 2076, 2081, 2086, 2091, 2097; 20.01.80 NN 2132, 2133, 2136, 2143, 2144; 30.03.81 NN 2358, 2362; 06.08.81 NN 2414, 2419; 28.12.82 N 2647, 2649; 12.05.83 N 2782; 24.08.83 NN 2832, 2857; 12.04.85 N 3247; 08.04.87 NN 4321, 4361, 4364; 14.07.88 N 4667.

Краткая характеристика препаратов приведена в таблице 20.

Из таблицы исключены препараты, применение которых в СССР не разрешено.

20. Характеристика фосфорорганических пестицидов

     Методика определения фосфорорганических пестицидов методами ГЖХ и ТСХ

Принцип метода. Метод основан на экстракции ФОП из анализируемой пробы органическими растворителями (ацетон, хлористый метилен, хлороформ, дихлорметан или н-гексан). Растворитель выбирают в зависимости от анализируемого объекта и физико-химических свойств пестицида. Применение н-гексана в качестве экстрагента ФОП ограничивается низким коэффициентом распределения соединений в этом растворителе и рекомендуется только для афугана, бромофоса, гардоны, метафоса, карбофоса, цидеала. После очистки экстракта галогенсодержащие растворители упаривают досуха, так как их присутствие мешает дальнейшему газохроматографическому определению.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием селективных детекторов, различных неподвижных фаз при ГЖХ и различных систем подвижных растворителей и проявляющих реагентов при ТСХ. Некоторые производные симм-триазина мешают определению.

Приборы и посуда. Для экстракции и очистки экстрактов. Мерная посуда I класса точности. Воронки делительные на 1500-2000; 500; 200 мл. Источник УФ-света. Ротационный вакуумный испаритель с набором колб. Аппарат для встряхивания. Микросублиматор (рис.1). Колонки для адсорбционной хроматографии размерами 400х20, 300х18, 100х3 мм. Почвенное сито.

Рис.1. Прибор для микросублимации в вакууме (размеры в мм)

Для ГЖХ. Хроматограф с ДЭЗ или ПФД. Колонки стеклянные длиной 1,5 м с внутренним диаметром 3,5 мм. Микрошприцы на 10 мкл.

Для ТСX. Стеклянные пластинки размером 9х12 см (20х20 см). Пластинки "Силуфол". Камера для хроматографирования. Пульверизаторы. Эксикатор. Микропипетки (капилляры). Фен. Термостат.

Приготовление пластинок для ТСХ. Готовят сорбционную массу из расчета 14 г силикагеля, 1 г гипса, 40 мл воды (на 6-7 пластинок). Слой наносят общепринятым способом.

    Реактивы и растворы. Основной стандартный раствор препарата 100 мкг/мл в ацетоне или в н-гексане для веществ, растворяющихся в гексане (10 мг вещества в 100 мл раствора), можно хранить в холодильнике не дольше 1 мес. Стандартный раствор в бензоле с тем же содержанием можно хранить в холодильнике 6 мес. Рабочие стандартные растворы готовят разбавлением основного раствора в ацетоне, н-гексане или бензоле (содержание препарата 0,2; 0,5; 1 или 5 мкг/мл). Готовят в день употребления, хранят в холодильнике.

Для экстракции. Ацетон х.ч. н-Гексан х.ч. Бензол х.ч. Хлороформ ч. Хлористый метилен ч. Все растворители перегнанные, срок хранения 2 недели. Ацетонитрил ч., свежеперегнанный (хранить 1 сут). Метанол ч. Сульфат натрия безводный ч. и 2,5%-ный водный раствор. Хлорид натрия, 10%-ный водный раствор. Кислота хлороводородная, 0,1 н. водный раствор. Хлорид кальция, 0,05 н. водный раствор. Полистирольный гель (размер гранул 0,5-1 мм). Сополимер стирола с 2% дивинилбензола или амберлит ХАД-4.

Для очистки экстрактов. Уголь активированный БАУ, КАД, молотый. Оксид алюминия по Брокману II степени активности, нейтральный. Силикагель КСК (100-150 меш). Силоксид. Оксид магния ч.д.а. Диатомит, промытый кислотой.

Для метода ГЖX. Носитель хроматон N-AW-HMDS, хромосорб W, HP, газохром Q, варапорт 30 (0,16-0,20 мм или 80-100 меш). Стационарная фаза: неполярная DC-200, SE-30, SE-301, OV-101 и др.; среднеполярная OV-17, ХЕ-60, QF-1 или др. в количестве 2%, полидиэтиленгликольсукцинат (ПДЭГС) в количестве 2%; полифенилметилсиликон (ПФМС) в количестве 5%. Водород из баллона или получаемый из генератора водорода. Воздух из баллона или нагнетаемый компрессором. Азот особой чистоты (содержание не более 0,003%).

Для метода ТСХ. Силикагель марки КСК (100-150 меш). ЛС 5/40 (70-100 меш) или аналогичный сорбент. Оксид алюминия по Брокману II степени активности для хроматографирования. Сульфат кальция х.ч., прокаленный в течение 6 ч при 160 °С. Пластинки "Силуфол".

Для проявления хроматограмм используют следующие проявляющие реагенты. Раствор нитрата серебра в аммиаке и ацетоне. Нитрат серебра (0,5 г) растворяют в 5 мл дистиллированной воды, после чего прибавляют 7 мл аммиака и разбавляют раствор ацетоном до объема 100 мл. Готовят в день употребления. Хранят в темном месте. Применяют для ФОП, содержащих галоид.

Раствор нитрата серебра с 2-феноксиэтанолом. Нитрат серебра (0,5 г) растворяют в 5 мл дистиллированной воды, после чего прибавляют 1 мл 2-феноксиэтанола и разбавляют раствор ацетоном до объема 100 мл. Готовят в день употребления, хранят в темном месте.

Раствор хлорида палладия. Хлорид палладия (0,2 г) помещают в коническую колбу на 100 мл, прибавляют 40-50 мл 0,01 н. раствора хлороводородной кислоты, опускают колбу в нагретую до 50-60 °С водяную баню на 10-15 мин, затем охлаждают при комнатной температуре. Во время нагревания и охлаждения колбу с содержимым часто встряхивают. Через 2-3 ч после полного растворения реактива раствор переливают в цилиндр и доводят 0,01 н. раствором хлороводородной кислоты объем до 100 мл. Раствор хранят на холоде несколько месяцев.

Бромфеноловый проявитель. Смесь бромфенолового синего и нитрата серебра. Готовят два раствора: 1) 0,5%-ный водно-ацетоновый (1:3) раствор нитрата серебра; 2) 0,05%-ный бромфеноловый синий в 10 мл ацетона. Второй раствор разбавляют первым раствором до объема 100 мл. Хранят в темном прохладном месте. После обработки хроматограмм бромфеноловым проявителем осветляют фон обработкой пластин 2%-ным раствором лимонной кислоты или 5%-ным раствором уксусной кислоты. Хранят в темном месте. Применяют для обнаружения дитио- и тиофосфатов.

Раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина. 0,5%-ный раствор в гексане. Хранят в прохладном темном месте. 0,5%-ный раствор бриллиантового зеленого в ацетоне. 2%-ный раствор резорцина и 10%-ный раствор углекислого натрия (перед обработкой хроматограмм реактивы смешивают в соотношении 2:3) применяют для обнаружения трихлорфона и дихлорфоса. 4%-ный водный раствор едкого натра применяют для обнаружения ФОП, содержащих группы . 1%-ный раствор 4-(-нитро-бензил)пиридина в ацетоне и 10%-ный раствор тетраэтиленпентамина в ацетоне.

Хранение проб и подготовка их к анализу. Пробы животного происхождения следует хранить в холодильнике, анализировать в день отбора. Пробы воды, почвы и растительного материала можно хранить в холодильнике не более 5 дней. При определении дихлорфоса пробы необходимо анализировать в день отбора. Каждую пробу воды отбирают в стеклянную бутылку с притертой пробкой вместимостью не менее 1 л. Почву перед анализом просеивают через почвенное сито и анализируют в естественно-влажном состоянии. Параллельно определяют содержание влаги в почве в пересчете на воздушно-сухую массу.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Анализируемую пробу воды (1 л) помещают в делительную воронку на 1500-2000 мл, подкисляют 0,1 н. раствором (5-10 мл) до рН 4-5, хорошо перемешивают, добавляют 50 мл 10%-ного раствора хлорида натрия, экстрагируют из водной фазы хлороформом (хлористым метиленом или дихлорметаном) трижды (порциями по 100, 50 и 50 мл). Растворители перед экстракцией предварительно встряхивают в течение 2-3 мин с дистиллированной водой, затем воду отбрасывают. Экстракты объединяют, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют небольшими порциями в грушевидную колбу ротационного вакуумного испарителя вместимостью 50 мл. Порциями отгоняют растворитель с помощью ротационного испарителя до 0,5-1 мл. Оставшийся растворитель отгоняют досуха на воздухе при комнатной температуре. К сухому остатку пипеткой добавляют 1 мл ацетона, колбу закрывают пробкой, тщательно обмывают стенки колбы растворителем. В хроматограф вводят 2-5 мкл полученного раствора. После определения ФОП методом ГЖХ с ТИД или ПФД в пробирку помещают заплавленный сверху стеклянный капилляр и удаляют растворитель слабым нагреванием на водяной бане с температурой 40 °С до объема меньше 0,2-0,3 мл. Остаток количественно с помощью того же стеклянного капилляра, но с отломанным заплавленным концом переносят на хроматографическую пластинку.

Для извлечения некоторых ФОП (бромофос, пиразофос, паратионметил, малатион, тетрахлорвинфос, фентоат) в качестве экстрагента может быть также рекомендован н-гексан. В этом случае из подготовленной описанным выше способом пробы воды (рH 4-5) указанные пестициды экстрагируют н-гексаном трижды порциями по 100 мл и далее поступают с н-гексановым экстрактами так же, как с хлороформными.

Концентрировать ФОП из воды можно на сополимере с дивинилбензолом. 20 г сополимера стирола с 2% дивинилбензола (размер гранул 0,5-1,0 мм), предварительно отмытого бензолом, помещают в делительную воронку, куда наливают бензол (100 мл). После того как сополимер набухнет в органическом растворителе (1,5-2 ч), его переносят с водой в стеклянную колонку (высотой 40 см с диаметром 2 см). Высота слоя сополимера в колонке 21 см. Объем бензола, связанного сополимером, 72-75 мл. Через эту колонку пропускают 10 л воды, содержащей ФОП, со скоростью 80-100 мл/мин. Оставшуюся воду отсасывают водоструйным насосом, колонку на 30-60 мин заливают бензолом, а затем элюируют бензолом поглощенные вещества со скоростью 2 мл/мин. Собирают 100 мл элюата, упаривают растворитель и проводят определение с помощью ГЖХ или ТСХ.