МУК 4.2.2879-11

     

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТАФИЛОКОККОВЫХ ЭНТЕРОТОКСИНОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

Дополнения и изменения 1 к МУК 4.2.2429-08

     

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ Учреждением Российской академии медицинских наук Научно-исследовательским институтом питания (В.А.Тутельян, С.А.Шевелева, Н.Р.Ефимочкина, И.Б.Быкова, А.В.Булахов, А.А.Ананьева); ФГБУ "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи" Минздравсоцразвития (А.Л.Гинцбург, Ф.С.Флуер); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в г.Москве" (О.В.Захарова, Н.Я.Салова) при участии фирмы "BioMerieux" (Т.Н.Душкина).

2. РЕКОМЕНДОВАНЫ К УТВЕРЖДЕНИЮ Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 N 1).

3. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 26 июня 2011 г.

4. ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ с 26 июня 2011 г.

5. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

Внести дополнения и изменения в МУК 4.2.2429-08:

1. Раздел 1 "Область применения" дополнить пунктом 1.5 следующего содержания:

"1.5. Настоящие методические указания устанавливают также метод качественного обнаружения стафилококковых энтеротоксинов типов А, В, C1, С2, С3, D, Е (при совместном определении) в продовольственном сырье и пищевых продуктах животного происхождения (в молоке, молочных продуктах и сырах, в мясе и мясопродуктах; в птице и птицепродуктах) на основе фермент-связанного флюоресцентного иммуноанализа. Предел обнаружения стафилококковых энтеротоксинов при использовании данного метода составляет не менее 1,0 мкг/кг".

2. В разделе 3 "Сущность метода" пункт 3.1 изложить в следующей редакции:

"3.1. Методы основаны на детекции СЭТ, продуцируемых Staphylococcus aureus и другими коагулазоположительными стафилококками, в подготовленной соответствующим образом пробе пищевого продукта путем постановки иммунохимических тестов непрямого твердофазного иммуноферментного анализа, позволяющего обнаруживать эпидзначимые типы стафилококковых энтеротоксинов А (СЭА) или В (СЭВ) при раздельном определении (тест-системы по ВФС 42-235 и 42-236, ВС 89), а также энтеротоксины типов А, В, С, D и Е при совместном дифференцированном и недифференцированном определении".

3. Раздел 3 "Сущность метода" дополнить пунктами 3.5, 3.6 и 3.7 следующего содержания:

"3.5. Метод фермент-связанного флюоресцентного иммуноанализа (ФС-ИФА) стафилококковых энтеротоксинов основан на связывании СЭТ, экстрагированных из пищевого продукта, с антителами, адсорбированными на внутренней поверхности пипетирующего устройства (твердая фаза), удалении (отмывке) несвязанных компонентов, добавлении антител, конъюгированных щелочной фосфатазой и флюоресцентно-меченого субстрата (4-метил-умбелиферилфосфата). Интенсивность флюоресценции измеряется при длине волны 450 нм дважды для каждого образца: перед внесением субстрата (фон) и после накопления продуктов гидролиза - флюоресцентного 4-метил-умбеллиферола, который катализируется щелочной фосфатазой.

3.6. Для определения СЭТ методом фермент-связанного флюоресцентного иммуноанализа используют автоматические иммуноферментные анализаторы, позволяющие проводить измерение флюоресценции 4-метил-умбелиферола при 450 нм и тест-наборы, в состав которых входят наконечники, сенсибилизированные антителами к СЭТ типов А, В, С, D, Е, используемые в качестве пипетирующего устройства; и стрипы из 10 лунок, содержащие реагенты для проведения иммунофлюорес-центного анализа.

3.7. Для определения СЭТ методом фермент-связанного флюоресцентного иммуноанализа используют автоматические иммуноферментные анализаторы и тест-наборы, зарегистрированные в Российской Федерации в установленном порядке".

4. Раздел 4 "Требования к выполнению анализов" изложить в новой редакции:

"4. Требования к выполнению анализов

4.1. Условия безопасного проведения работ

При выполнении анализов необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.018 и электробезопасности по ГОСТ 12.1.019*, а также требования, изложенные в технической документации на приборы.

______________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 12.1.019-2009. - Примечание изготовителя базы данных.

Анализатор должен находиться в помещении, приспособленном для проведения микробиологических исследований. При работе с тест-наборами необходимо соблюдать следующие правила:

не использовать наконечники с поврежденной упаковкой;

не использовать поврежденные стрипы;

не использовать набор по истечении срока годности;

не смешивать реактивы из различных партий;

положительный контроль и стандарт содержат очищенный стафилококковый энтеротоксин. При работе соблюдать осторожность. Работать в защитной одежде, перчатках, очках. При попадании внутрь следует немедленно обратиться к врачу;

реактивы содержат натрия азид, который со свинцом и медью образует взрывчатые азиды металлов. Если жидкости, содержащие азид натрия, сливаются в водопроводную систему, необходимо промывать водосток во избежание их накопления;

пролитые жидкости необходимо тщательно вытирать после обработки детергентом и раствором бытового отбеливателя с содержанием натрия гипохлорита не менее 0,5%. Не автоклавировать растворы, содержащие отбеливатель;

анализаторы необходимо регулярно чистить и обеззараживать в соответствии с руководством по эксплуатации приборов.

4.2. Требования к квалификации специалистов

Выполнение измерений может проводить специалист, способный после освоения техники иммуноферментного анализа и приемов по эксплуатации аппаратуры получать результаты в пределах нормативов оперативного контроля погрешности.

4.3. Условия выполнения измерений

Измерения проводятся в нормальных лабораторных условиях:

температура окружающего воздуха (20±5) °С;

атмосферное давление (97±10) кПа;

относительная влажность (65±15)%".

5. Раздел 5 "Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы":

Пункт 5.1 "Средства измерений и вспомогательное оборудование" дополнить следующей позицией:

"Автоматический иммуноферментный анализатор типа VIDAS BioMerieux® или mini VIDAS BioMerieux ®, Франция или аналогичного типа".

Пункт 5.2 "Лабораторная посуда и инструменты" дополнить следующими позициями:

"Шприцы на 20 мл

Пипетка одноразовая на 500 мкл

Пакет для гомогенизации с фильтром

Центрифужные пробирки на 50 мл".

Раздел 5.3 "Реактивы и материалы" дополнить следующими позициями:

"Набор реагентов типа "VIDAS®Staph enterotoxin II (SET2), BioMerieux®, Франция или с аналогичными характеристиками

Набор реагентов типа RIDASCREEN® SET Total (R-Biopharm AG, Германия) или с аналогичными характеристиками

Индикатор рН (бумажный)

Трихлоруксусная кислота 90% (5,5 N)

Буфер ТРИС 0,3 М, рН 8,0

Раствор NaOH 1 N и 4 N

Соляная кислота 5 N".