ГОСТ Р ЕН 12857-2010

Группа Н09

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение цикламата. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии

Foodstuffs. Determination of cyclamate. High performance liquid chromatographic method

ОКС 67.050

ОКСТУ 9109

Дата введения 2012-01-01

     
Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИКОП Россельхозакадемии) на основе собственного аутентичного перевода на русский язык регионального стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки фруктов, овощей и грибов"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2010 г. N 565-ст

4 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту ЕН 12857:1999* "Продукты пищевые. Определение цикламата. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии" (EN 12857:1999 "Foodstuffs - Determination of cyclamate - High performance liquid chromatographic method").

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты Российской Федерации, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод определения цикламата с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий стандарт*:

_______________

* Таблицу соответствия национальных стандартов международным см. по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.

ЕН ИСО 3696 Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний (ИСО 3696:1997)

     3 Сущность метода

Метод основан на экстрагировании цикламата натрия из пробы водой, последующей химической конверсии цикламата в N,N-дихлорциклогексиламин и количественном определении N,N-дихлорциклогексиламина с помощью ВЭЖХ с применением хроматографической колонки с обращенно-фазовым сорбентом и спектрофотометрического детектирования при длине волны 314 нм.

     4 Реактивы

Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы установленной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по ЕН ИСО 3696. Стандартные растворы готовят с учетом массовой доли аналита в стандартном веществе.

4.1 Спирт метиловый (метанол) для ВЭЖХ.

4.2 Н-гептан для ВЭЖХ.

4.3 Эфир петролейный с диапазоном температур кипения 40 °С - 60 °С.

4.4 Натрий сернокислый безводный. При необходимости реактив промывают н-гептаном для удаления липофильных загрязнителей.

4.5 Натрий углекислый, раствор массовой концентрацией 50 г/дм.

4.6 Натрий хлорноватистокислый (гипохлорит натрия), раствор массовой концентрацией активного хлора 1,7 г/100 см

Раствор гипохлорита натрия массовой концентрацией активного хлора более 1,7 г/100 см разбавляют водой до получения раствора массовой концентрацией активного хлора 1,7 г/100 см. Массовую концентрацию активного хлора в приготовленном растворе регулярно контролируют по методике, приведенной в приложении А.

4.7 Кислота серная, раствор массовой долей 50%.

4.8 Натрия цикламат, стандартные растворы

898 мг цикламата натрия, измеренного с точностью до 0,1 мг, переносят в мерную колбу вместимостью 200 см, объем содержимого доводят водой до метки. Массовая концентрация циклогексиламино-N-сульфоновой кислоты в полученном основном стандартном растворе составляет 4000 мг/дм (коэффициент пересчета массы цикламата натрия в массу циклогексиламино-N-сульфоновой кислоты равен 0,8909). Для приготовления градуировочных растворов в мерные колбы вместимостью 100 см вносят 0,25, 1,0, 2,5, 5,0, 10,0 и 20,0 см основного стандартного раствора, объем содержимого доводят водой до метки. Массовая концентрация циклогексиламино-N-сульфоновой кислоты в полученных градуировочных растворах составляет соответственно 10, 40, 100, 200, 400 и 800 мг/дм.

4.9 Раствор Карреза N 1

15 г железистосинеродистого калия (K[FeCN]·3НО) растворяют в некотором количестве воды и разбавляют до объема 100 см.

4.10 Раствор Карреза N 2

30 г сернокислого цинка (ZnSO·7НО) растворяют в некотором количестве воды и разбавляют до объема 100 см.

4.11 Подвижная фаза для ВЭЖХ

Смешивают 80 объемных частей метанола с 20 объемными частями воды, полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр с подходящим размером пор (например, 0,45 мкм), после чего раствор дегазируют любым приемлемым способом, например, с помощью ультразвуковой бани.

Для достижения оптимального качества хроматографического разделения допускается использовать подвижную фазу с другим соотношением метанола и воды.

4.12 Раствор для кондиционирования хроматографической колонки - раствор этилендиаминтетрауксусной кислоты массовой концентрацией 10 г/дм

Приготовленный раствор перед употреблением фильтруют через мембранный фильтр с подходящим размером пор (например, 0,45 мкм), после чего раствор дегазируют любым приемлемым способом, например, с помощью ультразвуковой бани.

4.13 Целлюлоза порошкообразная массовой долей не менее 99,9%, промытая кислотой.

     5 Средства измерений и вспомогательное оборудование

Для проведения испытаний используют средства измерений и вспомогательное оборудование, в частности, перечисленные ниже.

5.1 Оборудование для ВЭЖХ

5.1.1 Хроматограф жидкостный, состоящий из насоса, устройства ввода пробы, спектрофотометрического детектора, пригодного для измерения оптической плотности при длине волны 314 нм (предпочтителен диодно-матричный детектор), самописца или интегратора, позволяющего измерять высоту и площадь хроматографических пиков.

5.1.2 Колонка хроматографическая аналитическая, заполненная обращенно-фазовым сорбентом с привитыми октадецильными группами (С18) размером частиц 5 мкм, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4 мм, снабженная защитной колонкой с обращенно-фазовым сорбентом (С18) размером частиц 5 мкм (применение защитной колонки рекомендуется при испытании любых проб твердой консистенции).

Критерием пригодности хроматографической колонки для данного вида анализа является разделение пиков анализируемого вещества и соседних пиков компонентов матрицы пробы на уровне базовой линии.

В случае наложения хроматографического пика аналита на пик какого-либо сопутствующего вещества матрицы пробы, обнаруживаемого при регистрации хроматограммы с использованием диодно-матричного детектора или спектрофотометрического детектора, позволяющего измерять аналитический сигнал одновременно при двух длинах волн, подбирают другую хроматографическую колонку, обеспечивающую необходимое качество хроматографического разделения.

5.2 Баня ультразвуковая.

5.3 Фильтры мембранные размером пор не более 0,45 мкм.

5.4 Устройство для фильтрования, снабженное держателем мембранных фильтров и пригодное для фильтрации и дегазирования подвижной фазы по 4.11 и раствора для кондиционирования колонки по 4.12.

5.5 Гомогенизатор.

5.6 Баня водяная, пригодная для поддержания температуры 60 °С.

5.7 Центрифуга лабораторная, обеспечивающая центробежное ускорение в основании центрифужных пробирок не менее 1400 g.

5.8 Пробирки центрифужные стеклянные вместимостью 50 см, снабженные пробками.

5.9 Воронки делительные вместимостью 50 и 100 см.

5.10 Бумага фильтровальная, обеспечивающая среднюю скорость фильтрации.

5.11 Фильтры для разделения фаз (по выбору пользователя).

     6 Процедура проведения анализа

6.1 Приготовление раствора пробы для анализа

6.1.1 При анализе жидких продуктов (например, осветленных фруктовых соков, фильтрованного огуречного рассола) пробу фильтруют, после чего разбавляют водой таким образом, чтобы ожидаемая массовая концентрация цикламата в растворе составляла около 400 мг/дм, или используют пробу без разбавления. При анализе твердых продуктов, дающих прозрачные водные растворы (например, леденцов), пробу растворяют в воде таким образом, чтобы ожидаемая массовая концентрация цикламата в растворе составляла около 400 мг/дм.