ГОСТ Р 53973-2010 Ферментные препараты для пищевой промышленности. Метод определения "бета"-глюканазной активности (с Изменением N 1)

     4 Метод определения ферментативной активности -глюканазы с субстратом -глюкан

4.1 Характеристика метода

4.1.1 Метод основан на количественном определении редуцирующих (восстанавливающих) сахаров, образующихся в результате действия фермента -глюканазы на -глюкан при температуре 50 °С.

4.1.2 За единицу -глюканазной активности (1 ед. ) принимают количество фермента, действующего на -глюкан, из ячменя с высвобождением 1 мкмоля восстанавливающих сахаров (в глюкозном эквиваленте), образующихся за 1 мин при стандартных условиях (температура 50 °С и значение рН 5,0).

4.1.3 Содержание редуцирующих сахаров, образующихся в результате ферментативной реакции, определяют колориметрическим методом, основанным на взаимодействии сахаров с реактивом Шомоди-Нельсона [2]. В результате этой реакции образуется соединение голубого цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию редуцирующих сахаров, образовавшихся в процессе ферментативной реакции. Интенсивность окраски полученных растворов измеряют на фотоэлектроколориметре при длине световой волны 610 нм; активность выражается в ед. -ГкС/г или см испытуемого препарата.

4.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы, материалы

4.2.1 Для определения -глюканазной активности используют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование, лабораторную посуду, реактивы, материалы:

- весы неавтоматического действия по ГОСТ Р 53228, с пределами абсолютной допускаемой погрешности ±0,5 мг;

- фотоэлектроколориметр (КФК-3) или спектрофотометр (СФ) любого типа, которые обеспечивают измерения при длине световой волны 610 нм с погрешностью измерения коэффициента пропускания не более 1% (не более 0,01 единицы оптической плотности);

- холодильник бытовой;

- рН-метр любого типа для измерения в диапазоне от 0 до 14 рН с пределом допускаемой погрешности в эксплуатации ±0,1 единицы рН;

- магнитную мешалку любой марки, которая обеспечивает скорость вращения до 800 мин;

- ультратермостат или водяной термостат с точностью регулирования температуры ±1 °С;

- лабораторную центрифугу любого типа, которая обеспечивает скорость вращения не менее 7000 мин;

- водяную баню любого типа, которая обеспечивает поддержание температуры (100±1) °С;

- секундомер с емкостью шкалы счетчика 1 мин, ценой деления 1 с и погрешностью ±1,5 с;

- пипетки автоматические вместимостью от 0,1 до 1,0 см, 1,0 см и от 0,2 до 5,0 см с наконечниками;

- встряхиватель V-3 типа Вортекс или аналогичный для перемешивания жидкости;

- термометры ртутные стеклянные лабораторные от 0 °С до 50 °С и от 0 °С до 100 °С с ценой деления 0,1 °С или 0,5 °С по ГОСТ 28498;

- ареометры общего назначения по ГОСТ 18481;

- стаканы и колбы стеклянные лабораторные В-1-150 ТС, В-1-800 ТС, Кн-1-100-14/23 ТС по ГОСТ 25336;

- стаканчики для взвешивания (бюксы) СВ-19/9 по ГОСТ 25336;

- воронки В-75-140 ХС по ГОСТ 25336;

- пробирки П1-14-120 ХС или П1-16-150 ХС по ГОСТ 25336;

- колбы мерные 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-200-2, 1-250-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770;

- цилиндры 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2 по ГОСТ 1770;

- пипетки стеклянные 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5, 1-2-2-10 по ГОСТ 29227;

- бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026;

- -глюкан из ячменя, содержание основного вещества не менее 95%;