ГОСТ Р 54065-2010 Средства лекарственные для ветеринарного применения пробиотические. Методы определения пробиотических микроорганизмов

     8 Методы посева на питательные среды

8.1 Поверхностный метод посева на плотные среды

8.1.1 На подсушенную питательную среду, подготовленную по 7.3, наносят жидкий препарат или разведение навески и немедленно равномерно растирают по поверхности с помощью стерильного стеклянного или пластикового шпателя. Посев проводят параллельно в две чашки Петри.

8.1.2 Засеянную поверхность подсушивают, выдерживая чашки в горизонтальном положении в течение 15 мин, и помещают в термостат, установленный на соответствующую температуру (кроме особо оговоренных случаев). Если наблюдается чрезмерное обезвоживание среды (например, при 55 °С или вследствие интенсивной циркуляции воздуха), чашки перед термостатированием неплотно укладывают в пластиковый пакет или аналогичное приспособление с тем же эффектом. В период термостатирования допускаются кратковременные колебания температуры, например во время таких обычных операций, как загрузка или разгрузка термостата.

8.1.3 В посевах на агаризованных средах для определения присутствия или подсчета количества молочнокислых микроорганизмов, бактерий рода Lactobacillus, Pediococcus стрептококков группы N рода Streptococcus, S.thermophilus ограничение доступа кислорода осуществляют методом, изложенным в ГОСТ 30425, или одним из указанных ниже способов:

- на застывшую питательную среду в чашках Петри наливают второй слой расплавленной и охлажденной до (45±1) °С агаризованной среды в количестве 5,0 см и оставляют до затвердения;

- чашки Петри помещают в газовую среду, состоящую из 95% газообразного азота и 5% углекислого газа;

- чашки Петри помещают в анаэростат, аппарат закрывают, с помощью вакуумного насоса создают вакуум 86,6-93,3 кПа;

- в каждую пробирку с жидкой средой добавляют стерильный жидкий парафин в количестве, необходимом для получения столба высотой около 2 см.

Чашки следует анализировать непосредственно после термостатирования. В других случаях, кроме особо оговоренных, их хранят не более 24 ч в холодильнике.

8.2 Глубинный метод посева в плотные среды

8.2.1 Жидкий препарат или разведение навески вносят параллельно в две чашки Петри и заливают не позднее чем через 15 мин расплавленной и охлажденной до температуры (45±1) °С питательной средой. Высота слоя питательной среды должна быть 4-5 мм.

8.2.2 Среду немедленно равномерно перемешивают с посевным материалом круговыми движениями чашки так, чтобы среда не вытекала из чашки и не загрязняла крышку. После застывания среды чашки с посевами вверх дном помещают в термостат.

8.3 Глубинный метод посева в полужидкие питательные среды

8.3.1 Готовят два ряда пробирок, содержащих полужидкую питательную среду (по 10 см в пробирке) для высева в них соответствующих разведений исследуемого препарата. Внесение посевного материала в питательную среду начинают с последнего разведения, внося в последнюю пробирку каждого из двух рядов питательной среды по 1 см последнего разведения препарата, затем таким же образом вносят по 1 см предыдущих разведений. При внесении разведений в питательную среду проводят тщательное перемешивание пипеткой, а затем круговыми движениями руки или с помощью шуттель-аппарата. Для каждого посева берут новую стерильную пипетку.