ГОСТ Р ИСО 21871-2010

Группа Н09,
             С19

     

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ

Метод обнаружения и подсчета наиболее вероятного числа Bacillus cereus

Microbiology of food and animal feeding stuffs. Most probable number count and detection method for Bacillus cereus

ОКС 07.100.30

ОКСТУ 9109;

             9209

Дата введения 2012-01-01

     

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ГНУ ВНИИКОП) и ОАО "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2010 г. N 557-ст

4 Настоящий стандарт является идентичным по отношению к международному стандарту ИСО 21871:2006* "Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод определения малых количеств презумптивных палочек Bacillus cereus. Метод подсчета и обнаружения наиболее вероятного количества" (ISO 21871:2006 "Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the determination of low numbers of presumptive Bacillus cereus - Most probable number technique and detection method".

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5 (пункт 3.5).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты Российской Федерации, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и корма для животных и устанавливает методы выявления и подсчета наиболее вероятного количества жизнеспособных презумптивных Bacillus cereus.

Данный метод не предусматривает дифференциации Bacillus cereus от других близких видов рода Bacillus, таких как Bacillus weihenstephanensis, Bacillus anthracis, Bacillus thuringiensis, Bacillus mycoides и Bacillus pseudomycoides.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ИСО 6887-1:1999 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений

ИСО 6887-2:2003 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 2. Специальные правила для приготовления мяса и мясных продуктов

ИСО 6887-3:2003 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 3. Специальные правила для приготовления рыбы и рыбных продуктов

ИСО 6887-4:2003 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 4. Специальные правила для приготовления продуктов, кроме молока и молочных продуктов, мяса и мясных продуктов и рыбы и рыбопродуктов

ИСО 7218:2007 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

ИСО 8261:2001 Молоко и молочные продукты. Общие правила приготовления проб для анализа, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований

ИСО/ТУ 11133-1:2009 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Правила приготовления и производства питательных сред. Часть 1. Общие правила по обеспечению качества приготовления питательных сред в лаборатории

ИСО/ТУ 11133-2:2003 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Правила приготовления и производства питательных сред. Часть 2. Практическое руководство по определению эффективности питательных сред

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1 презумптивные Bacillus cereus (presumptive Bacillus cereus): Микроорганизм, который образует типичные или атипичные колонии на поверхности селективной питательной среды и дает положительные реакции по морфологическим и биохимическим свойствам, установленным в настоящем стандарте.

Примечание - Для реализации метода испытаний данное определение презумптивных Bacillus cereus применяют для установленной процедуры идентификации.

     4 Сущность метода

4.1 Метод подсчета

4.1.1 Инокуляция трех пробирок с жидкой селективной обогащенной средой двойной концентрации [5.3.1.1 а)] установленным количеством первичного разбавления разведения (исходная суспензия).

4.1.2 Инокуляция трех пробирок с жидкой селективной обогащенной средой единичной нормальной концентрации [5.3.1.1 b)] установленным количеством первичного разбавления (начальная суспензия). Затем, в тех же условиях, инокуляция жидкой селективной обогащенной среды единичной концентрации [5.3.1.1 b)] установленными количествами десятичных разбавлений десятикратных разведений первичного разбавления (начальная суспензия).

4.1.3 Инкубация пробирок с жидкой селективной обогащенной средой двойной и единичной концентрации (5.3) в течение 48 ч при температуре 30 °С.

4.1.4 Инокуляция твердой селективной среды (5.4 или 5.5) из жидкой селективной обогащенной среды (5.3).

4.1.5 Инкубация твердой селективной среды (5.4 или 5.5) в течение 18-48 ч при температуре 37 °С (5.4) или 30 °С (5.5) и исследование чашек с целью проверки присутствия колоний, которые, согласно своим характеристикам, должны быть презумптивными бактериями Bacillus cereus.

4.1.6 Подтверждение принадлежности типичных колоний к презумптивным Bacillus cereus и наличия предполагаемых колоний при помощи гемолиза (9.1.5.3) или исследования под микроскопом (9.1.5.4).

4.1.7 Расчет наиболее вероятного количества презумптивных бактерий Bacillus cereus в выражении на грамм или на миллилитр пробы выбранных разбавлений с использованием таблиц наиболее вероятного количества.

4.2 Метод обнаружения

4.2.1 Инокуляция жидкой селективной обогащенной среды (5.3) установленным объемом начальной суспензии пробы для испытаний.

4.2.2 Инкубация пробирки в течение 48 ч при температуре 30 °С.

4.2.3 Инокуляция твердой селективной среды (5.4 или 5.5) из жидкой селективной обогащенной среды (5.3).

4.2.4 Инкубация твердой селективной среды (5.4 или 5.5) в течение 18-48 ч при температуре 37 °С (5.4) или 30 °С (5.5) и исследование чашек с целью проверки присутствия колоний, которые, согласно своим характеристикам, могут соответствовать презумптивным бактериям Bacillus cereus.

4.2.5 Подтверждение наличия предполагаемых колоний при помощи гемолиза (9.1.5.3) или исследования под микроскопом (9.1.5.4).

4.2.6 Результат приводится в форме "присутствие" или "отсутствие" презумптивных бактерий Bacillus cereus в граммах или миллилитрах (см) продукции.

     5 Питательные среды и реагенты

5.1 Общие положения

В лабораторной практике применяют ИСО 7218, ИСО/ТУ 11133-1 и ИСО/ТУ 11133-2.

5.2 Разведение - по ИСО 6887 (все части), ИСО 8261 и любому конкретному стандарту, распространяющемуся на исследуемую продукцию.

5.3 Жидкая селективная обогащенная среда: триптон-соевый полимиксиновый бульон (TSPB) по [1].

5.3.1 Основа среды

5.3.1.1 Состав

5.3.1.2 Приготовление

Ингредиенты или готовую базовую среду растворяют в колбе вместимостью 1 дм воды, нагревают на слабом огне до кипения и кипятят 2-3 мин при постоянном перемешивании. При необходимости корректируют рН так, чтобы после стерилизации он был равен 7,3±0,2 при температуре 25 °С.

Среды распределяют в объеме по 10 см [среда двойной концентрации (5.3.1.1 а)] и по 9 см [среда единичной концентрации (5.3.1.1 b)] в пробирки размером 16х160 мм (6.7).

Стерилизуют в автоклаве (6.1) при температуре 121 °С в течение 15 мин.

5.3.2 Раствор полимиксина В сульфата

5.3.2.1 Состав

5.3.2.2 Приготовление

Полимиксина В сульфат растворяют в воде. Стерилизуют путем фильтрации.

5.3.3 Полная среда

Непосредственно перед использованием добавляют 200 мкл (для среды двойной концентрации) или 100 мкл (для среды единичной концентрации) раствора полимиксина В сульфата (5.3.2) в каждую пробирку, содержащую базовую среду (5.3.1).

5.3.4 Проверка эксплуатационных характеристик с целью гарантии качества питательной среды

Определение селективности и продуктивности - по ИСО/ТУ 11133-1. Тестирование эффективности питательного триптон-соевого полимиксинового бульона (TSPB) проводится по ИСО/ТУ 11133-2 и в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1 - Результаты проверки эксплуатационных характеристик триптон-соевого полимиксинового бульона (TSPB)