МУК 4.2.026-95 Экспресс-метод определения антибиотиков в пищевых продуктах

2. Сущность метода

Методические указания содержат описание ускоренного метода качественного и количественного обнаружения антибиотиков в пищевых продуктах и других субстратах, основанного на подавлении антибиотиком дегидрогеназной активности тест-культур в жидкой питательной среде. (1)

Дегидрогеназы-ферменты активируют процессы дыхания в живой клетке. Повреждение дегидрогеназ приводит к нарушению окислительно-восстановительных процессов и гибели клетки.

Высокая чувствительность этих ферментов к неблагоприятным воздействиям использована для выявления повреждающего действия антибиотика на различные тест-культуры. В методе используется способность клеток тест-культур восстанавливать метиленовый синий в анаэробных условиях. Если антибиотик оказывает цитотоксическое действие, клетки тест-культур лишаются такой возможности и метиленовый синий не восстанавливается. Метиленовый синий играет в этой системе одновременно роль акцептора водорода и индикатора, позволяющего судить о повреждающем действии антибиотиков на клеточные дегидрогеназы за определенный отрезок времени.

Данные сравнительного изучения экспресс-метода с общепринятым (диффузии в агар) свидетельствуют о высокой степени корреляции (коэффициент Р=0,84-0,93 и значим с вероятностью 99,9%).

Преимущество экспресс-метода заключается в возможности получения ответа через 4-5 ч, относительной простоте и значительной экономии питательной среды.

Методика может быть осуществлена как в качественном, так и в количественном варианте, при этом при подсчете концентрации выявленного загрязнения использован титрационный принцип, в определенной степени облегчающий постановку анализа в баклабораториях и позволяющий получить достоверные результаты без построения стандартной кривой или расчета по таблицам активности антибиотиков.

Лабораторный контроль, позволяющий выявить непосредственные источники загрязнения, принимать меры, снижающие контаминацию продуктов и, соответственно, риск для потребителей, целесообразно, главным образом, осуществлять в первичном звене получения животноводческой продукции: на молочно-товарных фермах, птицефабриках, в убойных и мясоперерабатывающих цехах хозяйств и т.п., сельскохозяйственных предприятиях, получающих и перерабатывающих продовольственное сырье животного происхождения. Готовая животноводческая продукция также должна контролироваться путем периодического отбора на молочных заводах, мясокомбинатах, птицеперерабатывающих заводах и т.п.

Допустимое содержание антибиотиков в продуктах не должно превышать для тетрациклинов 0,01 ЕД, пенициллина 0,01 ЕД, для стрептомицина 0,5 ЕД на 1 г (мл) продукта. (2)

Метод состоит из нескольких этапов:

1. Подготовка проб к исследованию при качественном и количественном определении.

2. Получение и хранение взвеси клеток тест-культур.

3. Определение "рабочей дозы" тест-культур.

4. Определение концентрации антибиотиков и расчет активности.

5. Определение концентрации антибиотиков в испытуемом растворе.

6. Качественное определение антибиотиков.