ГОСТ Р 53773-2010 Продукция соковая. Методы определения антоцианинов

     5 Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

5.1 Сущность метода ВЭЖХ

Метод обращенно-фазовой ВЭЖХ с фотометрическим детектированием при 518 нм обеспечивает разделение и качественное определение антоцианинов в соковой продукции, имеющей красную, синюю и фиолетовую окраску, с целью установления таких нарушений, как добавление экстрактов и соков из других окрашенных фруктов и овощей и (или) избыточное разбавление соковой продукции.

Полученные хроматограммы сравнивают с хроматограммами аутентичных фруктовых соков и данными таблицы Б.2 приложения Б.

5.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы, материалы

5.2.1 Хроматограф жидкостный высокоэффективный со спектрофотометрическим детектором (рабочий диапазон длин волн поглощения от 200 до 600 нм) и программно-аппаратным комплексом сбора и обработки результатов типа "Millenium 2000".

5.2.2 Колонка аналитическая длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная октадецилсиликагелем размером частиц 5 мкм.

5.2.3 Шприц для ВЭЖХ вместимостью 10 и 20 мкл.

5.2.4 Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределами абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0,1 мг.

5.2.5 Фильтры мембранные с диаметром пор 0,2 и 0,45 мкм для фильтрования подвижной фазы и проб.

5.2.6 рН-метр с диапазоном измерений рН от 2 до 18; погрешность измерений ±0,01 ед. рН.

5.2.7 Пипетки градуированные 1-2-1, 1-2-2, 1-2-5, 1-2-1 и 1-2-25 2-го класса точности по ГОСТ 29227.

5.2.8 Колбы мерные вместимостью 25, 100 см с одной отметкой по ГОСТ 1770.

5.2.9 Емкости для жидких проб (виалы) вместимостью 2-6 см.

5.2.10 Центрифуга лабораторная с фактором разделения (g-фактор) 800-1000.

5.2.11 Посуда лабораторная стеклянная по ГОСТ 25336:

воронки лабораторные,

стаканы вместимостью 50, 100 и 1000 см.

5.2.12 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

5.2.13 Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652.

5.2.14 Ацетонитрил для ВЭЖХ по [1].

5.2.15 Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

5.3 Подготовка к проведению определения
     

    5.3.1 Подготовка проб для хроматографического определения

Для качественного определения антоцианинов в концентрированных соках и пюре взвешивают 1 г пробы с записью результата до третьего знака после запятой и пробу разбавляют в 5 см дистиллированной воды (пюре и соковую продукцию с высоким содержанием растворимых сухих веществ разбавляют дистиллированной водой в соотношении от 1:2 до 1:5). Подготовленную пробу для удаления мутной взвеси центрифугируют и фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,2 мкм.

Для качественного определения антоцианинов в другой соковой продукции, а также в соках прямого отжима 1 г пробы без предварительного разбавления центрифугируют и фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

При суммарном содержании антоцианинов в соке менее 0,1% пробу фильтруют через мембранный фильтр, не разбавляя.

5.3.2 Приготовление подвижной фазы для жидкостной хроматографии